各类化学成分分析.ppt

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1、各类化学成分分析1 1现在学习的是第1页，共77页讲授内容讲授内容第第1节节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析第第2节节 黄酮类成分分析黄酮类成分分析第第3节节 三萜皂苷类成分分析三萜皂苷类成分分析第第4节节 醌类成分分析醌类成分分析第第5节节 挥发性成分分析挥发性成分分析第第6节节 木脂素类成分分析木脂素类成分分析第第7节节 其它类型成分分析其它类型成分分析2 2现在学习的是第2页，共77页第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析概述概述理化性质理化性质鉴别鉴别含量测定含量测定3 3现在学习的是第3页，共77页一、概述一、概述生物碱生物碱是生物界是生物界除除生物体必需的含氮化合生物体必

2、需的含氮化合物（如氨基酸、蛋白质和物（如氨基酸、蛋白质和B族维生素等）之族维生素等）之外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有碱性。原子上的未共享电子对而大多具有碱性。含生物碱成分的含生物碱成分的常用中药常用中药：山豆根、制川：山豆根、制川乌、马钱子、延胡索、苦参、麻黄、黄连、乌、马钱子、延胡索、苦参、麻黄、黄连、黄柏、防己等黄柏、防己等4 4现在学习的是第4页，共77页小檗碱小檗碱麻黄碱麻黄碱乌头碱乌头碱水苏碱水苏碱现在学习的是第5页，共77页二、理化性质二、理化性质物理性状物理性状溶解性溶解性紫外光谱特征紫外光谱特征显色反应显色

3、反应6 6现在学习的是第6页，共77页物理性状物理性状u液体状的生物碱及个别小分子生物碱有挥发性液体状的生物碱及个别小分子生物碱有挥发性甚至升华性甚至升华性 如：麻黄碱具有挥发性如：麻黄碱具有挥发性 咖啡因具有升华性咖啡因具有升华性u 生物碱通常无色，但有长共轭结构，并有助生物碱通常无色，但有长共轭结构，并有助色团的，可显不同颜色。如：小檗碱黄色色团的，可显不同颜色。如：小檗碱黄色7 7现在学习的是第7页，共77页溶解性溶解性大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿、大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂乙醚、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂与酸结合成盐生水溶性增加，但酸不同，与酸结

4、合成盐生水溶性增加，但酸不同，生成的盐水溶性有差异生成的盐水溶性有差异季胺型生物碱、有氮氧配位键的生物碱季胺型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水。易溶于水。8 8现在学习的是第8页，共77页溶解性溶解性液体生物碱及一些小分子固体生物液体生物碱及一些小分子固体生物碱则既溶于水也可溶于有机溶剂碱则既溶于水也可溶于有机溶剂含有酸性官能团或酯键的生物碱还含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛性碱液可溶于一些碱液或热苛性碱液9 9现在学习的是第9页，共77页显色反应显色反应生物碱在一定生物碱在一定pH条件下与一些酸性染料条件下与一些酸性染料（多为磺酸肽类）生成有色配合物，可（多为磺酸肽类）

5、生成有色配合物，可被氯仿等有机溶剂定量提出。被氯仿等有机溶剂定量提出。结构中具有酯键的酯碱，如：乌头碱可结构中具有酯键的酯碱，如：乌头碱可与异羟肟酸铁试剂反应产生紫红色与异羟肟酸铁试剂反应产生紫红色1010现在学习的是第10页，共77页紫外光谱特征紫外光谱特征结构中具有共轭体系的生物碱均有紫外结构中具有共轭体系的生物碱均有紫外吸收。吸收。结构中的氮原子与发色团直接连接或参结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱，其吸收峰位置与测与发色团的生物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的定时溶剂的pH值有关。值有关。1111现在学习的是第11页，共77页三、鉴别三、鉴别沉淀法沉淀法薄层色谱法薄层色谱

6、法气相色谱法气相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法一般理化鉴别一般理化鉴别色谱鉴别色谱鉴别1212现在学习的是第12页，共77页1、沉淀反应、沉淀反应大多数生物碱在酸性水溶液可与某些试剂生成不溶于水的复盐或大多数生物碱在酸性水溶液可与某些试剂生成不溶于水的复盐或分子复合物。分子复合物。酸性酸性aq：KI-I2(棕红棕红)；BiI3KI(橘红黄橘红黄)；HgI22KI(类白类白)；硫氰酸铬铵硫氰酸铬铵(雷氏铵盐雷氏铵盐NH4Cr(NH3)2(SCN)4(红红)中性：苦味酸中性：苦味酸(三硝基苯酚三硝基苯酚)(黄黄)中药水浸液中蛋白质、多肽和鞣质等成分，也可与生物碱沉中药水浸液中蛋白质、多肽和鞣质

7、等成分，也可与生物碱沉淀试剂生成沉淀，需排除干扰，防止出现假阳性结果。淀试剂生成沉淀，需排除干扰，防止出现假阳性结果。季铵盐季铵盐剂剂1313现在学习的是第13页，共77页2薄层色谱法薄层色谱法吸附剂吸附剂：硅胶、氧化铝硅胶、氧化铝展开剂展开剂：多用：多用氯仿氯仿、苯苯等低极性溶剂，加入等低极性溶剂，加入其它溶剂调整其它溶剂调整展展开剂的开剂的极性极性。（由于硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在。（由于硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶板上能形成盐，使硅胶板上能形成盐，使Rf值很小或拖尾，形成复斑。在值很小或拖尾，形成复斑。在硅硅胶吸附胶吸附薄层中，常用薄层中，常用碱性系统碱性系统或在或在碱性环境碱

8、性环境下展开。）下展开。）显色剂：显色剂：改良碘化铋钾试剂改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾试剂后再，有时喷碘化铋钾试剂后再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更清晰；亦可用碘蒸气、喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更清晰；亦可用碘蒸气、硫酸铈、碘铂酸等。硫酸铈、碘铂酸等。1414现在学习的是第14页，共77页例：三妙丸中黄柏及小檗碱的鉴别例：三妙丸中黄柏及小檗碱的鉴别(苍术、黄柏、牛膝苍术、黄柏、牛膝)取取三三妙妙丸丸粉粉末末0.1g,加加乙乙醚醚10ml，超超声声处处理理15分分钟钟，滤滤过过，弃弃去去乙乙醚醚液液，残残渣渣加加甲甲醇醇5ml，超超声声处处理理15分分钟钟，滤滤过过，滤滤液液浓浓缩缩至至1ml

9、，作作为为供供试试品品溶溶液液。另另取取黄黄柏柏对对照照药药材材0.1g，同同制制成成对对照照药药材材溶溶液液。再再取取盐盐酸酸小小檗檗碱碱对对照照品品，加加甲甲醇醇制制成成每每1ml含含0.5mg的的溶溶液液，作作为为对对照照品品溶溶液液。吸吸取取供供试试品品溶溶液液2m ml、对对照照药药材材溶溶液液与与对对照照品品溶溶液液各各1m ml，分分别别点点于于同同一一硅硅胶胶G薄薄层层板板上上，以以苯苯-乙乙酸酸乙乙酯酯-甲甲醇醇-异异丙丙醇醇-浓浓氨氨试试剂剂(12 6 3 3 1)为为展展开开剂剂，置置氨氨蒸蒸气气预预饱饱和和的的展展开开缸缸内内，展展开开，取取出出，晾晾干干，置置紫紫外外

10、灯灯(365nm)检检视视，供供试试品品色色谱谱中中，在在与与对对照照药药材材色色谱谱相相应应的的位位置置上上，显显相相同同的的黄黄色色荧荧光光斑斑点点；在在与与对对照照品品色色谱谱相相应应的的位位置置上上，显显相同的一个黄色荧光斑点。相同的一个黄色荧光斑点。1515现在学习的是第15页，共77页2纸色谱法纸色谱法可用于可用于生物碱盐或游离碱生物碱盐或游离碱的鉴别。的鉴别。主要是以水为固定相的主要是以水为固定相的正相正相纸色谱法，分纸色谱法，分离效果常取决离效果常取决 于流动相的性质。于流动相的性质。BAW系统系统显色剂：基本和薄层色谱法相同，但含硫显色剂：基本和薄层色谱法相同，但含硫酸的试剂

11、不适用。酸的试剂不适用。1616现在学习的是第16页，共77页3高效液相色谱法高效液相色谱法依据：依据：tR条件不同时，可已知品作内标，条件不同时，可已知品作内标，采用峰面积或峰高加大法采用峰面积或峰高加大法优点：快速，灵敏、微量等优点：快速，灵敏、微量等1717现在学习的是第17页，共77页四、含量测定四、含量测定生物碱的含量测定方法早期常用生物碱的含量测定方法早期常用酸碱滴定酸碱滴定法、沉淀滴定法法、沉淀滴定法等经典的化学方法，近年等经典的化学方法，近年来多采用来多采用分光光度法、薄层色谱法及高效分光光度法、薄层色谱法及高效液相色谱法液相色谱法等等（一）总生物碱的含量测定（一）总生物碱的含

12、量测定（二）生物碱类单体成分的含量测定（二）生物碱类单体成分的含量测定1818现在学习的是第18页，共77页（一）总生物碱的含量测定（一）总生物碱的含量测定直接测定法直接测定法重量分析法重量分析法酸碱滴定法酸碱滴定法离子对萃取比色法离子对萃取比色法酸染料比色法酸染料比色法苦味酸盐比色法苦味酸盐比色法雷氏盐比色法雷氏盐比色法异羟肟酸铁比色法异羟肟酸铁比色法化学分析法化学分析法分光光度法分光光度法本法适用于处方药味较少、内成分本法适用于处方药味较少、内成分较简单的中药制剂较简单的中药制剂1919现在学习的是第19页，共77页酸碱滴定分析法酸碱滴定分析法u强碱滴定生物碱强碱滴定生物碱盐盐时，在时，在

13、7090的乙的乙醇介质中终点比在水中明显，因此常将生醇介质中终点比在水中明显，因此常将生物碱盐溶于物碱盐溶于70 90乙醇，再用标准碱乙醇，再用标准碱-乙醇液滴定。乙醇液滴定。u若选择的溶剂及指示终点方法合适，也可若选择的溶剂及指示终点方法合适，也可用非水滴定法进行。用非水滴定法进行。2020现在学习的是第20页，共77页酸碱滴定分析法酸碱滴定分析法指示终点方法指示终点方法电位法电位法指示剂指示剂水溶液中水溶液中非水溶液非水溶液溴酚蓝溴酚蓝甲基红甲基红溴甲酚蓝溴甲酚蓝酚酞酚酞溴酚蓝溴酚蓝甲基黄甲基黄结晶紫结晶紫净化净化-中性氧化铝；空白试验中性氧化铝；空白试验2121现在学习的是第21页，共7

14、7页例例 止喘灵注射液中总生物碱的含量测定止喘灵注射液中总生物碱的含量测定酸酸碱滴定法碱滴定法处方处方 麻黄麻黄 洋金花洋金花 苦杏仁苦杏仁 连翘连翘方法方法 精密量取止喘灵注射液精密量取止喘灵注射液10ml，置分液漏斗中，加，置分液漏斗中，加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液0.5ml，用三氯甲烷提取，用三氯甲烷提取4次，（次，（10ml、10ml、5ml、5ml）合并三氯甲烷液，置具塞锥形瓶中，精密）合并三氯甲烷液，置具塞锥形瓶中，精密加硫酸滴定液（加硫酸滴定液（0.01mol/L）10ml及新沸过的冷水及新沸过的冷水10ml，充分，充分振摇，加振摇，加茜素黄酸钠茜素黄酸钠指示剂指示剂1

15、-2滴，用氢氧化钠滴定液滴，用氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）滴定至淡红色，并将滴定结果用空白实验校正。）滴定至淡红色，并将滴定结果用空白实验校正。每每1ml硫酸滴定液相当于硫酸滴定液相当于3.305mg的麻黄碱（的麻黄碱（C10H15NO）。变色范围：变色范围：3.75.2黄黄紫紫2222现在学习的是第22页，共77页重量分析法重量分析法重量分析法重量分析法提取重量法提取重量法沉淀法沉淀法适用：混合碱、未知结构、适用：混合碱、未知结构、M差异大差异大优点：简便、不用换算因数无需知优点：简便、不用换算因数无需知M缺点：挥发性、碱性条件下可水解生物缺点：挥发性、碱性条件下可水解生物碱不适用；

16、取样大、操作易乳化、费时碱不适用；取样大、操作易乳化、费时优点：取样少、灵敏度高优点：取样少、灵敏度高缺点：计算复杂、操作繁琐缺点：计算复杂、操作繁琐2323现在学习的是第23页，共77页例例 昆明山海棠片中总生物碱成分的含量测定昆明山海棠片中总生物碱成分的含量测定重重量法量法处处方方 昆昆明明山山海海棠棠取取昆昆明明山山海海棠棠片片60片片，除除去去糖糖衣衣，研研细细，取取约约相相当当于于25片片的的量量，精精密密称称定定，置置200ml锥锥形形瓶瓶中中，加加适适量量硅硅藻藻土土（每每1g中中加加入入硅硅藻藻0.2g），混混匀匀，加加乙乙醇醇70ml，加加热热回回流流40分分钟钟，放放冷冷，

17、滤滤过过，滤滤渣渣再再加加乙乙醇醇50ml，加加热热回回流流30分分钟钟，放放冷冷，滤滤过过，合合并并滤滤液液，置置水水浴浴上上蒸蒸干干，残残渣渣加加盐盐酸酸溶溶液液（1100）30ml，置置水水浴浴上上搅搅拌拌使使溶溶解解，放放冷冷，滤滤过过，残残渣渣再再用用盐盐酸酸溶溶液液（1200）同同法法提提取取3次次（20ml、15ml、15ml），合合并并滤滤液液溶溶于于分分液液漏漏斗斗中中，加加氨氨试试剂剂使使溶溶液液呈呈碱碱性性，用用乙乙醚醚振振摇摇提提取取4次次（40ml、30ml、25ml、25ml），合合并并乙乙醚醚液液，用用水水振振摇摇洗洗涤涤2次次，每每次次10ml，乙乙醚醚液液滤滤

18、过过，滤滤液液置置已已在在100干干燥燥至至恒恒重重的的蒸蒸发发皿皿中中，在在低低温温水水浴浴上上蒸蒸去去乙乙醚醚，残残渣渣中中加加入入少少许许无无水水乙乙醇醇，蒸蒸干干，在在100干干燥燥至至恒恒重重，称定重量，计算，即得。称定重量，计算，即得。2424现在学习的是第24页，共77页2分光光度法分光光度法-直接测定法直接测定法不经过化学反应，利用生物碱物质自身的光吸收直接不经过化学反应，利用生物碱物质自身的光吸收直接进行比色测定的方法。进行比色测定的方法。一般用于药味较少，干扰不大的中药制剂中总生物碱一般用于药味较少，干扰不大的中药制剂中总生物碱的含量测定。的含量测定。如：戊己丸如：戊己丸2

19、525现在学习的是第25页，共77页（2）比色法）比色法生物碱本身具有的颜色生物碱本身具有的颜色与氧化剂产生颜色与氧化剂产生颜色因所具有的功能基与试剂反应产生颜色因所具有的功能基与试剂反应产生颜色根据生物碱的通性与酸性染料、雷氏盐、根据生物碱的通性与酸性染料、雷氏盐、苦味酸盐等结合成有色化合物，并能溶于苦味酸盐等结合成有色化合物，并能溶于有机溶剂中的有机溶剂中的2626现在学习的是第26页，共77页1）酸性染料比色法）酸性染料比色法应用本法的关键在于介质的应用本法的关键在于介质的pH、酸性染料、酸性染料的种类和有机溶剂的选择。的种类和有机溶剂的选择。常用的酸性燃料：甲基橙常用的酸性燃料：甲基橙

20、 溴香草酚蓝（溴香草酚蓝（BTB）溴甲酚绿等溴甲酚绿等2727现在学习的是第27页，共77页1）酸性染料比色法）酸性染料比色法-基本原理基本原理2828现在学习的是第28页，共77页1）酸性染料比色法）酸性染料比色法pH的选择：根据染料的性质及生物碱的碱性（的选择：根据染料的性质及生物碱的碱性（pKb）大小确定。一元）大小确定。一元5.26.4二元二元3.05.8常用的酸性染料：甲基橙、溴香草酚蓝（常用的酸性染料：甲基橙、溴香草酚蓝（BTB）、溴甲）、溴甲酚绿等酚绿等有机溶剂的选择原则：根据离子对与有机相能否形成氢键有机溶剂的选择原则：根据离子对与有机相能否形成氢键以及形成氢键能力的强弱，氯仿

21、等是常用的提取溶剂。以及形成氢键能力的强弱，氯仿等是常用的提取溶剂。在提取过程中，严防水分混入有机溶剂。在提取过程中，严防水分混入有机溶剂。2929现在学习的是第29页，共77页例例 风湿骨痛胶囊中乌头总生物碱的含量风湿骨痛胶囊中乌头总生物碱的含量测定测定酸性染料比色法酸性染料比色法方法方法 对照品溶液制备对照品溶液制备 精密称取经精密称取经1050C干燥至恒干燥至恒重的乌头碱对照品重的乌头碱对照品10mg，至，至100ml量瓶中，加量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含乌头碱中含乌头碱0.1mg）。）。3030现在学习的是第30页

22、，共77页标标准准曲曲线线的的制制备备 精精密密量量取取对对照照品品溶溶液液0 ml、1 ml、2 ml、3ml、4 ml、5 ml，分分别别置置于于分分液液漏漏斗斗中中，依依次次精精密密加加入入三三氯氯甲甲烷烷20ml，再再精精密密加加入入pH3.0醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液（称称取取无无水水醋醋酸酸钠钠0.15g，加加水水使使溶溶解解，加加冰冰醋醋酸酸5.6ml，用用水水稀稀释释至至500ml，摇摇匀匀，并并在在pH计计上上校校正正）10ml和和0.1%溴溴甲甲酚酚绿绿（取取溴溴甲甲酚酚绿绿0.2g加加0.05mol/L氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液3.2ml使使溶溶解解，用用水水稀稀释释至至20

23、0ml，摇摇匀匀）2 ml，强强力力振振摇摇5分分钟钟，静静置置20分分钟钟，分分取取三三氯氯甲甲烷烷液液，用用干干燥燥滤滤纸纸滤滤过过，以以相相应应试试剂剂为为空空白白，滤滤液液照照分分光光光光度度法法，分分别别在在412nm的的波波长长处处测测定定吸吸收收度度。以以吸吸收收度度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。3131现在学习的是第31页，共77页测测定定法法 取取装装量量差差异异项项下下的的内内容容物物，研研细细，取取1g，精精密密称称定定，置置具具塞塞锥锥形形瓶瓶中中，精精密密加加入入乙乙醚醚-三三氯氯甲甲烷烷-无无水水乙乙醇醇（16 8 1）

24、的的混混合合溶溶液液25ml和和氨氨试试液液1.5ml，摇摇匀匀，称称定定重重量量，于于快快速速混混匀匀器器上上振振荡荡三三次次，每每次次2分分钟钟，放放置置过过夜夜，称称定定重重量量，用用上上述述混混合合溶溶液液补补足足减减失失的的重重量量，再再于于快快速速混混匀匀器器上上振振荡荡2分分钟钟，静静置置，倾倾取取上上清清液液，精精密密量量取取5.0ml，置置分分液液漏漏斗斗中中，加加乙乙醚醚5ml，用用0.05mol/L的的硫硫酸酸溶溶液液提提取取4次次，每每次次10ml，分分取取硫硫酸酸液液，滤滤过过，合合并并滤滤液液，置置另另一一分分液漏斗中，液漏斗中，3232现在学习的是第32页，共77

25、页加加浓浓氨氨试试剂剂4ml，摇摇匀匀，用用三三氯氯甲甲烷烷提提取取4次次，每每次次10ml，分分取取三三氯氯甲甲烷烷层层，滤滤过过，合合并并滤滤液液，蒸蒸干干，残残渣渣于于105加加热热1小小时时，取取出出，放放冷冷，加加三三氯氯甲甲烷烷分分次次溶溶解解，转转移移至至25ml量量瓶瓶中中，加加三三氯氯甲甲烷烷至至刻刻度度，摇摇匀匀，精精密密量量取取20ml，置置分分液液漏漏斗斗中中，照照标标准准曲曲线线制制备备项项下下的的方方法法，自自“精精密密加加入入pH3.0醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液10.00ml”起起，依依法法测测定定吸吸收收度度，从从标标准准曲曲线线上上读读出出供供试试品品溶溶液液中

26、中乌乌头头碱碱的的量量（g/ml）计计算算，即得。即得。3333现在学习的是第33页，共77页 该该法法为为酸酸性性染染料料分分光光光光度度法法，其其水水相相pH的的选选择择是是离离子子对对萃萃取取法法取取得得成成功功与与否否的的关关键键，风风湿湿骨骨痛痛胶胶囊囊测测定定时时的的pH是是分分别别取取乌乌头头碱碱标标准准液液以以pH2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、5.8、6.0、6.2的的缓缓冲冲液液进进行行试试验验结结果果，表表明明以以pH3.0较较为为适适宜宜，在在该该条条件件下下测测定定供供试试液液吸吸收收度度较较大大，指指示示液液空空白白试试验验吸吸收收度度较较小

27、小，且且呈呈色色稳稳定定性较好。性较好。3434现在学习的是第34页，共77页2）苦味酸盐比色法）苦味酸盐比色法在在弱酸性或中性溶液弱酸性或中性溶液中生物碱可与苦味酸定量生成中生物碱可与苦味酸定量生成苦味酸盐沉淀，该沉淀可溶于氯仿等有机溶剂，也苦味酸盐沉淀，该沉淀可溶于氯仿等有机溶剂，也可以在碱性条件下解离释放出生物碱和苦味酸。可以在碱性条件下解离释放出生物碱和苦味酸。3535现在学习的是第35页，共77页3）雷氏盐比色法）雷氏盐比色法雷氏盐在雷氏盐在酸性介质酸性介质中可与生物碱类成分中可与生物碱类成分定量定量地生成难溶地生成难溶于水的有色合物。于水的有色合物。将沉淀过滤洗净后溶于丙酮（或甲醇

28、），将沉淀过滤洗净后溶于丙酮（或甲醇），直接直接比色法测比色法测定，换算成生物碱含量。定，换算成生物碱含量。也可精密加入过量的雷氏盐试剂，滤除生成的生物碱雷氏也可精密加入过量的雷氏盐试剂，滤除生成的生物碱雷氏盐沉淀，将滤液在盐沉淀，将滤液在520526nm（溶于甲醇时，其（溶于甲醇时，其max为为427nm）处进行比色，测定残存的过量的雷氏盐含）处进行比色，测定残存的过量的雷氏盐含量，量，间接间接计算生物碱的含量。计算生物碱的含量。3636现在学习的是第36页，共77页硫硫氰氰化化铬铵铬铵在丙在丙酮酮中的摩中的摩尔尔吸收系数吸收系数=106=1065 5（单盐单盐），故可根据其吸收，故可根据其

29、吸收值值A A按下式直接按下式直接测测定而不需定而不需绘绘制制标标准曲准曲线线。W W一被一被测测物重量（物重量（mgmg）M M一被一被测测物物质质的分子量的分子量V V一溶解沉淀所用丙一溶解沉淀所用丙酮酮的的mlml数数3737现在学习的是第37页，共77页雷氏盐比色法注意事项雷氏盐比色法注意事项u 雷氏盐的水溶液在室温可分解，故用时应新鲜配制，雷氏盐的水溶液在室温可分解，故用时应新鲜配制，沉淀也需在低温进行沉淀也需在低温进行u 供试品如为稀的水溶液（如注射剂等），沉淀前供试品如为稀的水溶液（如注射剂等），沉淀前应浓缩应浓缩,对于中药制剂含有干扰物质时，应事先经对于中药制剂含有干扰物质时，

30、应事先经过纯化处理过纯化处理u 雷氏盐的丙酮或丙酮一水溶液的吸收值，随时间而雷氏盐的丙酮或丙酮一水溶液的吸收值，随时间而有变化，故应尽快地测定。有变化，故应尽快地测定。3838现在学习的是第38页，共77页处处方方 益益母母草草 当当归归 人人参参 黄黄芪芪 何何首首乌乌 桃桃仁仁 蒲蒲黄黄 熟熟地地黄黄 香香附附 昆昆布布 白术白术 黑木耳黑木耳对对照照品品溶溶液液制制备备 取取盐盐酸酸水水苏苏碱碱对对照照品品适适量量，精精密密称称定定，加加0.1mol/L盐酸溶液制成每盐酸溶液制成每1ml含含1mg的溶液，即得。的溶液，即得。供供试试品品溶溶液液的的制制备备 取取装装量量差差异异下下的的内

31、内容容物物，研研细细，取取12g，精精密密称称定定，置置具具塞塞锥锥形形瓶瓶中中，精精密密加加入入乙乙醇醇50ml，超超声声处处理理30分分钟钟，滤滤过过，精精密密量量取取续续滤滤液液25ml，置置50ml烧烧杯杯中中，置置水水浴浴上上蒸蒸干干，精精密密加加入入0.1mol/L盐酸溶液盐酸溶液10ml使溶解，即得。使溶解，即得。例例 产妇康颗粒中益母草总生物碱的含量测定产妇康颗粒中益母草总生物碱的含量测定雷氏盐比色法雷氏盐比色法3939现在学习的是第39页，共77页测测定定法法 取取上上述述对对照照品品溶溶液液和和供供试试品品溶溶液液，各各加加活活性性炭炭0.5g，置置水水浴浴上上加加入入1分

32、分钟钟，搅搅拌拌，滤滤过过，滤滤液液分分别别置置25ml量量瓶瓶中中，用用0.1mol/L盐盐酸酸溶溶液液10ml分分次次洗洗涤涤烧烧杯杯和和滤滤器器，洗洗涤涤液液并并入入同同一一量量瓶瓶中中；另另取取0.1mol/L盐盐酸酸溶溶液液20ml置置另另一一25ml量量瓶瓶中中，作作为为空空白白溶溶液液。各各精精密密加加新新制制的的2%硫硫氰氰酸酸铬铬铵铵溶溶液液3ml，摇摇匀匀，加加0.1mol/L盐盐酸酸溶溶液液稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，置置冰冰浴浴中中放放置置1小小时时，用用干干燥燥滤滤纸纸滤滤过过，取取续续滤滤液液，以以0.1mol/L盐盐酸酸溶溶液液为为空空白白，在在525nm的的

33、波波长长处处分分别别测测定定吸吸收收度度，用用空空白白溶溶液液的的吸吸收收度度分分别别减减去去对照品与供试品的吸收度，计算，即得。对照品与供试品的吸收度，计算，即得。4040现在学习的是第40页，共77页4）异羟肟酸铁比色法）异羟肟酸铁比色法含含有有酯酯键键结结构构的的生生物物碱碱，在在碱碱性性介介质质中中加加热热，酯酯键键水水解解，产产生生的的羧羧基基与与羟羟胺胺反反应应生生成成异异羟羟肟肟酸酸，再再与与Fe3生生成成紫紫红红色色的的配配合合物物（异异羟羟肟肟酸酸铁铁），在在一一定定浓度下符合浓度下符合Beer定律，可用比色法进行含量测定。定律，可用比色法进行含量测定。4141现在学习的是第

34、41页，共77页（二）生物碱类单体成分的含量测定（二）生物碱类单体成分的含量测定1薄层色谱法薄层色谱法2高效液相色谱法高效液相色谱法3气相色谱法气相色谱法4242现在学习的是第42页，共77页1薄层色谱法薄层色谱法生物碱不具有紫外吸收或挥发性时可用本法测定。生物碱不具有紫外吸收或挥发性时可用本法测定。吸附剂、展开剂及显色方法与鉴别相似，但要求比鉴别严格。吸附剂、展开剂及显色方法与鉴别相似，但要求比鉴别严格。注注意意：使使用用改改良良碘碘化化铋铋钾钾等等作作为为显显色色剂剂时时，必必须须完完全全挥挥干干展展开开剂剂后后（尤尤其其在在碱碱性性环环境境下下展展开开时时）才才可可喷喷洒洒，否否则背景深

35、，反差小，影响测定。则背景深，反差小，影响测定。4343现在学习的是第43页，共77页例例 九分散中士的宁成分的含量测定九分散中士的宁成分的含量测定薄层扫描法薄层扫描法处方处方 马钱子粉马钱子粉 麻黄麻黄 乳香（制）乳香（制）没药（制）没药（制）取本品约取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加三氯甲烷，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加三氯甲烷20ml与浓与浓氨试液氨试液1ml，轻轻摇匀，称重，于室温放置，轻轻摇匀，称重，于室温放置24小时，再称重，补足三氯小时，再称重，补足三氯甲烷减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取续滤液甲烷减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取续滤液10ml，用硫酸，用

36、硫酸溶液（溶液（3100）分次提取，至生物碱提尽，合并硫酸液，置另一分液漏）分次提取，至生物碱提尽，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液使呈碱性，用三氯甲烷分次提取，合并液，蒸干，放冷，斗中，加浓氨试液使呈碱性，用三氯甲烷分次提取，合并液，蒸干，放冷，残渣中精密加三氯甲烷残渣中精密加三氯甲烷5ml使溶解，作为供试品溶液。另取士的宁对照品，使溶解，作为供试品溶液。另取士的宁对照品，加三氯甲烷制成每加三氯甲烷制成每1ml含含0.4mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各溶液各5l，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯一丙酮一乙醇

37、一浓氨薄层板上，以甲苯一丙酮一乙醇一浓氨试液（试液（16 12 1 4）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。照薄层色谱法）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。照薄层色谱法进行扫描，波长：进行扫描，波长：s=254nm，R=325nm，测量供试品吸收度积分值与对，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。照品吸收度积分值，计算，即得。4444现在学习的是第44页，共77页2高效液相色谱法高效液相色谱法以反相高效液相色谱法应用较多。以反相高效液相色谱法应用较多。在反相高效液相色谱中，由于硅胶表面残留硅羟基的影响，在反相高效液相色谱中，由于硅胶表面残留硅羟基的影响，使生物碱分析易产

38、生保留时间延长、峰形变宽、拖尾；可使生物碱分析易产生保留时间延长、峰形变宽、拖尾；可采取改进流动相、固定相等措施以克服游离硅羟基的影响，采取改进流动相、固定相等措施以克服游离硅羟基的影响，满足定量分析的要求。满足定量分析的要求。中药制剂中生物碱成分进行高效液相色谱法测定时，使中药制剂中生物碱成分进行高效液相色谱法测定时，使用较多的是紫外检测器。用较多的是紫外检测器。4545现在学习的是第45页，共77页例例 小孩清热止咳口服液中盐酸麻黄碱含量测小孩清热止咳口服液中盐酸麻黄碱含量测定定高效液相色谱法高效液相色谱法处方处方 麻黄、苦杏仁、石膏、甘草等麻黄、苦杏仁、石膏、甘草等色谱条件与系统适用性试

39、验色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈腈-0.1%磷酸溶液磷酸溶液(含含0.1%三乙胺三乙胺)（397）为流动相；检测波）为流动相；检测波长为长为205nm。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备对照品溶液的制备 取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液制成每盐酸溶液制成每1ml含含45g 的溶液，即得。的溶液，即得。4646现在学习的是第46页，共77页供供试试品品溶溶液液的的制制备备 精精密密量量取取本本品品5ml，加

40、加水水10ml及及浓浓氨氨水水0.5ml用用乙乙醚醚提提取取5次次（30ml，30ml，20ml，20ml，20ml），合合并并乙乙醚醚液液，加加盐盐酸酸乙乙醇醇溶溶液液（120）2 ml，混混匀匀，低低温温回回收收溶溶剂剂至至干干，残残渣渣加加乙乙醇醇5 ml使使溶溶解解，转转移移至至25ml量量瓶瓶中中，加加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，即得。盐酸溶液至刻度，摇匀，即得。测测定定法法 分分别别精精密密吸吸取取对对照照品品溶溶液液与与供供试试品品溶溶液液各各10l，注注入液相色谱仪，测定，即得。入液相色谱仪，测定，即得。4747现在学习的是第47页，共77页3气相色谱法气相色谱法只适

41、用于有挥发性、遇热不分解的生物碱类。只适用于有挥发性、遇热不分解的生物碱类。生物碱盐在急速加热过程中产生的酸对色谱柱和检测生物碱盐在急速加热过程中产生的酸对色谱柱和检测器不利，应该注意。器不利，应该注意。制备供试品溶液时一般采用冷提取，净化过程也要避免加制备供试品溶液时一般采用冷提取，净化过程也要避免加热，以防止成分流失，最后需用氯仿等低极性有机溶剂为热，以防止成分流失，最后需用氯仿等低极性有机溶剂为溶剂制备成供试液。溶剂制备成供试液。4848现在学习的是第48页，共77页第二节第二节 黄酮类成分分析黄酮类成分分析概述概述一般性质一般性质鉴别鉴别含量测定含量测定4949现在学习的是第49页，共

42、77页一、概述一、概述黄酮类化合物是指基本母核为黄酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮苯基色原酮类类化合物。化合物。现泛指两苯环通过中央三碳键相互联结而现泛指两苯环通过中央三碳键相互联结而成的一系列化合物。成的一系列化合物。在植物体内大部分与糖结合成苷，一部分在植物体内大部分与糖结合成苷，一部分以游离形式存在。以游离形式存在。5050现在学习的是第50页，共77页槲皮素槲皮素异槲皮素异槲皮素表儿茶素表儿茶素金丝桃苷金丝桃苷现在学习的是第51页，共77页二、一般性质二、一般性质溶解度溶解度酸碱性酸碱性紫外光谱特征紫外光谱特征5252现在学习的是第52页，共77页溶解度溶解度黄酮类化合物的溶解度

43、因结构及存在状态（苷或苷元，单糖黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元，单糖苷、双糖或三糖苷）不同而有很大差异。苷、双糖或三糖苷）不同而有很大差异。游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。乙醚等有机溶剂及稀碱液中。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不溶与苯、氯仿等。但难溶或不溶与苯、氯仿等。5353现在学习的是第53页，共77页酸碱性酸碱性酸酸性性：黄黄酮酮类类化化合合物物因因分分子子中中多多有有羟羟基基，故故显显酸酸性性，可可溶溶

44、于于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。碱碱性性：氧氧原原子子的的性性质质：黄黄酮酮类类化化合合物物分分子子中中-吡吡喃喃酮酮环环上上的的1位位氧氧原原子子，因因有有未未共共用用的的电电子子对对，故故表表现现出出微微弱弱的的碱碱性性，可可与与强强无无机机酸酸，如如浓浓硫硫酸酸、盐盐酸酸等等生生成成盐盐，常常表表现现出出特特殊殊的的颜颜色色，可可用于鉴别。用于鉴别。生成的盐极不稳定，加水后即可分解。生成的盐极不稳定，加水后即可分解。5454现在学习的是第54页，共77页显色反应显色反应黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚黄酮类化合物的颜色反应多与分

45、子中的酚羟基及羟基及-吡喃酮环有关。吡喃酮环有关。1还原反应还原反应2与金属盐类试剂的络合反应与金属盐类试剂的络合反应5555现在学习的是第55页，共77页1还原反应还原反应常用：与盐酸常用：与盐酸-镁粉（或锌粉）的反应。镁粉（或锌粉）的反应。反应时多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化反应时多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红合物显橙红-紫红色，少数显紫紫红色，少数显紫-蓝色，且蓝色，且B环上有环上有-OH或或-OCH3取代时，颜色即随之加深。取代时，颜色即随之加深。查耳酮、橙酮、儿茶素类则不发生色变。查耳酮、橙酮、儿茶素类则不发生色变。花青素及部分橙酮，查耳酮等在单纯浓

46、盐酸下也会发生色花青素及部分橙酮，查耳酮等在单纯浓盐酸下也会发生色变，须预先作一对照，以便排除。变，须预先作一对照，以便排除。5656现在学习的是第56页，共77页2与金属盐类试剂的络合反应与金属盐类试剂的络合反应黄黄酮酮类类化化合合物物分分子子中中有有游游离离的的3-OH、5-OH或或邻邻二二酚酚羟羟基基时时可可与与Al3、Zr4+、Pb2、Sr2+等等形形成成配配合合物物，这这些些配配合合物物有有的的产产生生荧荧光光或或颜颜色色加加深深（如如Al3、Zr4+），有有的的产产生生沉沉淀淀（如如Pb2、Sr2+）。）。Al3：1%AlCl3或或Al(NO3)3;黄色黄色(max=415nm)，

47、有荧光，有荧光Pb2：1%PbAc2或碱式或碱式PbAc2；黄黄红红，有荧光，有荧光Zr4+：2%ZrOCl2的的甲甲醇醇溶溶液液；枸枸椽椽酸酸，5-OH黄黄酮酮的的黄黄色色aq显著褪色；显著褪色；3-OH黄酮的黄酮的aq呈鲜黄色呈鲜黄色5757现在学习的是第57页，共77页紫外光谱特征紫外光谱特征因因有有2-苯苯基基色色原原酮酮的的基基本本结结构构，具具有有特特定定的的紫紫外外吸吸收收峰，两个较强的吸收带：峰，两个较强的吸收带：带在带在300400nm范围内，由范围内，由B环桂皮酰基引起。环桂皮酰基引起。带在带在240285nm范围内，由范围内，由A环上的苯甲酰基引起。环上的苯甲酰基引起。黄

48、黄酮酮类类化化合合物物当当加加入入一一些些移移位位剂剂如如甲甲醇醇钠钠、醋醋酸酸钠钠、氯氯化化铝铝等等，可可使使最最大大吸吸收收波波长长发发生生位位移移。选选择择性性提提高高，可可消除杂质的干扰，有利于含量测定。消除杂质的干扰，有利于含量测定。5858现在学习的是第58页，共77页三、鉴别三、鉴别（一）显色反应（一）显色反应（二）薄层色谱鉴别（二）薄层色谱鉴别5959现在学习的是第59页，共77页（一）显色反应（一）显色反应黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及羟基及-吡喃酮环有关。吡喃酮环有关。1还原反应还原反应2与金属盐类试剂的络合反应与金属盐类试剂

49、的络合反应6060现在学习的是第60页，共77页1还原反应还原反应-盐酸盐酸-镁粉（或锌粉）的反应镁粉（或锌粉）的反应方方法法 为为将将甲甲醇醇或或乙乙醇醇提提取取液液510ml，加加入入几几滴滴浓浓盐盐酸酸，然然后后加加入入少少许许镁镁（或或锌锌）粉粉（必必要要时时微微热热），如如果果有有黄黄酮酮、黄黄酮酮醇醇、二二氢氢黄黄酮酮、二二氢氢黄黄酮酮醇醇存存在在，数数分分钟钟后即可出现橙色红色。后即可出现橙色红色。此此反反应应要要先先加加盐盐酸酸再再加加镁镁粉粉，因因为为像像花花色色素素等等成成分分在在单单纯纯加加盐盐酸酸后后就就能能产产生生颜颜色色变变化化；为为避避免免在在该该反反应应中中供供

50、试试品品液液本身颜色的干扰，可注意观察上升的泡沫本身颜色的干扰，可注意观察上升的泡沫(阳性阳性)6161现在学习的是第61页，共77页例例 牛黄解毒片（黄芩）的鉴别：牛黄解毒片（黄芩）的鉴别：取取本本品品6片片，研研细细，加加乙乙醇醇10ml，温温热热10分分钟钟，滤滤过过，取取滤滤液液5ml，加加盐盐酸酸0.5ml与与少少量量镁镁粉粉，加加热热，溶溶液液显显红色。红色。6262现在学习的是第62页，共77页2与金属盐类试剂的络合反应与金属盐类试剂的络合反应例例 银黄注射液的鉴别：银黄注射液的鉴别：取取本本品品1ml于于试试管管中中，加加5%亚亚硝硝酸酸钠钠溶溶液液、10%硝硝酸酸铝铝溶溶液液