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1、临床微生物检验细菌整理（球菌）菌群 形态结构 培养特性 菌落特征 生化反应 直接检查与分离培养 鉴定 药敏试验 致病因素 致病类型 其他 葡萄球菌属 G+球菌，呈单个、成双、短链（液体培养基或脓汁中）或成簇排列呈葡萄串样，无鞭毛和芽孢，某些菌株能形成荚膜 兼性厌氧菌，对营养要求 不 高，最 适 温 度3537，最适pH7.47.6，抵抗力强，耐干燥 普通培养基：23 不透明的圆形凸起菌落，产生金黄色、白色、柠檬色等色素金葡菌血琼脂平板上菌落周围有透明溶血环（溶血）能在含 10%15%NaCl 琼脂中生长（大便发生菌群失调，可用）甘露醇平板上为黄色菌落 触酶试验（+）发酵甘露醇 氧 化 酶 试
2、验（）显微镜检查、抗原检测、核酸检测 凝固酶试验：玻片法结合型凝固酶，试管法分泌型凝固酶，不管玻片法为阴性或阳性均需做试管法（金葡菌、中间型（+），路登葡萄球菌玻片法（+）、试管法（）常规：-内酰胺类抗菌药 可诱导-内酰胺酶的检测：当葡萄球菌对青霉素表现为敏感 时（纸 片 法 或MIC）进行，阳性者报告细菌对不耐酶青霉素耐药 酶类：凝固酶（结合凝固酶、游离凝固酶）、耐热核酸酶、透明质酸酶、磷脂酶 毒素：葡萄球菌溶素、肠毒素、毒性休克综合征毒素、杀白细胞毒素、表皮剥脱毒素 化脓性疾病 毒素性疾病 医院感染 常见 G+球菌属间的鉴别试验：触酶试验七叶苷试验6.5%Nacl 生长试验 MRS甲氧西林
3、耐药的葡萄球菌 MRSA甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌 MRSCN 甲氧西林耐药的凝固酶阴性葡萄球菌 MRSE 甲氧西林耐药的表皮葡萄球菌 链球菌属 G+球菌，球形或卵圆形，呈链状排列。肺炎链球菌呈矛尖状，宽端相对尖端向外，成双排列，无芽孢，无动力，有荚膜和黏液层 兼性厌氧菌，肺炎链球菌和草绿色链球菌某些种需要CO2 促进其生长。营养要求高，须加入血液、血清。最适温 度3537 ，pH7.47.6 血平板上形成灰白色，透明或半透明，表面光滑的小菌落不同菌种的菌落可分别形成、三种溶血现象（A 群：菌落小、针尖大小、溶血圈大，溶血；B 群：透明溶血，溶血圈较小，菌落较大）肺炎链球菌因荚膜多糖是菌落呈
4、黏液状，中心凹陷的脐窝状菌落液体培养基：絮状和颗粒沉淀 触酶试验（）显微镜检查、抗原检测（咽拭标本的 A 群和女性生殖道标本的 B群）、荚膜肿胀试验（肺炎链球菌）、凝集试验、ELISA 试验 初步鉴定：G+球菌，链状或短链状排列，触酶试验阴性，6.5%NaCl不生长，可确定为链球菌属溶血性链球菌鉴定：Lancefield 群特异性抗原鉴定、PYR 试验、杆菌肽敏感试验（A 群对 0.04U 杆菌肽几乎全部敏感，A 群筛选试验）、VP试验（溶血的大小两种不同菌落）、CAMP 试验（无乳链球菌的初步鉴定）非溶血性链球菌鉴定草绿色链球菌的鉴定 菌体细胞壁成分 侵袭性酶 外毒素：链球菌溶素、致热外毒素
5、（是人类猩红热的主要致病物质）侵袭性疾病 毒素性疾病 变态反应性疾病 分类：溶血性链球菌（A、C、G 群）：A群链球菌也称化脓性链球菌或溶血性链球菌，是人类链球菌中致病力最强的细菌B 群溶血性链球菌溶血性链球菌（甲型溶血性）不溶血 D 群链球菌 非溶血性链球菌鉴定：菌种 Optochin敏 感 试验 胆 汁 溶菌试验 七 叶 苷试验 肺炎 S+草绿色 R 牛 R +肠球菌属 G+球菌，呈单个，成对或短链状排列，呈球杆状；液体培养基呈卵圆形、链状排列。无芽孢和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛 兼性厌氧，最适生长温度 35，多数菌株在10和 45均能生长。营养要求不高。耐高盐、高碱、高胆汁。肠球菌能分解七
6、叶苷产生黑色菌落 触酶试验（）、胆汁七叶苷和PYR（+）、6.5%NaCl肉汤中能生长 菌种鉴定有赖于糖代谢实验，根据甘露醇、山梨糖和精氨酸的代谢分5 群 1）敏感结果，且作用于细胞壁的药物也敏感，两者联合可出现协同作用。2）耐药结果，则与作用于细胞壁的药物无协同作用。头孢菌素、氨基糖苷类、克林霉素和复方新诺明体外可显示敏感，但临床治疗无效。需进行-内酰胺酶测定。对于严重感染，需进行氨基糖苷类高水平耐药试验（HLAR）表面黏附素 炎症调节因子 毒素 泌尿系感染心内膜炎腹膜炎牙髓疾病 奈瑟菌属 G-双球菌，菌体直径 0.61.5 m，形似双肾或咖啡豆样，凹面相对，成双排列，无动力，无芽孢，有写菌
7、种形成荚膜 最适生长温度 3537，低于 30不生长需氧生长，初分离需要 5%7%CO2 和高湿度刺激生长需添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏感，需加可溶性淀粉 血琼脂或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润或半透明、直径 12 的不溶血、圆形、灰蓝色菌落液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜 氧化酶（+）触酶（+）硝酸盐还原（-）多糖合成（-）DNA 酶（-）革兰染色显微镜检查，抗原检测和核酸检测。初步鉴定：直径 12、灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落，G-双球菌，氧化酶和触酶试验（+）最终鉴定：葡萄糖和麦芽糖发酵试验（+），其他糖类发酵（）可确定为脑膜炎；葡萄糖发酵试验（+），其他糖类（）可确定为淋
8、病 脑膜炎奈瑟菌：荚膜、菌毛、内毒素 淋病奈瑟菌：菌毛、脂多糖、IgA1蛋白酶、外膜蛋白 P 脑膜炎奈瑟菌：流行性脑脊髓膜炎淋病奈瑟菌：性传播疾病 1、人是脑膜炎奈瑟菌的唯一宿主。2、报告时的注意事项错误的鉴定结果可带来社会和法医学麻烦。涂片检查报告需注明细菌在细胞内或细胞外，并报告细菌数量。五管糖试验 葡萄 麦芽 乳糖 蔗糖 果糖 脑+淋+卡他莫拉菌 G-双球菌，直径0.51.5m 血琼脂和巧克力琼脂平板上生长良好，3524h孵育后菌落直径13，灰白色、光滑 氧化酶、触酶、硝酸盐还原、DNA 酶（+）不发酵糖类产酸 三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验（+）可与奈瑟菌属鉴别。可产生诱导型-内酰胺
9、酶 临床微生物检验细菌整理（肠杆菌科）菌群 形态结构 培养特性 菌落特征 生化反应 直接检查与分离培养 鉴定 致病因素 致病类型 其他 概述 G-直杆菌或球杆菌，无芽孢，多有鞭毛，能运动，致病性菌株多有菌毛 兼性厌氧，营养要求不高。普通培养基和麦康凯培养基上生长良好。抵抗力：1）不耐热和干燥；耐低温。2）对一般化学消毒剂敏感。3）耐胆盐，并在一定程度上可抵抗染料的抑菌作用，此特性已被用于制作肠道选择培养基。发酵葡萄糖（产酸或产气）触酶（+）氧化酶（）硝酸盐还原试验（+）显微镜检查 肠外表本：一般采用血琼脂或巧克力琼脂 粪便标本：针对沙门菌和志贺菌选择 SS 培养基 革兰阴性杆菌 葡萄糖发酵(O
10、/F 或 H-L)+-非发酵菌 氧化酶试验 -+肠杆菌科 弧菌科 肠道外感染：除志贺菌较少引起肠道外感染，肠杆菌科许多细菌可引起肠道外各系统感染。鼠疫耶尔森菌引起烈性传染病鼠疫。肠道感染：主要引起各种急、慢性腹泻、食物中毒、肠热症等。抗原成分：包括菌体抗原（O）、鞭毛抗原（H）和表面抗原。菌体抗原（O）：是细菌细胞壁成分，化学成分是脂多糖,脂多糖分子是一个以核心多糖为中心的三层结构，内侧的脂类 A 为内毒素的毒性成分，外侧的特异多糖决定 O 抗原的特异性。鞭毛抗原（H）：是不耐热的蛋白质，具有特异性。表面抗原：是包饶在菌体抗原外侧的不耐热的多糖抗原，在不同的菌属中有不同的名称。O抗原和 H 抗
11、原是肠杆菌科细菌分群和分型的依据。表面抗原存在时可阻断菌体抗原与相应抗体发生反应，但加热处理可消除这种阻断作用。埃希菌属 G-直短杆菌，单个或成对存在，多数有周鞭毛有菌毛，某些菌株特别是引起肠道外感染的菌株有微荚膜 营养要求不高，兼性厌氧 抗原构造：主要有O抗原、H 抗原和 K 抗原 O 抗原：多糖磷脂复合物（LPS），耐热，加热100 不能灭活，目前已有 171 种，是血清学分型的基础H 抗原：不耐热的蛋白质。已知有 56 种，均为单相菌株。K 抗原：多糖荚膜抗原，对热稳定，能阻止 O 凝集，已知有 100 种。大肠埃细菌的血清型别按 O：K：H 的顺序，以数字表示 普通营养琼脂：形成较大的
12、圆形、光滑、湿润、灰白色的菌落血平板：可产生溶血肠道选择培养基：可发酵乳糖，形成有色菌落，黏液型菌落 能分解多种糖产酸产气。IMViC：+-KIA：AA+-MIU：+-EMB：扁平，粉红色有金属光泽 MAC：粉红色或红色 SS：红-粉红色或中央为粉红色、周围无色 XLD：不透明黄色 1、ETEC：生化反应+血清分型+肠毒素检测（最可靠）2、EIEC：赖氨酸、动力、乳糖、葡萄糖产气均（-）与志贺菌的生化反应鉴别试验有醋酸钠、葡萄糖胺利用和黏液酸盐产酸、大肠埃希菌三者均（+）鉴定内容有生化反应、血清学试验（国产血清OK1、OK2）、毒力测定(豚鼠眼角膜)。3、EPEC：生化反应+血清凝集（国产血清
13、有 OK1、OK2、OK3）+细胞粘附试验 4、EHEC：最重要的血清型 O157：H7，鉴定：生化反应+血清凝集，可不测定 Vero 也可确诊 5、EAEC：无抗血清，可用凝块聚集试验鉴定。将细菌接种于 M-H肉汤，35培养，次日观察结果，表面形成凝块者为阳性，均匀混浊无凝块者为阴性。侵袭力：与菌毛和 K 抗原有关。内毒素肠毒素：耐热肠毒素（LT）和 耐 热 肠 毒 素（ST）。两种毒素均可引起肠液大量分泌而致腹泻。肠道外感染致腹泻大肠埃希菌 肠毒素型大肠埃希菌（ETEC）：引起儿童腹泻和 旅行者腹泻。出现恶心、腹痛、低热以及急性发作的类似于轻型霍乱的大量水样便。是由肠毒素ST、LT 引起。
14、肠致病型大肠埃希菌（EPEC）：主要引起婴幼儿肠道感染，导致发热、呕吐、大量水样便，便中含粘液但无血液。肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）：该菌引起的症状类似于志贺菌引起腹泻，如发热、腹痛、水泻或典型的菌痢症状出现脓血粘液便。肠出血型大肠埃希菌（STEC、VTEC 或 EHEC）肠凝聚型大肠埃希菌（EAEC）沙门菌属 G-细长杆菌，多具有周鞭毛，能运动，有时会出现无鞭毛的突变型。无芽孢，无荚膜。兼性厌氧，最适生长温度3537，最适生长pH6.87.8，营养要求不高 抵抗力：不强不耐热：601小时或651520分钟。：水中和粪便中可存活较长时间。对胆盐和煌绿等染料有一定抵抗力。普通营养琼脂：圆形、光
15、滑、湿润、半透明、边缘整齐，有时出现粗糙型肠道选择培养基：菌落小至中等，透明或半透明，不发酵乳糖，有些能产生硫化氢，在 SS 琼脂上形成中心黑色的菌落 乳糖（-），三糖铁琼脂中产碱/产酸或产碱/产酸产气，H2S（+）枸橼酸盐（-）/（+），脲酶、吲哚、动力、VP（-），鸟氨酸（+）显微镜检查+抗原检查 分离培养：血液和骨髓粪便或肛拭菌量少的标本：离心后取沉渣接种，增菌液、BAP、选择培养基。食物等固体物质磨碎后用盐水10 倍稀释，再接种，增菌液和分离培养基。一般先用生化反应筛选，符合沙门菌属特性，再做血清学凝集试验。血清学鉴定步骤为：AF 多价血清分群O血清群的因子血清定群H 因子血清定型，最
16、后综合 O、H、Vi 因子血清的结果得出血清型。注意事项：与多价血清不凝，可能存在 Vi抗原，用生理盐水制成浓菌悬液沸水浴1530 分钟。仅出现单相 H 抗原，需诱导出另一相后再进行鉴定。侵袭力：具有Vi 抗原的沙门菌有侵袭力。内毒素：沙门菌有较强的内毒素，可引起发热、白细胞减少、中毒性休克。肠毒素 伤寒和副伤寒：表现为血流感染 非伤寒型沙门菌感染：肠道感染、肠道外感染 凡临床分离菌乳糖、吲哚、脲酶（+）均不考虑为沙门菌。1、血清学诊断（肥达氏反应）：用已知的伤寒沙门菌的 O、H 抗原、副伤寒沙门菌（A、B、C 表示）的 H 抗原，检测患者的血清中的相应抗体及其效价。用于辅助诊断伤寒、副伤寒甲
17、、乙、丙。此方法与分离培养同时进行或培养失败时试验。方法:试管法和大孔反应板 结果及解释：临床参考值：O1：80；A、B、C1：80；H1：160O、H 抗体升高的意义：1)菌体 O 抗体（IgM）：出现早，持续约半年，消退后不易受非特异性刺激而重现2)H 抗体（IgG）：出现较晚，持续时间长达数年，消退后易受非特异性病原刺激而短暂地重现3)少数病例整个病程中肥达试验始终在正常范围内，原因可能有：早期使用抗菌药免疫功能低下 4)预防接种的影响：H 抗体增高且维持时间长，O 抗体增高不明显，且效价迅速下降 5)回忆反应 2、抗原结构：主要有三种，即菌体 O 抗原、鞭毛 H 抗原和表面（Vi 等）
18、抗原。O 抗原（菌体抗原）：多糖-类脂-蛋白质复合物，耐热如 O2 群（A）等。O 抗原与相应抗血清（IgM）发生颗粒状凝集反应。H 抗原（鞭毛抗原）：不稳定的蛋白质抗原，加热 607015 分钟或用乙醇处理可被破坏。H 抗原有两相：特异相、非特异相。H 抗原是定型（血清型）的依据，它与相应抗血清（IgG）发生絮状反应。表面抗原：已被证实的有：Vi 抗原、M 抗原、5 抗原三种，均为不稳定的表面抗原。3.变异性：S-R 变异、H-O 变异、位相变异、V-W 变异 临床微生物检验细菌整理（肠杆菌科）菌群 形态结构 培养特性 菌落特征 生化反应 直接检查与分离培养 鉴定 致病因素 致病类型 其他
19、志贺菌属 G-直杆菌，短小杆菌，有菌毛，无鞭毛、芽胞和荚膜 兼性厌氧，最适生长温度37，最适 pH7.27.4，对营养要求不高，能在普通培养基上生长 对理化因素的抵抗力较肠杆菌科其它细菌为低 在肠道鉴别培养基上形成乳糖不发酵、中等大小、无色半透明的菌落，宋内志贺菌常形成粗糙型菌落 EMB：无色或不透明的琥珀色，MAC：无色不透明，SS：不透明或透明，XLD：红色 三糖铁琼脂中产酸/产气，枸橼酸盐、脲酶、动力、VP 试验（-）分离培养用肠道培养基（MAC指示剂为中性红）、选择培养基（SS）、木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐（XLD指示剂为酚红）培养基 全面的生化反应+血清学鉴定 痢疾志贺菌甘露醇（-），
20、宋内志贺菌-半乳糖苷酶和鸟氨酸脱羧酶（+）志贺菌属 4 种多价血清定型群多价。A 群：痢疾志贺菌，本群甘露醇阴性，有10 个血清型，各型间无共同抗原关系，且各型均有 K 抗原。B 群：福氏志贺菌，有 6个血清型和 X、Y 两个变种。每个菌型均有两种抗原即型抗原和群抗原，2a 和 6 型有 K抗原，而其它型不含 K 抗原C 群：鲍特志贺菌，有 15 个血清型，均有型抗原、K 抗原。D 群：宋内氏志贺菌，本群 ONPG 和鸟氨酸阳性，仅有一个血清型。侵袭力内毒素：脓血便、腹痛、里急后重等外毒素（Vero 毒素）：细胞毒性、肠毒素性、神经毒或致死毒性 志贺菌属主要引起细菌性痢疾（菌痢），传染源是病人
21、和带菌者，经粪-口传播。分群：A 群痢疾志贺菌、B 群福氏志贺菌、C 群鲍氏志贺菌、D 群宋内氏志贺菌。鉴别试验 与 EIEC 的鉴别：相同点：LYS-、动力-、乳糖-不同点：EIEC：醋酸钠、葡萄糖铵、粘质酸盐（+）志贺菌：醋酸钠、葡萄糖铵、粘质酸盐（-）与类志贺邻单胞菌的鉴别：志贺菌：动力、氧化酶（-）与沙门菌的鉴别：志贺菌：H2S、动力（-），血清学凝集（与沙门菌凝集，与志贺菌不凝集）抗原成分：志贺菌属只有 O、K 抗原，无 H 抗原。宋内志贺菌易发生 S-R 变异，由光滑型变为粗糙型。耶尔森菌属 鼠疫耶尔森菌 G-直杆菌或球杆菌，两端钝圆，两极浓染，有荚膜，无芽孢，无鞭毛。在陈旧培养物
22、、陈旧性病灶中，菌体多形态，呈球形、棒形或哑铃状。兼性厌氧，耐低温，在443 均 能 生 长，2528最适生长，最适pH6.97.2，在普通培养基上可以生长，但发育缓慢 普通营养琼脂：可生长，但生长缓慢，经 24h 孵育形成针尖大小的菌落，比肠杆菌科其它细菌菌落小的多 血平板：48h 后形成柔软、粘稠的粗糙菌落。液体培养基：开始浑浊，24h后呈沉淀生长48h后形成钟乳石现象，有一定鉴别意义。在 25 及 37动力（-），IMVC：-+-；赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶、苯丙氨酸脱氨酶、脲酶、硫化氢均为（-），对大多数糖不分解，分解葡萄糖产酸不产气 初次分离时典型的形态、菌落特点和生化特征 内毒素和鼠毒素
23、 甲类传染病鼠疫 小肠结肠炎耶尔森菌：G-球杆菌，偶有两极浓染，无芽胞和荚膜 兼性厌氧，耐低温，最适生长温度 2028。35无动力，22-25有动力，营养要求不高，普通琼脂上生长良好 BAP 可出现溶血 肠道选择培养基：无色、半透明、扁平较小菌落。不稳定 乳糖（-）、葡萄糖（+）、蔗糖（+）皆不产气。H2S（-）、脲酶（+）V-P试验2225（+），3537（-），鸟氨酸脱羧酶（+）动力、VP 试验 2225（+），3537（-）；嗜冷性，脲酶（+），硫化氢（-），鸟氨酸脱羧酶（+）；发酵葡萄糖、蔗糖产酸不产气；不发酵蜜二糖和鼠李糖 侵袭性和毒素 胃肠炎 枸橼酸杆菌属 G-杆菌，有动力（周身鞭
24、毛）、无芽孢、无荚膜 兼性厌氧，营养要求不高，能在普通营养琼脂上生长 血琼脂平板：灰白色、湿润、隆起、边缘整齐，直径 24 的不溶血菌落。在肠道选择培养基上为乳糖发酵较为浑浊的菌落弗劳地枸橼酸杆菌可产生硫化氢，在 SS和 HE 琼脂上形成有黑色中心的菌落麦康凯：红色菌落。氧化酶（-），触酶（+），葡萄糖发酵产酸产气，还原硝酸盐，KIA：AA+或KA+与沙门菌属及爱德华菌属鉴别：赖氨酸脱羧酶（-）种间鉴别：弗劳地枸橼酸杆菌大部分菌株吲哚（-），硫化氢多数（+）医院感染，包括腹泻和肠道外感染如菌血症、脑膜炎和脑脓肿 临床微生物检验细菌整理（肠杆菌科）菌群 形态结构 培养特性 菌落特征 生化反应 直
25、接检查与分离培养 鉴定 临床意义 其他 克雷伯菌属 G-杆菌，无鞭毛，无芽孢，有荚膜 兼性厌氧，营养要求不高 初分离时形成较大、凸起灰白色黏液型菌落，菌落大而厚实、光亮，相邻菌落容易发生融合，拉丝现象MAC 上发酵乳糖产酸，形成较大的黏液型、红色菌落 氧化酶（-），葡萄糖产酸产气，动力、鸟氨酸、吲哚、DNA酶（-），脲酶（+），枸橼酸盐、VP、丙二酸盐（+）采用血琼脂和MAC等肠道选择鉴别培养基，37孵育 初步鉴定：生化反应属的鉴定：动力、鸟氨酸脱羧酶（-）种的鉴定：肺炎克雷伯菌吲哚（-），产酸克雷伯菌吲哚（+）血清学鉴定：用特异性抗血清进行荚膜肿胀试验 呼吸道感染：原发性肺炎 呼吸道以外的感
26、染 本菌对氨苄青霉素天然耐药,易产生 ESBLs。肠杆菌属 革兰阴性粗短杆菌，有周鞭毛，某些菌株有荚膜，无芽胞。兼性厌氧，营养要求不高。普通培养基形成大而湿润的黏液状菌落 BAP：形成大而湿润不溶血菌落。肠道选择培养基：有色菌落。TSI：产酸/产酸产气或产酸/产酸，CIT（+），URE、IND（+/-）,MOT（+），VP（+/-），ORN（+）采用血琼脂和MAC等肠道选择鉴别培养基，37孵育 初步鉴定：基本生化反应，IMVC 试验：-+，而大肠埃希菌为+-，动力和鸟氨酸脱羧酶（+）最终鉴定：各主要种间的鉴定主要依据三种氨基酸、山梨醇及色素，坂崎肠杆菌能产生黄色色素 作为条件致病菌引起一些肠道
27、外感染。特别是坂崎肠杆菌引起的新生儿脑膜炎和败血症，死亡率高。易产生诱导酶AmpC 酶。TIS：三糖铁试验 CIT：枸橼酸盐试验 URE：脲酶试验 IND：吲哚试验 MOT：动力试验 ORN：鸟氨酸脱羧酶试验 泛菌属 G-粗短杆菌，有周身鞭毛，能运动，无芽孢和荚膜 属间鉴别：三种氨基酸和色素。种间鉴定：水杨苷水解试验。成团+，弥散-。沙雷菌属 G-小杆菌，有周身鞭毛，能运动，气味沙雷菌有微荚膜，其余菌种无荚膜无芽孢，其中的粘质沙雷菌是最小的细菌。兼性厌氧，营养要求不高 营养琼脂：不透明、白色或有色（红色、粉红色）菌落 产生两种色素：灵红菌素：红色，脂溶性，不扩散。吡羧酸：粉红色，水溶性，能扩散
28、。DNA 酶（+）、脂酶（+）、明胶酶（+）属间鉴定：三种酶（+）、对多粘菌素、头孢菌素耐药 引起肠道外感染 对多种常用抗生素耐药 变形杆菌属 G-杆菌，两端钝圆，有明显多形性，呈球形或丝状，无芽胞和荚膜，有周鞭毛、运动活泼。兼性厌氧，对营养无特殊要求，生长温度为 1043。在营养琼脂和血琼脂上均可生长 普通变形杆菌和奇异变形杆菌的大多数菌株在普通琼脂平板上可蔓延成波纹状薄膜不满整个培养基表面，成为迁徙现象，是本属细菌的特征。肠道选择鉴别培养基：圆形、扁平、无色半透明，乳糖不发酵产 H2S 的菌种在 SS上菌落中心成黑色 硫化氢（+）、苯丙氨酸脱氨酶（+）、脲酶（+）快速阳性 抑制迁徙生长现象
29、的方法：在平板的划线区域贴上与待分离菌株有耐药差异的抗生素纸片。固体培养基中添加化学成分，如 4%的乙醇、0.1%的石炭酸、0.2%的叠氮钠等。培养基中加入抗变形杆菌H 因子血清 提高琼脂含量到 57%变形杆菌种间鉴定：试验 普通 奇异 潘氏 吲哚 +-鸟氨酸 -+-引起多种感染 产生耐热肠毒素，引起食物中毒。引起婴儿肠炎 与泌尿结石形成有关尿路呈持续性感染的病灶。本属是一些运动活泼、H2S（+）、U（+）、苯丙氨酸脱氨酶（+）的细菌。变形杆菌能产生脲酶，具有分解尿素的性能，感染后的尿液和分泌物一般呈碱性，有氨臭味，容易产生耐药性。普罗威登菌属 同上 同上 不出现迁徙现象，其余同上 枸橼酸盐（
30、+）脲酶（-），吲哚和动力（+），鸟氨酸和 VP（-）属鉴定：与变形杆菌鉴别，硫化氢（-）；与摩登菌属鉴别，鸟氨酸脱羧酶（-）种间鉴定 试验 产碱 斯图 雷极 脲酶 -/+蕈糖 -+-侧金盏花醇+-+与腹泻有关 三个产苯丙氨酸脱氨酶的细菌属间鉴别 试验 变形杆菌属 普罗威登菌属 摩根菌属 H2S +-鸟氨酸 +/-+枸橼酸盐 +/-+-摩根菌属 无迁徙现象 CIT、VP（-），URE、IND、MOT、ORN（+）泌尿感染、伤口感染、腹泻 临床微生物检验细菌整理（不发酵革兰阴性杆菌）菌群 形态结构 培养特性 菌落特征 生化反应 直接检查与分离培养 药敏试验 致病因素 致病类型 其他 铜绿假单胞菌
31、 G-杆菌，长短不一，呈球杆状或长丝状，成双或成短链排列，专性需氧液体培养基有菌膜生长。最适温度 25-30，4 不生长，42 生长产生多种水溶性色素（绿脓素、青脓素等）。培养时产生特殊气味，菌落表面有金属光泽 型：典型型。菌落扁平、大小不一，边缘不规则呈伞状 型：大肠菌样型。菌落圆形，凸起，光滑，似大肠埃希菌菌落。型：粗糙型。菌落呈纽扣状，中央隆起，边缘扁平，表面粗糙有皱纹。型：粘液型。菌落隆起，表面光滑，常融合在一起，有粘性，可拉丝。型：侏儒型。生长缓慢，培养 18 小时尚不见菌落生长 48 小时后生长为细小菌落。氧化酶（+）、精氨酸水解（+）葡萄糖、木糖：O型吲哚（-）明胶（+/-）、枸
32、橼酸盐（+/-）、硝酸盐还原（+）显微镜检查、抗原检测、核酸检测 血平板上可出现透明溶血现象；MAC上可形成微小无光泽半透明菌落，菌落中心常呈棕绿色；在 SS上可形成类似沙门菌的菌落 具有多重耐药性 细菌结构成分、毒素和酶类 可引起机体各个系统的感染，眼部感染的铜绿假单胞菌可合成胶原酶，引起角膜穿孔而失明 与相似细菌的异同点 试验 铜绿 恶臭 荧光 氧化酶 +精氨酸水解 +氧化葡萄糖 +荧光素 +4生长 -+42生长 +-明胶液化 +/-+气味 生姜气味 腥臭味 无 绿脓素 +-伯克霍尔德菌属 不产生绿脓素和荧光素 可选药物有限：四环素、头孢他啶、亚胺培南、复方新诺明 窄食单胞菌 G-细长杆菌
33、，有端鞭毛，无荚膜和芽胞 无特殊要求，普通培养基可生长，最适温度35，4不生长，42近半数能生长 经培养后形成圆形、中等大小、表面光滑、湿润边缘整齐、不溶血的菌落，但菌下的培养基常呈绿色。多数菌株产生黄色素 嗜麦芽窄食单胞菌：猫眼型菌落 OXI-（但有些菌株在 MH 培养基上呈弱阳性）赖氨酸（+）、氧化麦芽糖比葡萄糖快。明胶（+）、七叶苷（+）首选药物：磺胺类、环丙沙星、替卡西林/克拉维酸。天然耐药：亚胺培南 药敏方法：稀释法或 E-test法 K-B 法：复方新诺明、左氧氟沙星、米诺环素。试验 嗜麦芽 洋葱伯克霍尔德菌赖氨酸 +黄色素 +氧化酶 -甘露醇 -+多粘菌素 S R 不动杆菌属 G
34、-球杆菌常成双排列，有时形成丝状或链状，无鞭毛，无动力，无芽孢，黏液型菌株有荚膜，可有吞噬细菌现象 为专性需氧型，对营养要求一般，在普通培养基上生长良好，最适温度为35，能在 MAC 上生长，但在 SS 上部分生长 在血琼脂上经 3537培养 1824 小时，可形成圆形、灰白色、光滑、边缘整齐、直径 23的菌落。溶血不动杆菌在血平板上可呈溶血，一般不产生色素，少数菌株可产生色素。不发酵糖类、氧化酶（-）、硝酸盐还原试验（-）、无动力、洛菲不动杆菌枸橼酸盐（-）初步鉴定：菌体形态、染色特点、氧化酶、动力、硝酸盐还原试验（-）种间鉴别：生长的温度、溶血、枸橼酸盐、葡萄糖的利用试验。K-B 法可用
35、临床微生物检验细菌整理（苛氧菌）定义：苛养菌是对营养要求高，培养条件苛刻,普通培养基上不生长或很难生长的一类细菌。体外培养时需添加生长因子或其它营养成分，提供特殊的生长环境，需要长时间才能检测到生长，故又称“难培养的细菌”。临床上常见的苛养菌：球菌：肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。阴性杆菌：“HACEK”细菌群、军团菌属、布鲁菌属、鲍特菌属等。“HACEK”细菌群由五个菌属组成：H 嗜血杆菌属 A 凝聚杆菌属 C 心杆菌属 E 艾肯菌属 K 金氏杆菌属 苛养菌标本采集的方法与时机：一定要在抗生素治疗前采集标本。尽量避免感染部位正常菌群对标本的污染及时将标本接种到适当的培养基是提高分离率的
36、前提 菌群 形态结构 培养特性 菌落特征 生化反应 直接检查与分离培养 鉴定 致病因素 致病类型 其他 嗜血杆菌属 G-小杆菌，无芽胞和鞭毛，呈高度异质性。新分离菌株多呈双球形、球杆状或短链状，陈旧培养物中呈多形性（长杆状或丝状），产毒株在营养丰富的培养基上生长 618 小时出现荚膜，陈旧培养物中荚膜消失。营养要求高，生长中需要 X、V 因子。需要 5%10%的CO2 环境。最适温度 35 培养基是兔血或马血最好 抵抗力较弱，对消毒剂和干燥敏感，人工培养易死亡 巧克力平板：灰白色、圆形、光滑、半透明的小菌落。液体培养基：有荚膜的菌株均匀混浊生长，而无荚膜的菌株呈颗粒状 沉淀生长，不易见到明显混
37、浊现象 兔血巧克力平板上为灰白色、中等大小、光滑、湿润的似露滴状菌落；兔血琼脂平板上菌落为细小露滴状，不溶血。羊血琼脂板上生长很差 显微镜检查 抗原检测：荚膜肿胀试验 核酸检测 根据培养基中对 X、V 因子的需要、菌落形态、卫星现象，配合生化反应。卫星现象：当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培养时，可见到靠近葡萄球菌菌落的流感嗜血杆菌菌落较大，而远离葡萄球菌的流感嗜血杆菌菌落较小，这种现象称卫星现象。琼脂卫星试验：在不含血液的琼脂平板点种金葡菌所进行的卫星试验 致病物质是荚膜、菌毛、内毒素、致病力强的菌株可产生IgA蛋白酶 X、V 因子需求试验又称纸片法卫星试验 不含血液琼脂平板上密集划线接种
38、待测菌或0.5麦氏单位菌悬液涂抹接种。将 X、V、X+V 因子三种纸片贴在接种细菌的平板上纸片间相距 5cm 以上，（因为 V 因子分子量小，扩散距离远），否则会出现 X 因子假阳性结果。培养后观察结果 （X+V）因子结果阴性的几种可能原因：待测菌死亡、培养基缺乏营养、孵育条件未满足、纸片失效 布鲁菌属 （人兽共患病病原体）G-短小球杆菌，两端钝圆，偶见两极浓染，无鞭毛、无芽胞，光滑型菌株有微荚膜。常单个存在，很少成双或成短链。革兰染色常出现不规则结果，因为布鲁菌不能很好地被碱性复红染色，革兰染色着色弱，镜下呈“细沙状“。专性需氧菌，营养要求较高，初次培养需要 5%10%的 CO2 环境 最
39、适 温 度 35 -37，最适 PH6.7。本菌生长缓慢，45天在血平板上长出较小无色、凸起的光滑或粗糙型菌落。生长中需要VB1、烟酸和生物素，添加血液会增加检出，但不需要 X、V 因子。抵抗力较强 液体培养基：培养 24-48小时，出现轻度混浊无菌膜；7 天后有菌膜形成并形成粘性沉淀，不易摇散。血平板：5-7天可形成细小、灰色不溶血菌落。选择培养基：无色、半透明、圆形、表面光滑、边缘整齐中央稍凸起的菌落。有时出现黏液样或干燥的硬皮样菌落。触酶（+）、氧化酶（+/-）细菌形态学（柯氏染色）初步报告生化反应：触酶+、氧化酶+/-等。染料抑制试验（或生长试验）：药片周围出现抑菌圈为敏感（抑制），无
40、抑制即生长（耐受）。血清学凝集试验 侵袭力和内毒素 侵袭力：强，可穿透完整的皮肤和粘膜进入宿主体内，且有很强的繁殖力和扩散能力。是导致布鲁菌病的病原体。主要症状：长期发热(波浪热)、多汗、关节痛及全身乏力和肌肉疼痛。巴斯德菌属 G-小杆菌或球杆菌，常见两极浓染。无芽胞、无鞭毛、有荚膜，多单个存在，有时成对或短链 需氧 或兼性厌氧，最适温度35，在含血培养基上生长良好；不需要X、V 因子；液体培养基呈混浊生长。肠道选择培养基上多不生长 BAP：灰白色不溶血的小菌落，有荚膜的菌株呈粘液型 液体：光滑型和粘液型菌株呈均匀混浊；粗糙型菌株形成细小颗粒状沉淀。肠道选择培养基：多不生长或生长很差 氧化酶、
41、触酶、吲哚（+），脲酶（-），发酵葡萄糖 触酶和氧化酶（+）、发酵葡萄糖产酸不产气，不发酵乳糖，能还原硝酸盐 是引起动物感染的病原菌，人类感染多是通过被动物咬伤或抓伤而感染。可引起多系统感染及伤口感染。临床微生物检验细菌整理（弧菌属）本属细菌的一些主要特点：生化反应：OXI+（麦氏弧菌除外）、GLU（F）、O/129（S）嗜盐性：钠离子可刺激细菌生长，除霍乱弧菌和拟态弧菌外，其它所有弧菌绝对需要钠离子，某些细菌无盐不生长。生长特性：BAP 可出现各种溶血现象，肠道选择培养基上为糖不发酵菌落。选择培养基：TCBS 琼脂和碱性蛋白胨琼脂。分解蔗糖的菌种在 TCBS 琼脂形成黄色菌落，不分解者为绿色
42、菌落；某些弧菌在此培养基上不生长。肠道选择培养基上不发酵乳糖：沙门菌、志贺菌、弧菌 菌群 形态结构 培养特性 菌落特征 直接检查与分离培养 鉴定 临床意义 其他 霍乱弧菌 O139 有荚膜 典型形态：革兰染色阴性，稍弯呈弧形或逗点状。特殊排列：米泔样便涂片可见细菌头尾相连 呈“鱼 群样”排列。特殊的运动：悬滴法镜检可见细菌运动，如穿梭样或流星样。营养要求不高，普通琼脂生长良好。06%NaCl 培养基上可生长 需氧或兼性厌氧，1644可生长。怕 酸 耐 碱 性：PH 6.810.2 可生长，初次分离常选用PH8.5的碱性胨水,进行选择性增菌培养。在其表面可形成菌膜。TCBS（黄色菌落）、含亚碲酸
43、钾的培养基（中心灰褐色的菌落）埃尔托生物型因产溶血素，BAP 上出现透明溶血环。标本直接检查 1)涂片染色镜检：鱼群样排列 2）动力和制动试验：阳性可推定。3）快速诊断：荧光抗体染色、O1 群单克隆抗体凝集试验。4）霍乱毒素的测定 分离培养：取液体培养基上的菌膜，接种于固体培养基TCBS、4 号琼脂或庆大霉素琼脂平板上。TCBS（指示剂为溴麝香草酚蓝）上形成的菌落较大，因分解蔗糖产酸而呈黄色。用于分离致病性弧菌。4 号琼脂或庆大霉素琼脂平板（均含亚碲酸钾）上，因细菌可将碲离子还原成元素碲，所以菌落呈灰褐色。强选择培养基，专供霍乱弧菌分离。动力和制动试验：取玻片两张，一张用来观察动力，另一张用于
44、观察制动试验。血清凝集试验：本试验主要用于霍乱弧菌的血清型鉴定（两个生物型相同），所用诊断血清为多价 O1、B 因子血清和 C 因子血清，一般用玻片法。+-小川型+-+稻叶型+彦岛型 两种生物型的鉴别 试验 古典型 埃尔托型 羊红细胞溶血 -D(可变)鸡红细胞凝集 -+VP -+多粘菌素 B S R 组噬菌体裂解 -+组噬菌体裂解 -+霍乱弧菌的鉴定试验：霍乱红试验：霍乱弧菌具有色氨酸酶和还原硝酸盐为亚硝酸盐的能力将待测菌接种于含硝酸盐的蛋白胨水中，培养后所产生 的两种产物结合成亚硝酸盐吲哚，滴加浓硫酸后呈现蔷薇色。这是弧菌属细菌所共有的性质。霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的病原菌，人是其唯一易
45、感者。甲类传染病。O1 和 O139 引起霍乱,其它血清型可引起人类的胃肠炎 霍乱特征性粪便：米泔样 粘丝试验：弧菌属的推测鉴定的有用方法 将 0.5%的去氧胆酸钠与霍乱弧菌混匀成浓的菌悬液，1 分钟后悬液由混变清，并变得粘稠，用接种环挑取时有粘丝形成。这也是弧菌属细菌所共有的性质（副溶血等除外）霍乱弧菌 O1 群血清型 型别 O 抗原成分 小川型 A、B 稻叶型 A、C 彦岛型 A B C A 为群特异性抗原，而 B、C 为型特异性抗原。O/129 敏感试验：10ug、150ug,纸片周围有任何大小的抑菌圈即为敏感。O1 群和其它非O1 群霍乱弧菌均敏感，但已有耐药菌株出现。O139 群耐药
46、 耐盐性试验：在含 06%NaCl 培养基上可生长。副溶血性弧菌 G-杆菌，有极单鞭毛，无芽胞、荚膜。兼性厌氧，但有氧生长更好，无氧生长很差。营养要求不高，但须加入适量的氯化钠。无盐培养基不长，氯化钠高于8%不长。最适浓度为 3.5%最适温度 30-37；最适PH7.7-8.0 TCBS：蓝绿色菌落（不发酵蔗糖）。普通羊血BAP：不溶血或-溶血。神乃川现象：我妻培养基上产生 溶血现象。培养基中含 7%的氯化钠、O 型人血或兔血、甘露醇。嗜盐菌选择平板：菌落大、无粘性。SS：蜡滴状的菌落，有辛辣味，久之不易刮下。基本反应：氧化酶试验（+）、葡萄糖（+）、乳糖（-）、吲哚（+）、脲酶（-）、VP（
47、-）O/129（150ug）S；O/129（10ug）R NaCl 生长试验：不含 NaCl 和 10 NaCl 培养基中不长；3%NaCl 和 7%NaCl 蛋白胨水中生长。氨基酸代谢；赖+、鸟+、精双-神乃川现象 毒素测定 具有嗜盐性，所以又称嗜盐弧菌。它存在于海水、海底沉淀物、鱼虾贝类及盐渍加工的海产品中。主要引起食物中毒和急性腹泻，也可引起伤口感染和败血症。副溶血弧菌的主要致病因素是产生耐热溶血素，它具有：溶血毒性：人和兔红细胞溶血性较高，对马红细胞不溶血。细胞毒性心脏毒性肠毒性 临床微生物检验细菌整理（气单胞菌属和邻单胞菌属）菌群 形态结构 培养特性 菌落特征 直接检查与分离培养 鉴
48、定 临床意义 其他 气单胞菌属 G-直杆菌，有时呈球杆状，有鞭毛 营养要求不高，普通培养基可生长。温度要求：嗜冷菌在35以下生长，37不 生长；嗜中温菌群在1042之间生长。TCBS 和：不生长，可与弧菌属鉴别 BAP：大部分致病菌株有溶血现象。菌落较大、灰白色，圆形，光滑、湿润凸起。增菌培养：碱性胨水，液体培养基中浑浊生长。分离培养基：MAC：豚鼠气单胞菌发酵乳糖，应与肠杆菌科细菌鉴别。其它菌种不发酵乳糖。BAP（20ug/ml 氨苄西林）：嗜水气单胞菌和威隆气单胞菌菌落有溶血现象。菌落灰白色，光滑、湿润凸起。生化鉴定：氧化酶和触酶（+）、硝酸盐还原（+）、葡萄糖（F）、O/129（R）科、
49、属间的鉴别：氧化酶试验、葡萄糖发酵试验、O/129敏感试验（R）、肌醇产酸、三种氨基酸、嗜盐性、TCBS上是否生长。种的鉴定：主要鉴别三个常见菌种，嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌和威隆气单胞菌。主要依据 V-P、阿拉伯糖、氨基酸 杀鲑气单胞菌为嗜低温菌，其它种均为嗜中温菌。临床上引起的感染有：肠道内感染：感染常见于 5 岁以下儿童和成人，有明显的季节性，是夏季腹泻的常见病原菌之一。其主要致病物质为溶血毒素和细胞毒素。肠道外感染：气单胞菌可引起多组织和部位感染，但以皮肤和软组织感染多见，多数患者有与水或水生生物接触史，嗜水气单胞菌和威隆气单胞菌较多见。邻单胞菌属 G-直杆菌，可成双或短链排列，有鞭毛
50、，有动力 最适温度 35，但845可生长。BAP上生长良好，不溶血，氨苄西林可抑制其生长。MAC、SS 为乳糖多不发酵菌落，某些迟缓发酵乳糖，时间延长出现阳性 BAP：可形成圆形凸起、不透明、光滑、有光泽、大小为 23 的菌落。无溶血现象 氧化酶和触酶（+）、吲哚（+）、硝酸盐还原（+）、发酵葡萄糖和其他碳水化合物产酸不产气，O/129（S），赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸双水解三者阳性和肌醇阳性为本菌主要鉴定要点 邻单胞菌属只有一个种，既类志贺邻单胞菌。主要引起胃肠炎，好发于夏季，临床症状可以是短时间的水样泻或痢疾样腹泻。另外，还可引起抵抗力低下人群的肠道外感染，如菌血症、脑膜炎、伤口感染等 与相似