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1、病理科优化制片及染色流程 1/7 病理科优化石蜡切片 1、切片前首先装好切片刀，把刀牢牢固定，否则，切片中就会发生许多人为现象。（最常见的人为现象是波纹，厚薄不均等）。2、蜡块装到切片机的蜡块夹上，夹持要平稳牢固。调整好蜡块的方位，不能偏斜，刀刃与蜡块的上、下缘平行。切片刀与蜡块的平面之间应保持一定的角度（清除角），一般为 38 度，以免刀刃面将组织刮坏。3、修蜡块时要循序渐进，力争修出最大面，又要防止小组织被修坏、修光。4、切片时连续转动手轮，用力要平稳、均匀。常规切片厚 35m。5、切下的蜡片相连成带状。待蜡带切至一定长度时，右手用镊子夹住蜡片末端，左手持毛笔轻轻将蜡带的另一端与切片刀拨离
2、。6、将蜡片较光滑的一面朝下置于温水中（通常捞片水温在 42左右），并用镊子帮助展开，去除皱纹后，选择完整、无划痕、厚薄均匀的蜡片，附贴到载玻片上。7、附贴时，务使蜡片与玻片之间无气泡。玻片一端应留有 1/3 的位置贴号码标签用。将蜡片附贴在另外 2/3 的中心位置。8、切片放入 62烤箱中约 3060 分钟烤片，以免发生脱片。为了防止脱片可以选用涂甘油蛋清片和挂胶片。比较常用的挂胶片有明胶片，APES胶片和多聚赖氨酸胶片等，免疫组化染色尤需要使用胶片。病理科优化冷冻切片 1、选取适当的新鲜组织块，放在冷冻托上，放入冷冻切片机中冻透。2、修块、切片。冷冻切片通常厚 68m 并把切片贴于载玻片上
3、。病理科优化制片及染色流程 2/7 3、在酒精灯上轻烤片刻，放入固定液中 2 分钟。4、然后快速 HE 染色（可在酒精灯上加热进行，以缩短时间）。5、封片、贴标签后，送诊断室（15 分钟之内完成）。石蜡切片常见问题及优化解决方法 问题 原因 解决方法 组织发脆 脱水、透明、浸蜡时间过长、温度过高，或与组织本身质地有关 在切片时，边切边用嘴向蜡片吹气，可能会好些 切片卷起 刀不锋利，或刀锋在另一面，或刀角度过大，切片 太厚等等 更换切片刀口，调整刀角度在 8 到 10 之间，调整切片厚度在3-5微米左右 蜡片弯曲 刀锋不均，切片刀未磨直，切片刀与蜡块不平行 将刀安放平整，调整蜡块切面与刀架平行
4、厚薄不均 刀、刀座及蜡块未夹紧，组织太硬，或切片机主轴太向前，或切片机已磨损。夹紧刀架，并拧紧相关螺丝，摆放切片机主轴在合适位置，找相关专业人员对切片机进行维护，调整组织脱水程序以对组织合理脱水 病理科优化制片及染色流程 3/7 HE 染色操作常规流程 切好的片子应在 6070左右的烤箱中烘烤 30 分钟以上才能进行染色。HE 染色手工程序：脱蜡 1、二甲苯（AR）5 分钟 2、二甲苯（AR）5 分钟 3、100%酒精（AR、无水乙醇）1 分钟 4、100%酒精（AR、无水乙醇）1 分钟 5、95%酒精（工业酒精或医用酒精）1 分钟 6、80%酒精（工业酒精或医用酒精）1 分钟 7、自来水浸洗
5、 1 分钟 以上 37 称为进水过程。切片出现裂痕 刀有缺口，石蜡内有杂质，组织内有钙化、骨片或有线结,也可能会有棉纸纤维等 更换切片刀口，将石蜡过滤后使用，清除蜡块中的异物，对于骨或者钙化物先脱钙后再切片 切片不连片，切不下片，切片很厚，或者切片后蜡块发白，内陷 组织脱水不佳 先将蜡块溶解，取出组织，放入加热水浴的丙酮内（80），3060分钟，再进行透明浸蜡包埋切片 病理科优化制片及染色流程 4/7 染色 1、苏木素染液 6 分钟 2、水冼 1 分钟 3、0.5-1%盐酸酒精分化 片刻（上下三次颜色由蓝变红）4、自来水冲冼 15 分钟以上（然后 95%酒精片刻，主要是避免所带的水份稀释以下的
6、伊红酒精，此步可免）5、1%伊红酒精浸染 12 分钟 6、水冼 1 分钟 脱水、透明、封固 95%酒精 1 分钟 95%酒精 1 分钟 100%酒精 1 分钟 100%酒精 1 分钟 石炭酸二甲苯(1:3)10 秒钟 以上称为脱水。二甲苯 透明 1 分钟 取出后用中性树胶（上海产，预先用二甲苯溶解，粘稠度适中即可）封固。染色结果：核：蓝黑色 胞浆：不同程度的粉红色 肌纤维：较深的粉红色 病理科优化制片及染色流程 5/7 胶元纤维：淡红色 红细胞：桔红色。病理染色注意事项 1、配制染液和其他溶液时，要根据需要和染液的保存期限决定配制数量。2、需要保存再用的染液和试剂，必须贴上标签，注明名称、浓度
7、、配制日期和用处等，妥善存放。经常使用的染液和试剂要经常过滤或更换新液。3、染色器皿须洗涤干净。必要时用酸洗液处理。将玻璃器皿浸泡于酸洗液中半天至 1 天，自来水冲洗数小时，再用洗涤剂刷洗，自来水冲洗数小时，蒸馏水冲洗后备用。（酸洗液配制：重铬酸钾 300g，硫酸 300ml，蒸馏水（可用自来水）3000ml。先将重铬酸钾溶解在蒸馏水中，徐徐加入硫酸。注意：加酸时必须缓慢！并用玻璃棒不停地搅拌！）。5、染色是利用染料的不同作用，使组织与染料以不同方式进行结合。常规染色是苏木精和伊红染色（简称 HE 染色）。特殊染色是根据诊断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。冷冻切片也用 HE 染色。少
8、量或单个冷冻切片时手工操作比较方便。冷冻切片染染色要求在短时间（10分钟）内完成，在保证质量的前提下!越快越好。HE 染色常见问题及优化解决方法 问题 原因 解决方法 染色发白 二甲苯脱蜡时间不够，有蜡残留 延长脱蜡时间或更换二甲苯 病理科优化制片及染色流程 6/7 染色发灰 组织固定脱水不佳或者染液配制PH 不符 改进组织固定脱水程序或者改进染液配方 着色不均匀 染液太少或者分布不均 增加染液量或在染液中加入甘油等增强液体亲和力 染色偏蓝 苏木素染色时间过久或者分化不足 减少苏木素染色时间或者延长分化时间 染色偏红 伊红染色时间过长或者苏木素染色不足 改进苏木素染色或者减少伊红染色时间 核着
9、色欠佳 组织脱水不佳 加强组织固定脱水，将切片用生物穿透剂进行处理以利于苏木素着色 病理切片质量控制 1、诊断人员在接到当日切片并验收后，检查、核实所制作的组织学切片的数量及质量，在技术室送片记录本或工作流程单上签字。如发现切片数与取材数不符，应及时与技术人员联系，进行核查。对当天质量不好的切片做记录，指明技术上存在的缺陷，并于当天交技术室。2、技术室收到切片质量记录，要求在 24 小时内答复，并立即纠正原不足之处。另外，科内质量管理小组按分工，每季度复查切片一次，查出问题要采取适当措施于以纠正，并注意落实情况。3、切片是技术含量很高的步骤，同一蜡块，用同一台切片机，同一把病理科优化制片及染色
10、流程 7/7 刀，不同的操作者会切出不同质量的片子。所以要求：切片刀必须锋利；切片厚度 35m，切片完整，无污染，无皱褶，无刀痕。组织片应贴附在标签外，剩余玻片的中间。4、胃镜、纤维支气管镜、穿刺等小活检组织切片须作连续性切片，数量不得少于 6 张（620 张）。5、切片、捞片时应严格分块完成，切忌在水面上残留上一块的碎片，以杜绝污染。6、贴（裱）片时，必须注意蜡块编号与载玻片上的编号完全一致，杜绝错误。7、切好的白片要进行烤片化蜡。烤片温度应在 6062左右，时间不能少于 20 分钟或用电吹风吹。8、染色必须按程序操作，染色试剂必须及时过虑或更换。HE 染色适中，核、浆分化对比清晰，避免过红或过蓝（注意防止苏木素渣子和伊红碎片出现）。9、切片封固前必须经酒精充分脱水，二甲苯透明，湿封。不得用温箱烤干或电吹风吹得过分干燥，再封片。10、封片时不得有气泡，不得有树胶外溢。11、标签贴于玻片一侧，编号字迹必须清楚、整齐，且不易褪色。12、染好切片后贴标签时，编号要与玻片编号一致，杜绝错误。13、制片工作一般应在 1224 小时内完成。切片完成后交付医师时，必须按照记录当面清点。