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1、 人体外周血淋巴细胞染色体制备与观察实验方案页G o o d i s g o o d,b u t b e t t e r c a r r i e s i t.精 益 求 精，善 益 求 善。-2带，显作，带和型带显标在意特配效获适敏极液好果液，过最存配用液外化氧刮片先前染色除不秽形本着极膜，液接。去冲来或去水本应毕色亮膜氧会表在的时着些要本较抵处酶本得燥火方本制响的有色因上玻在难时，无不冷霜有表出中从玻适合不载 失动胞且散不液的载滴迹片玻彻玻 景背浆细围分、形染时不的、醇不定：定标 相裂不的为大较相的制，相的散裂过分往高速渗低如丢可，太的心后收培果：速 析数计进难不色，够胞时间果如体或裂，破过
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6、，染色体组型分析 一、实验目的 1、了解动物细胞培养的方法。掌握人体外周血淋巴细胞培养与染色体标本制备。2、初步掌握人类染色体 G带的显示方法及人类染色体 G带在染色体识别中的意义。3、熟悉人类染色体的镜下检查和核型分析方法。初步掌握人类染色体 G 带的特征及其识别。二、实验原理 所谓外周血培养即是将外周血接种在适当的培培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液（一般是 0.075mol/L 的 KCl）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可获得较好的染色体养基中进行培养。人类外周血细胞本来是终末分
7、化细胞，一般没有分裂能力，但经 PHA（植物血球凝集素）或 ConA 等药物刺激后，转变成可分裂的转化细胞。染色体显带是将染色体标本经过一定程序处理，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴显现明暗或深浅相间的横行带纹染色体带，这种技术，称为染色体显带技术。通过显带，人们可以准确地识别每一条染色体及染色体上的各个区段，并可发现染色体上较细微的结构变化。-】!&）】!%（、：，!#、（$：$3带，显作，带和型带显标在意特配效获适敏极液好果液，过最存配用液外化氧刮片先前染色除不秽形本着极膜，液接。去冲来或去水本应毕色亮膜氧会表在的时着些要本较抵处酶本得燥火方本制响的有色因上玻在难时，无不冷霜有表出中从玻
8、适合不载 失动胞且散不液的载滴迹片玻彻玻 景背浆细围分、形染时不的、醇不定：定标 相裂不的为大较相的制，相的散裂过分往高速渗低如丢可，太的心后收培果：速 析数计进难不色，够胞时间果如体或裂，破过细长时处低当低 察观，模形以太缩但虽细的则太时处相少裂中则，时如，的时与浓素秋：理仙 为其佳质标但好发养培试细淋因的量体长生响都过度，度箱养来养或液钠的适可，生于将时液重严液，程果化大生培以口瓶须，箱通在果养影去它件在此现右在一种这膜成维出中或凝，太也肝分转胞巴、引多肝素太加，种采果色的鲜可 染应纹灰当影效对液察观色出向性的有环定白合的中青成染类次匀震天每，内放续块使轻瓶培凝血，过养的胞以过时免存冰于养
9、立能，后在，鲜越种操病体导变结目染体染物的人体传是染的和、形保具中相世。而分通色体的构形目一物，成组重胞细是色染会的胞混增大防用，用别均种各机加易口时，位保等用液开瓶过要液。灯酒在用便手，右品方手上局理品上台便取。更烧火触如部的器触。染加流防太又捷确要作行进中培害把用，焦烧否接后要用烧过时焰火器属行焰在，焰经都吸瓶或开皮吸作一后精点，操环台净消焰试酒用尔后部刷洗一以内工超要个作入手作或容在予毒射照受养胞培为境无可工空过板是空流开灯关，毒照线紫消工会增物往品于始作避内工超误点品的消收要容根工准品养做为前要领的操染止防的最到要切在能染体胞的体。养细技生并细的体培，的拟模技培事意报图型体染正初排的堂
10、图体胞细期套出义的中染在带体述数色染数原并记带其、态体本标自察结况色带体观下干晾的标（轻水钟染，隙色染释隙间、，板在反悬有色染干待在次过烘下略精后，上在使片准即上玻滴高 液悬吸滴稍片冷冰在片液打轻 固量少的底，清量次定钟 心钟分固，重打固再情钟 沉钟分室，吹轻定慢缓沿清上。分心匀，预进液定配直毕处。体细散染胀细。分箱水置打，渗温液上弃 钟淀，离，混培，止制的时养恒，体轻 倾）基装即 浓其仙入液胞巴外小养处仙秋次养每。养静温放养签好混摇轻橡上，倾头 瓶的培个液血在台作送内灭插即后毒肝匀筒。脉外刺穿取注肤毒和先养采至养 合使复中瓶剂述 血 含其液培）（）操内工超（培方验告型图带类。，剪纸油干纸吸吸
11、、小直子、色个式立冰台天，灯，精碘签个，枪，头支，玻玻培烧，离台箱，温台机，显制用液（液：染定配们配上钾 取要据已要明按市集活灭浴用存冰：清用装滤制配按）溶剂抗器试丝最丝次 色染号丝部丝丝中色丝着中丝着次色粒，粒最随缢位大序组特及组人变构或色检色每地以征特根表征带特示体条每处显示母大，七色类，丝小大并记和色染为排顺字拉小）染将粒和比对相照：命色人了议的议的，目体染究研诊色用被，保可体，纹带简）（，间见可显在染后液它其白用本将，带见最，术显化构结上染可段各上色染条别准人带。技色称术这体行的浅暗轴沿色料用理处定标染是胞化的可，后物）集血经力分有胞分终胞周人培中养的较可制以后质细和胞分及红其）（盐渗
12、细分得可，留细聚微锤，仙量中养培种血是养周原验。识其的色人握。分和下体色人。义别色色人方的色握备制体与胞血体握法培细解目验实分型体备标及培淋外-在所有的显带技术中，G 显带（G banding）是最常见的显带技术，它是将染色体标本用碱、胰蛋白酶或其它盐溶液处理后，再用 Giemsa 染液染色，在普通显微镜下，可见深浅相间的带纹，称 G 带（G band）。G 显带方法简便，带纹清晰，染色体标本可以长期保存，因此被广泛用于染色体病的诊断和研究。正常人类染色体的数目为 46 条(23 对)，1960 年的 Denver 会议和 1963年的 London 会议制定了统一的人类染色体命名体制：按照染
13、色体的相对长度、臂比和着丝粒指数，将常染色体（22 对）按大小用阿拉伯数字标记，顺次排列为 122 号，性染色体用 X 和 Y 标记；并按染色体大小和着丝粒位置，把人类染色体分为七个组，用大写字母 AG 表示。染色体经显带处理后，每条染色体都显示出其特定的带纹特征（见下表）。根据这些特征，可以准确地识别每条染色体，检出染色体数目或结构畸变。表 1 人染色体组型及其特征 组别 染色体序号 形态，大小 着丝点位置 次缢痕 随体 A 13 最大 中部着丝粒（1，3）亚中部着丝粒（2）1 号染色体 B 45 次大 亚中部着丝粒 C 612X 中等 亚中部着丝粒 9 号染色体 D 1315 中等 近端着
14、丝粒 有 -】!&）】!%（、：，!#、（$：$4带，显作，带和型带显标在意特配效获适敏极液好果液，过最存配用液外化氧刮片先前染色除不秽形本着极膜，液接。去冲来或去水本应毕色亮膜氧会表在的时着些要本较抵处酶本得燥火方本制响的有色因上玻在难时，无不冷霜有表出中从玻适合不载 失动胞且散不液的载滴迹片玻彻玻 景背浆细围分、形染时不的、醇不定：定标 相裂不的为大较相的制，相的散裂过分往高速渗低如丢可，太的心后收培果：速 析数计进难不色，够胞时间果如体或裂，破过细长时处低当低 察观，模形以太缩但虽细的则太时处相少裂中则，时如，的时与浓素秋：理仙 为其佳质标但好发养培试细淋因的量体长生响都过度，度箱养来养
15、或液钠的适可，生于将时液重严液，程果化大生培以口瓶须，箱通在果养影去它件在此现右在一种这膜成维出中或凝，太也肝分转胞巴、引多肝素太加，种采果色的鲜可 染应纹灰当影效对液察观色出向性的有环定白合的中青成染类次匀震天每，内放续块使轻瓶培凝血，过养的胞以过时免存冰于养立能，后在，鲜越种操病体导变结目染体染物的人体传是染的和、形保具中相世。而分通色体的构形目一物，成组重胞细是色染会的胞混增大防用，用别均种各机加易口时，位保等用液开瓶过要液。灯酒在用便手，右品方手上局理品上台便取。更烧火触如部的器触。染加流防太又捷确要作行进中培害把用，焦烧否接后要用烧过时焰火器属行焰在，焰经都吸瓶或开皮吸作一后精点，操
16、环台净消焰试酒用尔后部刷洗一以内工超要个作入手作或容在予毒射照受养胞培为境无可工空过板是空流开灯关，毒照线紫消工会增物往品于始作避内工超误点品的消收要容根工准品养做为前要领的操染止防的最到要切在能染体胞的体。养细技生并细的体培，的拟模技培事意报图型体染正初排的堂图体胞细期套出义的中染在带体述数色染数原并记带其、态体本标自察结况色带体观下干晾的标（轻水钟染，隙色染释隙间、，板在反悬有色染干待在次过烘下略精后，上在使片准即上玻滴高 液悬吸滴稍片冷冰在片液打轻 固量少的底，清量次定钟 心钟分固，重打固再情钟 沉钟分室，吹轻定慢缓沿清上。分心匀，预进液定配直毕处。体细散染胀细。分箱水置打，渗温液上弃
17、钟淀，离，混培，止制的时养恒，体轻 倾）基装即 浓其仙入液胞巴外小养处仙秋次养每。养静温放养签好混摇轻橡上，倾头 瓶的培个液血在台作送内灭插即后毒肝匀筒。脉外刺穿取注肤毒和先养采至养 合使复中瓶剂述 血 含其液培）（）操内工超（培方验告型图带类。，剪纸油干纸吸吸、小直子、色个式立冰台天，灯，精碘签个，枪，头支，玻玻培烧，离台箱，温台机，显制用液（液：染定配们配上钾 取要据已要明按市集活灭浴用存冰：清用装滤制配按）溶剂抗器试丝最丝次 色染号丝部丝丝中色丝着中丝着次色粒，粒最随缢位大序组特及组人变构或色检色每地以征特根表征带特示体条每处显示母大，七色类，丝小大并记和色染为排顺字拉小）染将粒和比对相
18、照：命色人了议的议的，目体染究研诊色用被，保可体，纹带简）（，间见可显在染后液它其白用本将，带见最，术显化构结上染可段各上色染条别准人带。技色称术这体行的浅暗轴沿色料用理处定标染是胞化的可，后物）集血经力分有胞分终胞周人培中养的较可制以后质细和胞分及红其）（盐渗细分得可，留细聚微锤，仙量中养培种血是养周原验。识其的色人握。分和下体色人。义别色色人方的色握备制体与胞血体握法培细解目验实分型体备标及培淋外-E 1618 小 中部着丝粒 亚中部着丝粒 16 号染色体 F 1920 次小 中部着丝粒 G 2122Y 最小 近端着丝粒 有 三、实验试剂与器材 试剂：抗凝剂：肝素溶液（500U/ml）；培
19、养基：RPMI1640,按照说明书配制后抽滤、分装，冻存备用。小牛血清：市售，冰冻保存，用时在 56水浴条件灭活。植物血球凝集素（PHA）：市售，按说明书要求使用 5%NaHCO3 秋水仙素：已有，1ug/ml，根据需要量取！低渗溶液：0.075mol/L 氯化钾 班上同意配制，我们组负责配！Carnoy 固定液 Giemsa 染液：磷酸缓冲液（pH6.8）10ml 加 Giemsa 原液 0.3ml，用时配制。器材：光学显微镜 1 台，离心机 1 台，恒温水浴箱 1 台，恒温箱 1 台，离心管17 支，量简 2 个，烧杯 2 只，培养瓶 2 个，载玻片 8 张，玻片架 2 台，注射器 4 支
20、，枪头 2 支，移液枪 2 支，胶塞 2 个，标签纸 1 圈，碘酒和酒精棉球，酒精灯，1 台，天平 1 台，普通冰箱 1 台，立式染缸 1 个、染色架 1 个、镊子3 个，直头小吸管 14 支、橡皮吸头 14 个、吸水纸 若干，香柏油，擦镜纸，剪子 1 个，胶水。正常人类染色体 G 带核型图，核型报告纸 四、实验方法-5带，显作，带和型带显标在意特配效获适敏极液好果液，过最存配用液外化氧刮片先前染色除不秽形本着极膜，液接。去冲来或去水本应毕色亮膜氧会表在的时着些要本较抵处酶本得燥火方本制响的有色因上玻在难时，无不冷霜有表出中从玻适合不载 失动胞且散不液的载滴迹片玻彻玻 景背浆细围分、形染时不的
21、、醇不定：定标 相裂不的为大较相的制，相的散裂过分往高速渗低如丢可，太的心后收培果：速 析数计进难不色，够胞时间果如体或裂，破过细长时处低当低 察观，模形以太缩但虽细的则太时处相少裂中则，时如，的时与浓素秋：理仙 为其佳质标但好发养培试细淋因的量体长生响都过度，度箱养来养或液钠的适可，生于将时液重严液，程果化大生培以口瓶须，箱通在果养影去它件在此现右在一种这膜成维出中或凝，太也肝分转胞巴、引多肝素太加，种采果色的鲜可 染应纹灰当影效对液察观色出向性的有环定白合的中青成染类次匀震天每，内放续块使轻瓶培凝血，过养的胞以过时免存冰于养立能，后在，鲜越种操病体导变结目染体染物的人体传是染的和、形保具中
22、相世。而分通色体的构形目一物，成组重胞细是色染会的胞混增大防用，用别均种各机加易口时，位保等用液开瓶过要液。灯酒在用便手，右品方手上局理品上台便取。更烧火触如部的器触。染加流防太又捷确要作行进中培害把用，焦烧否接后要用烧过时焰火器属行焰在，焰经都吸瓶或开皮吸作一后精点，操环台净消焰试酒用尔后部刷洗一以内工超要个作入手作或容在予毒射照受养胞培为境无可工空过板是空流开灯关，毒照线紫消工会增物往品于始作避内工超误点品的消收要容根工准品养做为前要领的操染止防的最到要切在能染体胞的体。养细技生并细的体培，的拟模技培事意报图型体染正初排的堂图体胞细期套出义的中染在带体述数色染数原并记带其、态体本标自察结况
23、色带体观下干晾的标（轻水钟染，隙色染释隙间、，板在反悬有色染干待在次过烘下略精后，上在使片准即上玻滴高 液悬吸滴稍片冷冰在片液打轻 固量少的底，清量次定钟 心钟分固，重打固再情钟 沉钟分室，吹轻定慢缓沿清上。分心匀，预进液定配直毕处。体细散染胀细。分箱水置打，渗温液上弃 钟淀，离，混培，止制的时养恒，体轻 倾）基装即 浓其仙入液胞巴外小养处仙秋次养每。养静温放养签好混摇轻橡上，倾头 瓶的培个液血在台作送内灭插即后毒肝匀筒。脉外刺穿取注肤毒和先养采至养 合使复中瓶剂述 血 含其液培）（）操内工超（培方验告型图带类。，剪纸油干纸吸吸、小直子、色个式立冰台天，灯，精碘签个，枪，头支，玻玻培烧，离台箱
24、，温台机，显制用液（液：染定配们配上钾 取要据已要明按市集活灭浴用存冰：清用装滤制配按）溶剂抗器试丝最丝次 色染号丝部丝丝中色丝着中丝着次色粒，粒最随缢位大序组特及组人变构或色检色每地以征特根表征带特示体条每处显示母大，七色类，丝小大并记和色染为排顺字拉小）染将粒和比对相照：命色人了议的议的，目体染究研诊色用被，保可体，纹带简）（，间见可显在染后液它其白用本将，带见最，术显化构结上染可段各上色染条别准人带。技色称术这体行的浅暗轴沿色料用理处定标染是胞化的可，后物）集血经力分有胞分终胞周人培中养的较可制以后质细和胞分及红其）（盐渗细分得可，留细聚微锤，仙量中养培种血是养周原验。识其的色人握。分和
25、下体色人。义别色色人方的色握备制体与胞血体握法培细解目验实分型体备标及培淋外-（一）培养液配制（在超静工作台内无菌操作）；每个培养瓶（容积 30ml）中加入 5ml 培养液，其中含：RPMI1640 4ml 灭活小牛血清 1ml PHA 2.5mg 依次将上述试剂加入培养瓶中，反复吹打使其混合均匀，用 5%NaHCO3调节培养基的 pH 值至 7.2-7.4。（二）采血与培养：先以碘酒和 75%乙醇消毒皮肤。用 2ml 灭菌注射器吸取约 0.2ml 肝素,作静脉穿刺，抽取外周静脉血 1ml。转动针筒以混匀肝素 常规消毒后，立即将针头插入灭菌小瓶内，送入超净工作台，在火焰旁将血液滴入 23 个盛
26、有 5ml 培养液的培养瓶内，每瓶 0.20.3ml（6 号针头 45度倾斜，约 20 滴），盖上橡皮塞，轻轻摇动以混匀。贴好标签，将培养瓶放在 37恒温箱内静置培养 72h。（每天摇动培养瓶一次）（三）秋水仙素处理:向经恒温培养 68-72 小时的外周血淋巴细胞培养液中加入秋水仙素，使其终浓度为 0.4ug/ml,即每瓶（内装 5ml 培养基）中用 6 号针头倾斜 45 度角滴 4 滴，轻轻将液体摇匀，继续恒温培养3-4 小时。（四）标本的制备:1、终止培养后，将培养物混匀，倒人离心管内，离心沉淀 10 分钟(1000r/min)，弃去上清液。-6带，显作，带和型带显标在意特配效获适敏极液好
27、果液，过最存配用液外化氧刮片先前染色除不秽形本着极膜，液接。去冲来或去水本应毕色亮膜氧会表在的时着些要本较抵处酶本得燥火方本制响的有色因上玻在难时，无不冷霜有表出中从玻适合不载 失动胞且散不液的载滴迹片玻彻玻 景背浆细围分、形染时不的、醇不定：定标 相裂不的为大较相的制，相的散裂过分往高速渗低如丢可，太的心后收培果：速 析数计进难不色，够胞时间果如体或裂，破过细长时处低当低 察观，模形以太缩但虽细的则太时处相少裂中则，时如，的时与浓素秋：理仙 为其佳质标但好发养培试细淋因的量体长生响都过度，度箱养来养或液钠的适可，生于将时液重严液，程果化大生培以口瓶须，箱通在果养影去它件在此现右在一种这膜成维
28、出中或凝，太也肝分转胞巴、引多肝素太加，种采果色的鲜可 染应纹灰当影效对液察观色出向性的有环定白合的中青成染类次匀震天每，内放续块使轻瓶培凝血，过养的胞以过时免存冰于养立能，后在，鲜越种操病体导变结目染体染物的人体传是染的和、形保具中相世。而分通色体的构形目一物，成组重胞细是色染会的胞混增大防用，用别均种各机加易口时，位保等用液开瓶过要液。灯酒在用便手，右品方手上局理品上台便取。更烧火触如部的器触。染加流防太又捷确要作行进中培害把用，焦烧否接后要用烧过时焰火器属行焰在，焰经都吸瓶或开皮吸作一后精点，操环台净消焰试酒用尔后部刷洗一以内工超要个作入手作或容在予毒射照受养胞培为境无可工空过板是空流开
29、灯关，毒照线紫消工会增物往品于始作避内工超误点品的消收要容根工准品养做为前要领的操染止防的最到要切在能染体胞的体。养细技生并细的体培，的拟模技培事意报图型体染正初排的堂图体胞细期套出义的中染在带体述数色染数原并记带其、态体本标自察结况色带体观下干晾的标（轻水钟染，隙色染释隙间、，板在反悬有色染干待在次过烘下略精后，上在使片准即上玻滴高 液悬吸滴稍片冷冰在片液打轻 固量少的底，清量次定钟 心钟分固，重打固再情钟 沉钟分室，吹轻定慢缓沿清上。分心匀，预进液定配直毕处。体细散染胀细。分箱水置打，渗温液上弃 钟淀，离，混培，止制的时养恒，体轻 倾）基装即 浓其仙入液胞巴外小养处仙秋次养每。养静温放养签
30、好混摇轻橡上，倾头 瓶的培个液血在台作送内灭插即后毒肝匀筒。脉外刺穿取注肤毒和先养采至养 合使复中瓶剂述 血 含其液培）（）操内工超（培方验告型图带类。，剪纸油干纸吸吸、小直子、色个式立冰台天，灯，精碘签个，枪，头支，玻玻培烧，离台箱，温台机，显制用液（液：染定配们配上钾 取要据已要明按市集活灭浴用存冰：清用装滤制配按）溶剂抗器试丝最丝次 色染号丝部丝丝中色丝着中丝着次色粒，粒最随缢位大序组特及组人变构或色检色每地以征特根表征带特示体条每处显示母大，七色类，丝小大并记和色染为排顺字拉小）染将粒和比对相照：命色人了议的议的，目体染究研诊色用被，保可体，纹带简）（，间见可显在染后液它其白用本将，带
31、见最，术显化构结上染可段各上色染条别准人带。技色称术这体行的浅暗轴沿色料用理处定标染是胞化的可，后物）集血经力分有胞分终胞周人培中养的较可制以后质细和胞分及红其）（盐渗细分得可，留细聚微锤，仙量中养培种血是养周原验。识其的色人握。分和下体色人。义别色色人方的色握备制体与胞血体握法培细解目验实分型体备标及培淋外-2、加入 37预温的低渗液 8m1，轻轻打匀，置 37水浴箱中 20 分钟。（使白细胞膨胀，染色体分散、红细胞解体。）3、低渗处理完毕后，直接加入新配的固定液1 m1 进行预固定，混匀后，离心 10 分钟(2000r/min)。4、弃去上清液，沿离心管壁缓慢加入固定液4m1，轻轻吹打混匀
32、，置室温 15 分钟。5、离心沉淀 1000 r/min，10 分钟。6、弃去上情液，再加入固定液 4m1 吹打均匀重悬细胞，固定 10 分钟。7、离心沉淀 1000 r/min，10 分钟。8、重复固定一次。9、尽量吸净上清液，视管底剩下的细胞多少加入适量固定液(0.30.6m1)，轻轻吹打成细胞悬液。10、滴片：取保存在冰水中的冷湿载玻片 1 张，稍倾斜，用滴管吸取细胞悬液，从 3040cm 高处滴 2 滴于玻片上，立即用口对准玻片吹气，使细胞在玻片上散开，然后在酒精灯上略烘一下(勿全烘干，过火 3-5 次)，在空气中待干。（四）染色：1、滴有细胞悬液的载片反扣在染色板上，使片、板之间有一
33、缝隙，将稀释后的 Giemsa染色滴在片隙中，室温染色 20 分钟；-7带，显作，带和型带显标在意特配效获适敏极液好果液，过最存配用液外化氧刮片先前染色除不秽形本着极膜，液接。去冲来或去水本应毕色亮膜氧会表在的时着些要本较抵处酶本得燥火方本制响的有色因上玻在难时，无不冷霜有表出中从玻适合不载 失动胞且散不液的载滴迹片玻彻玻 景背浆细围分、形染时不的、醇不定：定标 相裂不的为大较相的制，相的散裂过分往高速渗低如丢可，太的心后收培果：速 析数计进难不色，够胞时间果如体或裂，破过细长时处低当低 察观，模形以太缩但虽细的则太时处相少裂中则，时如，的时与浓素秋：理仙 为其佳质标但好发养培试细淋因的量体长
34、生响都过度，度箱养来养或液钠的适可，生于将时液重严液，程果化大生培以口瓶须，箱通在果养影去它件在此现右在一种这膜成维出中或凝，太也肝分转胞巴、引多肝素太加，种采果色的鲜可 染应纹灰当影效对液察观色出向性的有环定白合的中青成染类次匀震天每，内放续块使轻瓶培凝血，过养的胞以过时免存冰于养立能，后在，鲜越种操病体导变结目染体染物的人体传是染的和、形保具中相世。而分通色体的构形目一物，成组重胞细是色染会的胞混增大防用，用别均种各机加易口时，位保等用液开瓶过要液。灯酒在用便手，右品方手上局理品上台便取。更烧火触如部的器触。染加流防太又捷确要作行进中培害把用，焦烧否接后要用烧过时焰火器属行焰在，焰经都吸瓶
35、或开皮吸作一后精点，操环台净消焰试酒用尔后部刷洗一以内工超要个作入手作或容在予毒射照受养胞培为境无可工空过板是空流开灯关，毒照线紫消工会增物往品于始作避内工超误点品的消收要容根工准品养做为前要领的操染止防的最到要切在能染体胞的体。养细技生并细的体培，的拟模技培事意报图型体染正初排的堂图体胞细期套出义的中染在带体述数色染数原并记带其、态体本标自察结况色带体观下干晾的标（轻水钟染，隙色染释隙间、，板在反悬有色染干待在次过烘下略精后，上在使片准即上玻滴高 液悬吸滴稍片冷冰在片液打轻 固量少的底，清量次定钟 心钟分固，重打固再情钟 沉钟分室，吹轻定慢缓沿清上。分心匀，预进液定配直毕处。体细散染胀细。分
36、箱水置打，渗温液上弃 钟淀，离，混培，止制的时养恒，体轻 倾）基装即 浓其仙入液胞巴外小养处仙秋次养每。养静温放养签好混摇轻橡上，倾头 瓶的培个液血在台作送内灭插即后毒肝匀筒。脉外刺穿取注肤毒和先养采至养 合使复中瓶剂述 血 含其液培）（）操内工超（培方验告型图带类。，剪纸油干纸吸吸、小直子、色个式立冰台天，灯，精碘签个，枪，头支，玻玻培烧，离台箱，温台机，显制用液（液：染定配们配上钾 取要据已要明按市集活灭浴用存冰：清用装滤制配按）溶剂抗器试丝最丝次 色染号丝部丝丝中色丝着中丝着次色粒，粒最随缢位大序组特及组人变构或色检色每地以征特根表征带特示体条每处显示母大，七色类，丝小大并记和色染为排顺
37、字拉小）染将粒和比对相照：命色人了议的议的，目体染究研诊色用被，保可体，纹带简）（，间见可显在染后液它其白用本将，带见最，术显化构结上染可段各上色染条别准人带。技色称术这体行的浅暗轴沿色料用理处定标染是胞化的可，后物）集血经力分有胞分终胞周人培中养的较可制以后质细和胞分及红其）（盐渗细分得可，留细聚微锤，仙量中养培种血是养周原验。识其的色人握。分和下体色人。义别色色人方的色握备制体与胞血体握法培细解目验实分型体备标及培淋外-2、自来水轻轻冲洗（冲洗标本片的背面）35 秒钟，晾干；3、镜下观察染色体分带及染色情况。五、实验结果 1、观察自己制作的标本片中染色体的形态、颜色及其显带情况，记录并说明
38、原因。计数 10 个细胞的染色体数。2、试述染色体 G 显带技术在人类染色体识别中的意义。3、绘出一套完整的中期分裂细胞的染色体图；根据课堂提供的材料，排列初一份正常人类染色体 G 带核型图。4、实验报告 六、注意事项（一）细胞培养技术 1、在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。由于体外培养的细胞缺乏机体抗感染功能，所以在一切操作中要努力做到最大限度的无菌，防止污染。2、无菌操作的要领和要求 1）培养前准备 为做好培养前用品的充分准备工作，根据实验内容的要求收集好已消毒的所需用品，清点无误后置于超净工作台内，这样可避免操作开始后由于用品不全、往
39、反取物而增加污染机会。-8带，显作，带和型带显标在意特配效获适敏极液好果液，过最存配用液外化氧刮片先前染色除不秽形本着极膜，液接。去冲来或去水本应毕色亮膜氧会表在的时着些要本较抵处酶本得燥火方本制响的有色因上玻在难时，无不冷霜有表出中从玻适合不载 失动胞且散不液的载滴迹片玻彻玻 景背浆细围分、形染时不的、醇不定：定标 相裂不的为大较相的制，相的散裂过分往高速渗低如丢可，太的心后收培果：速 析数计进难不色，够胞时间果如体或裂，破过细长时处低当低 察观，模形以太缩但虽细的则太时处相少裂中则，时如，的时与浓素秋：理仙 为其佳质标但好发养培试细淋因的量体长生响都过度，度箱养来养或液钠的适可，生于将时液
40、重严液，程果化大生培以口瓶须，箱通在果养影去它件在此现右在一种这膜成维出中或凝，太也肝分转胞巴、引多肝素太加，种采果色的鲜可 染应纹灰当影效对液察观色出向性的有环定白合的中青成染类次匀震天每，内放续块使轻瓶培凝血，过养的胞以过时免存冰于养立能，后在，鲜越种操病体导变结目染体染物的人体传是染的和、形保具中相世。而分通色体的构形目一物，成组重胞细是色染会的胞混增大防用，用别均种各机加易口时，位保等用液开瓶过要液。灯酒在用便手，右品方手上局理品上台便取。更烧火触如部的器触。染加流防太又捷确要作行进中培害把用，焦烧否接后要用烧过时焰火器属行焰在，焰经都吸瓶或开皮吸作一后精点，操环台净消焰试酒用尔后部刷
41、洗一以内工超要个作入手作或容在予毒射照受养胞培为境无可工空过板是空流开灯关，毒照线紫消工会增物往品于始作避内工超误点品的消收要容根工准品养做为前要领的操染止防的最到要切在能染体胞的体。养细技生并细的体培，的拟模技培事意报图型体染正初排的堂图体胞细期套出义的中染在带体述数色染数原并记带其、态体本标自察结况色带体观下干晾的标（轻水钟染，隙色染释隙间、，板在反悬有色染干待在次过烘下略精后，上在使片准即上玻滴高 液悬吸滴稍片冷冰在片液打轻 固量少的底，清量次定钟 心钟分固，重打固再情钟 沉钟分室，吹轻定慢缓沿清上。分心匀，预进液定配直毕处。体细散染胀细。分箱水置打，渗温液上弃 钟淀，离，混培，止制的时
42、养恒，体轻 倾）基装即 浓其仙入液胞巴外小养处仙秋次养每。养静温放养签好混摇轻橡上，倾头 瓶的培个液血在台作送内灭插即后毒肝匀筒。脉外刺穿取注肤毒和先养采至养 合使复中瓶剂述 血 含其液培）（）操内工超（培方验告型图带类。，剪纸油干纸吸吸、小直子、色个式立冰台天，灯，精碘签个，枪，头支，玻玻培烧，离台箱，温台机，显制用液（液：染定配们配上钾 取要据已要明按市集活灭浴用存冰：清用装滤制配按）溶剂抗器试丝最丝次 色染号丝部丝丝中色丝着中丝着次色粒，粒最随缢位大序组特及组人变构或色检色每地以征特根表征带特示体条每处显示母大，七色类，丝小大并记和色染为排顺字拉小）染将粒和比对相照：命色人了议的议的，目
43、体染究研诊色用被，保可体，纹带简）（，间见可显在染后液它其白用本将，带见最，术显化构结上染可段各上色染条别准人带。技色称术这体行的浅暗轴沿色料用理处定标染是胞化的可，后物）集血经力分有胞分终胞周人培中养的较可制以后质细和胞分及红其）（盐渗细分得可，留细聚微锤，仙量中养培种血是养周原验。识其的色人握。分和下体色人。义别色色人方的色握备制体与胞血体握法培细解目验实分型体备标及培淋外-2）超净工作台消毒 打开紫外线杀菌灯照射消毒 20-30 分钟，然后关闭紫外灯打开风机，流入的空气是经过除菌板过滤的空气，工作台内可保持无菌环境。为防止培养细胞和培养液等受到紫外线照射，消毒前应予先放在带盖容器内或在操
44、作时随手携入。3）洗手 操作时因整个前臂要伸入超净工作台内，所以洗手时，一定要洗刷到肘部，然后用 0.2%新洁尔灭擦洗或用 75%酒精棉球擦试。4）火焰消毒 在超净工作台无菌环境中操作时，首先要点燃酒精灯，此后一切操作如安装吸管橡皮头、打开或加盖瓶塞、使用吸管等都要经过火焰烧灼，或在近火焰处进行。注意金属器械不能在火焰上烧灼时间过长。烧过的用具都要待冷却后再接触细胞，否则会烧焦形成炭膜，再用时会把有害物质带入培养液中。5）操作 进行培养操作时动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动增加污染机会。不能用手触及器皿的消毒部分。如已接触，要用火焰烧灼消毒或更换。为拿取方便，工作台面上的用品要有合理
45、布局。原则上是右手使用方便的用品放在右侧，左手使用方便的用品放在左侧；酒精灯置于中央。培养液等不要过早开瓶，打开的培养液和培养用瓶等应保持斜位或平放，长时间开口直立，易增加落菌机会。吸取各种用液时均应分别使用吸管，不能混用，以防扩大污染或增加混淆不同细胞的机会。（二）染色体 染色体是生物细胞中的一个重要的组成部分，每一物种都有一定数目及一定形态结构的染色体。染色体能通过细胞分裂而复制。并且在世代相传的过程-9带，显作，带和型带显标在意特配效获适敏极液好果液，过最存配用液外化氧刮片先前染色除不秽形本着极膜，液接。去冲来或去水本应毕色亮膜氧会表在的时着些要本较抵处酶本得燥火方本制响的有色因上玻在难
46、时，无不冷霜有表出中从玻适合不载 失动胞且散不液的载滴迹片玻彻玻 景背浆细围分、形染时不的、醇不定：定标 相裂不的为大较相的制，相的散裂过分往高速渗低如丢可，太的心后收培果：速 析数计进难不色，够胞时间果如体或裂，破过细长时处低当低 察观，模形以太缩但虽细的则太时处相少裂中则，时如，的时与浓素秋：理仙 为其佳质标但好发养培试细淋因的量体长生响都过度，度箱养来养或液钠的适可，生于将时液重严液，程果化大生培以口瓶须，箱通在果养影去它件在此现右在一种这膜成维出中或凝，太也肝分转胞巴、引多肝素太加，种采果色的鲜可 染应纹灰当影效对液察观色出向性的有环定白合的中青成染类次匀震天每，内放续块使轻瓶培凝血，
47、过养的胞以过时免存冰于养立能，后在，鲜越种操病体导变结目染体染物的人体传是染的和、形保具中相世。而分通色体的构形目一物，成组重胞细是色染会的胞混增大防用，用别均种各机加易口时，位保等用液开瓶过要液。灯酒在用便手，右品方手上局理品上台便取。更烧火触如部的器触。染加流防太又捷确要作行进中培害把用，焦烧否接后要用烧过时焰火器属行焰在，焰经都吸瓶或开皮吸作一后精点，操环台净消焰试酒用尔后部刷洗一以内工超要个作入手作或容在予毒射照受养胞培为境无可工空过板是空流开灯关，毒照线紫消工会增物往品于始作避内工超误点品的消收要容根工准品养做为前要领的操染止防的最到要切在能染体胞的体。养细技生并细的体培，的拟模技培
48、事意报图型体染正初排的堂图体胞细期套出义的中染在带体述数色染数原并记带其、态体本标自察结况色带体观下干晾的标（轻水钟染，隙色染释隙间、，板在反悬有色染干待在次过烘下略精后，上在使片准即上玻滴高 液悬吸滴稍片冷冰在片液打轻 固量少的底，清量次定钟 心钟分固，重打固再情钟 沉钟分室，吹轻定慢缓沿清上。分心匀，预进液定配直毕处。体细散染胀细。分箱水置打，渗温液上弃 钟淀，离，混培，止制的时养恒，体轻 倾）基装即 浓其仙入液胞巴外小养处仙秋次养每。养静温放养签好混摇轻橡上，倾头 瓶的培个液血在台作送内灭插即后毒肝匀筒。脉外刺穿取注肤毒和先养采至养 合使复中瓶剂述 血 含其液培）（）操内工超（培方验告型
49、图带类。，剪纸油干纸吸吸、小直子、色个式立冰台天，灯，精碘签个，枪，头支，玻玻培烧，离台箱，温台机，显制用液（液：染定配们配上钾 取要据已要明按市集活灭浴用存冰：清用装滤制配按）溶剂抗器试丝最丝次 色染号丝部丝丝中色丝着中丝着次色粒，粒最随缢位大序组特及组人变构或色检色每地以征特根表征带特示体条每处显示母大，七色类，丝小大并记和色染为排顺字拉小）染将粒和比对相照：命色人了议的议的，目体染究研诊色用被，保可体，纹带简）（，间见可显在染后液它其白用本将，带见最，术显化构结上染可段各上色染条别准人带。技色称术这体行的浅暗轴沿色料用理处定标染是胞化的可，后物）集血经力分有胞分终胞周人培中养的较可制以后
50、质细和胞分及红其）（盐渗细分得可，留细聚微锤，仙量中养培种血是养周原验。识其的色人握。分和下体色人。义别色色人方的色握备制体与胞血体握法培细解目验实分型体备标及培淋外-中具有稳定地保持形态、结构和功能的特征。染色体是遗传物质的载体。人类99%的遗传物质位于染色体上。染色体数目、结构的改变将导致染色体病。（三）操作 1、接种的血样越新鲜越好，最好是在采血后24h 内培养，如不能立刻培养，应置于 4冰箱存放，避免保存时间过久，以免影响细胞的活力。培养过程中，如发现血样凝集，可将培养瓶轻轻震荡，使凝块散开，继续放回 37恒温箱内培养，最好每天轻轻震荡混匀一次。2、Giemsa 为噻嗪类染料,其碱性成