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1、化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响化学因素对微生物化学因素对微生物 的影响的影响水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响目的要求目的要求v了解常用化学消毒剂对微生物的作用。了解常用化学消毒剂对微生物的作用。v学习测定石炭酸系数的方法。学习测定石炭酸系数的方法。水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响基本原理基本原理常用化学消毒剂常用化学消毒剂重金属及其盐类重金属及其盐类有机溶剂（酚、醇、醛）有机溶剂（酚、醇、醛）卤族元素及其化合物卤族元素及其化合物染料染料表面活性剂表面活性剂水生态工程实验室水生态工程
2、实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响v各种化学消毒剂的杀菌能力常以石炭酸为标准，各种化学消毒剂的杀菌能力常以石炭酸为标准，以石炭酸系数（酚系数）来表示。以石炭酸系数（酚系数）来表示。v将某一消毒剂作不同程度稀释，在一定时间内将某一消毒剂作不同程度稀释，在一定时间内及一定条件下，该消毒剂杀死全部供试微生物及一定条件下，该消毒剂杀死全部供试微生物的最高稀释倍数与达到同样效果的石炭酸的最的最高稀释倍数与达到同样效果的石炭酸的最高稀释倍数的比值，即为该消毒剂对该微生物高稀释倍数的比值，即为该消毒剂对该微生物的石炭酸系数。的石炭酸系数。v石炭酸系数越大，说明该消毒剂杀菌能力越强。石炭
3、酸系数越大，说明该消毒剂杀菌能力越强。水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响器材器材v菌种：菌种：大肠杆菌，白色葡萄球菌。大肠杆菌，白色葡萄球菌。v培养基：培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，牛牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，牛肉膏蛋白胨液体培养基。肉膏蛋白胨液体培养基。v溶剂或试剂：溶剂或试剂：各种化学消毒剂各种化学消毒剂v仪器或其他用具：仪器或其他用具：无菌培养皿，无菌滤无菌培养皿，无菌滤纸片，试管，吸管，三角涂棒等。纸片，试管，吸管，三角涂棒等。水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响操作步骤操作步骤v滤纸片法滤纸
4、片法v石炭酸系数的测定石炭酸系数的测定user:水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响滤纸片法滤纸片法1、倒平板倒平板2、标记标记3、细菌涂布细菌涂布4、放滤纸片放滤纸片5、培养及结果观察培养及结果观察水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响石炭酸系数测定石炭酸系数测定v稀释配制石炭酸溶液稀释配制石炭酸溶液v稀释配制待测消毒剂溶液稀释配制待测消毒剂溶液v配制分装培养基配制分装培养基v消毒剂作用细菌消毒剂作用细菌v培养培养v计算石炭酸系数值计算石炭酸系数值水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的
5、影响化学因素对微生物的影响倒平板倒平板v在在微波炉中加热将灭好菌的固体培养基融化，微波炉中加热将灭好菌的固体培养基融化，待冷却至待冷却至55556060C C时，右手持装有培养基的时，右手持装有培养基的三角瓶置酒精灯火焰旁，用左手将瓶塞轻轻拔三角瓶置酒精灯火焰旁，用左手将瓶塞轻轻拔出，瓶口对着火焰；用右手小指和手掌边缘或出，瓶口对着火焰；用右手小指和手掌边缘或小指与无名指夹住瓶塞，左手拿培养皿并将皿小指与无名指夹住瓶塞，左手拿培养皿并将皿盖在酒精灯火焰附近打开一缝，迅速倒入培养盖在酒精灯火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约基约1515mLmL，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基加盖后轻轻摇动培养皿，
6、使培养基均匀分布。均匀分布。水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响标记标记v将将平板底皿划分成平板底皿划分成4-6等份，每一份内标等份，每一份内标明一种消毒剂名称明一种消毒剂名称。消毒剂消毒剂1消毒剂消毒剂2消毒剂消毒剂3消毒剂消毒剂4消毒剂消毒剂5消毒剂消毒剂6消毒剂消毒剂7消毒剂消毒剂8生理盐水生理盐水生理盐水生理盐水水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响细菌涂布细菌涂布v用无菌吸管吸取用无菌吸管吸取0.2ml菌液接种在作好标菌液接种在作好标记的琼脂平板上，再用无菌刮铲将菌液记的琼脂平板上，再用无菌刮铲
7、将菌液在平板上涂抹均匀。在平板上涂抹均匀。水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响放滤纸片放滤纸片v用用无菌镊子将已经灭菌的小园无菌镊子将已经灭菌的小园滤纸片（滤纸片（5mm）分别浸入各分别浸入各种消毒剂溶液中。种消毒剂溶液中。v无菌操作取出浸湿的小滤纸片，无菌操作取出浸湿的小滤纸片，并在试管内壁沥去多余药液，并在试管内壁沥去多余药液，注意保证滤纸片上各种消毒剂注意保证滤纸片上各种消毒剂溶液量基本一致。溶液量基本一致。v无菌操作将滤纸片贴在上述平无菌操作将滤纸片贴在上述平板的相应区域。板的相应区域。水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物
8、的影响化学因素对微生物的影响培养及结果观察培养及结果观察v将将上述贴好滤纸片的平板置于上述贴好滤纸片的平板置于37 培养培养箱中培养，箱中培养，24hr后取出观察抑（杀）菌后取出观察抑（杀）菌圈的大小。圈的大小。v抑（杀）菌圈的大小测定：抑（杀）菌圈的大小测定：水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响稀释配制石炭酸溶液稀释配制石炭酸溶液v将石炭酸溶液稀释成将石炭酸溶液稀释成1/50、1/60、1/70、1/80、1/90等等5种浓度，每个浓度各取种浓度，每个浓度各取5mL装入试管，作好标记。装入试管，作好标记。水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学
9、因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响稀释配制来苏尔溶液稀释配制来苏尔溶液v将将来苏尔溶液稀释成来苏尔溶液稀释成1/150、1/200、1/250、1/300、1/500等等5种浓度，每个浓种浓度，每个浓度各取度各取5mL装入试管，作好标记。装入试管，作好标记。水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响配制分装培养基配制分装培养基v取盛有牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管取盛有牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管15支，标记石炭酸的支，标记石炭酸的5种浓度种浓度，每个浓度，每个浓度标记标记3支，分别标记支，分别标记5、10、15min三个作三个作用时间。用时间。v另
10、取盛有牛肉膏蛋白胨液体培养基的试另取盛有牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管管15支，标记来苏尔的支，标记来苏尔的5种浓度种浓度，每个浓，每个浓度标记度标记3支，分别标记支，分别标记5、10、15min三个三个作用时间。作用时间。水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响消毒剂作用细菌消毒剂作用细菌v在在上述盛有不同浓度的石炭酸和来苏尔上述盛有不同浓度的石炭酸和来苏尔溶液的试管中各加入溶液的试管中各加入0.5mL大肠杆菌菌液大肠杆菌菌液摇匀。摇匀。v加入大肠杆菌后分别于加入大肠杆菌后分别于5、10、15min用用接种环自每管内取一环混合液接种到分接种环自每管内取
11、一环混合液接种到分装并作好标记的牛肉膏蛋白胨液体培养装并作好标记的牛肉膏蛋白胨液体培养基试管内。基试管内。水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响培养培养v将上述接种药液处理过的大肠杆菌的试将上述接种药液处理过的大肠杆菌的试管置于管置于37 培养箱中培养培养箱中培养48hr后观察并后观察并记录大肠杆菌生长状况。记录大肠杆菌生长状况。v细菌生长试管内培养液混浊，以细菌生长试管内培养液混浊，以“+”表表示，不生长试管内培养液澄清，以示，不生长试管内培养液澄清，以“-”表示。表示。水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的
12、影响计算石炭酸系数值计算石炭酸系数值v找出将大肠杆菌在药液中处理找出将大肠杆菌在药液中处理5min后仍后仍能生长，而处理能生长，而处理10min和和15min后不生长后不生长的来苏尔及石炭酸的最大稀释倍数，计的来苏尔及石炭酸的最大稀释倍数，计算二者比值。算二者比值。水生态工程实验室水生态工程实验室YJH化学因素对微生物的影响化学因素对微生物的影响消毒剂消毒剂稀释倍数稀释倍数大厂杆菌生长状况大厂杆菌生长状况石炭酸系数石炭酸系数5 5minmin1010minmin1515minmin石炭酸石炭酸505060607070-8080-9090-来苏尔来苏尔150150250/70=3.6250/70=3.6200200250250-300300-500500-水生态工程实验室水生态工程实验室YJH