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1、徐立朋徐立朋药学院药学院新药研究所新药研究所实验室试剂的危害与防护实验室试剂的危害与防护12009.7.3272345一、化学因素致癌一、化学因素致癌二、物理因素致癌二、物理因素致癌三、有毒或危险的化学试剂三、有毒或危险的化学试剂四、实验室安全防护措施四、实验室安全防护措施内容6第一节第一节化学因素致癌化学因素致癌一、化学致癌物的分类一、化学致癌物的分类二、常见的化学致癌物二、常见的化学致癌物三、化学致癌的特点三、化学致癌的特点四、化学致癌物的代谢活化四、化学致癌物的代谢活化五、五、DNA损伤与突变损伤与突变六、基因突变与肿瘤的形成六、基因突变与肿瘤的形成7n n根据化学致癌物的作用方式：根据
2、化学致癌物的作用方式：直接致癌物直接致癌物间接致癌物间接致癌物促癌物促癌物(肿瘤促进剂肿瘤促进剂)n n根据化学致癌物与人类肿瘤的关系可分为根据化学致癌物与人类肿瘤的关系可分为：肯定致癌物肯定致癌物可疑致癌物可疑致癌物潜在致癌物潜在致癌物一、化学致癌物的分类8n n直接致癌物直接致癌物指进入机体后不需代谢就能与细胞直接作用，诱导正常细胞癌变的化学致癌物。这类化学致癌物化学性质活泼、致癌力较强、作用快速。如，亚硝酰胺、致癌性烷化剂。作用方式的分类作用方式的分类9n n间接致癌物间接致癌物是指进入体内后需经微粒体混合功能氧化酶代谢活化变成化学性质活泼的形式才具有致癌作用的化学致癌物。大多数化学致癌
3、物属于这一类。n n促癌物促癌物(肿瘤促进剂肿瘤促进剂)是指单独作用于机体时无致癌作用、但能促进其他致癌物诱发肿瘤形成的化学物质。如，巴豆油、糖精及苯巴比妥。10肯肯定定致致癌癌物物：经过流行病学调查，临床和基础专家均认可，且具有肯定的量效关系。可可疑疑致致癌癌物物：具有体外转化能力，且接触时间与癌症发生率相关，但动物致癌结果不稳定，缺乏流行病学证据。潜潜在在致致癌癌物物：一般在动物实验中可能获得部分阳性结果，无资料证明对人具有致癌性。根据与人类肿瘤的关系根据与人类肿瘤的关系11与人类肿瘤有关的部分致癌物与人类肿瘤有关的部分致癌物肯定致癌物肯定致癌物可疑致癌物可疑致癌物潜在致癌物潜在致癌物砷及
4、砷化物丙烯腈氯仿联苯胺碱性品红DDT苯黄曲霉毒素亚硝基脲石棉二甲基硫酸盐镉及镉化合物2-萘胺氮芥二甲基肼氯乙烯铍及铍化合物钴、硒、铅、汞4-氨基联苯非那西汀肼铬及铬的化合物镍及某些镍的化合物四氯化碳12人类致癌物与人类肿瘤人类致癌物与人类肿瘤 化学致癌物化学致癌物化学致癌物化学致癌物 接触类型接触类型接触类型接触类型 接触途径接触途径接触途径接触途径致癌器官致癌器官致癌器官致癌器官4-4-氨基联苯氨基联苯、联苯胺联苯胺职业职业吸入吸入、皮肤皮肤、径口径口膀胱膀胱砷化合物砷化合物职业职业、医源医源、环境环境吸入吸入、皮肤皮肤、径口径口皮肤、肺、肝皮肤、肺、肝金胺金胺职业职业吸入吸入、皮肤皮肤、径
5、口径口膀胱膀胱-萘胺萘胺职业职业吸入吸入、皮肤皮肤、径口径口膀胱膀胱双二氯乙基双二氯乙基-萘胺萘胺医源医源吸入吸入、皮肤皮肤、径口径口膀胱膀胱煤焦油、矿物油煤焦油、矿物油职业、环境职业、环境吸入吸入、皮肤皮肤、径口径口肺、皮肤、肠道肺、皮肤、肠道 石棉石棉职业、环境职业、环境吸入、径口吸入、径口肺、胸膜、胃肠道肺、胸膜、胃肠道苯苯职业职业吸入、皮肤吸入、皮肤造血系统造血系统双氯甲醚双氯甲醚职业职业吸入吸入肺肺铬和铬化合物铬和铬化合物职业职业吸入吸入肺、鼻腔肺、鼻腔二乙基己烯雌酚二乙基己烯雌酚职业职业径口、局部径口、局部子宫内膜子宫内膜、阴道阴道、宫颈宫颈赤铁矿（氢）赤铁矿（氢）职业职业吸入吸入
6、肺肺异丙醇异丙醇职业职业吸入吸入鼻腔、喉鼻腔、喉左旋苯丙酸氮芥左旋苯丙酸氮芥医源医源径口径口造血系统造血系统芥子气芥子气职业职业吸入吸入肺、喉肺、喉镍镍职业职业吸入吸入鼻腔、肺鼻腔、肺13二、常见的化学致癌物二、常见的化学致癌物1.1.烷化剂（氮芥和硫芥类、环氧化物、已撑亚胺类等）（氮芥和硫芥类、环氧化物、已撑亚胺类等）2.2.亚硝胺类（亚硝酰胺类和亚硝胺类）（亚硝酰胺类和亚硝胺类）3.3.多环芳香烃类（二恶英、二恶英、苯并芘、双苯并芘等）苯并芘、双苯并芘等）4.4.芳香胺与偶氮染料（2-2-萘萘胺胺、联联苯苯胺胺、二二甲甲基基偶偶氮氮苯等）苯等）5.5.生物毒素（植物毒素和微生物毒素）（植物
7、毒素和微生物毒素）6.6.内原性致癌物（雌雌激激素素、肾肾上上腺腺皮皮质质激激素素、脱脱氧氧胆胆酸等）酸等）7.7.无机元素及其化合物141、烷化剂n n化学性质活泼、能直接与体内大分子发生烷化反应。化学性质活泼、能直接与体内大分子发生烷化反应。n n人类与其接触主要为职业性接触。人类与其接触主要为职业性接触。n n可诱发皮肤、呼吸系统、消化系统、造血系统等肿瘤可诱发皮肤、呼吸系统、消化系统、造血系统等肿瘤n n环磷酰胺、氮芥既是抗癌药物，又可诱发继发性肿瘤环磷酰胺、氮芥既是抗癌药物，又可诱发继发性肿瘤环磷酰胺氮芥152、亚硝胺类亚硝胺亚硝酰胺亚硝酰胺亚硝酰胺化学性质活泼，致癌作用强，是直接致
8、癌物。亚硝胺类亚硝胺类：间接致癌物，广泛存在于自然界；环境中存在很多可以合成致癌性亚硝胺的前体物质。主要致食道癌、胃癌、肝癌等163、多环芳香烃类最早认识的致癌物。含多个芳香环，为间接致癌物，以含45个环的致癌性最强。是煤焦油、煤烟、工业废气中的主要致癌成分。174、芳香胺与偶氮染料芳香胺偶氮染料是一类含氮和苯环的化合物，主要存在于着色剂、除草剂、人工合成染料等中。致癌作用较强。致膀胱癌、肝癌。奶油黄2-萘胺联苯胺185、生物毒素微生物毒素：霉菌毒素（黄曲霉毒素、杂色曲霉素等）放线菌毒素（阿霉素、放线菌素D、博来霉素、丝裂霉素C植物毒素：黄酮醇、苏铁素、黄樟素、甲基肼等。如，黄曲霉毒素B1致癌
9、性极强，致肝癌、胃腺癌、肾癌等196、内原性致癌物雌激素乳腺癌等肾上腺皮质激素促癌作用脱氧胆酸大肠癌7、无机元素及其化合物六价铬（Cr6+）、镍（Ni）、三价砷（As3+）、铍（Be）、氡等均有致癌作用；镉（Cd）、铅等对人类可能有致癌性。20三、化学致癌的特点三、化学致癌的特点（一）存在明显的量-效关系（二）具有较长的潜伏期（三）各种致癌物之间存在协同性（四）积累性（五）受宿主因素影响遗传因素、种族、年龄、性别、精神状态等（六）可垂直传播（七）癌症的发生具有多阶段性21四、化学致癌物的代谢活化四、化学致癌物的代谢活化活化活化活化活化降解或结合（降解或结合（II II）前致癌物前致癌物前致癌物
10、前致癌物近致癌物近致癌物近致癌物近致癌物终致癌物终致癌物终致癌物终致癌物解毒产物解毒产物DNADNA加合物加合物加合物加合物排出体外排出体外蛋白质损伤蛋白质损伤DNADNA损伤损伤损伤损伤损伤修复损伤修复损伤修复损伤修复 细胞损伤或死亡细胞损伤或死亡细胞损伤或死亡细胞损伤或死亡基因突变基因突变基因突变基因突变细胞死亡细胞死亡细胞死亡细胞死亡 原癌基因激活原癌基因激活 抑癌基因失活抑癌基因失活细胞癌变细胞癌变细胞癌变细胞癌变22化学致癌物的代谢活化n n生物转化是机体“解毒”或将代谢废物排出体外的重要步骤。一相反应：羟化、氧化、环氧化、氧化裂解、脱烷基。一相反应：羟化、氧化、环氧化、氧化裂解、脱
11、烷基。涉及的最重要的酶是涉及的最重要的酶是混合功能氧化酶混合功能氧化酶二相反应：水解、结合（与葡萄糖醛酸、谷胱甘肽、二相反应：水解、结合（与葡萄糖醛酸、谷胱甘肽、硫酸根等结合）硫酸根等结合）n n生物转化的一相反应是间接致癌物活化的基础。n n混合功能氧化酶系统（包括细胞色素P450和P448）。23HOOHHOHOOHHOHNHNN NN NON NN N与DNA链中鸟嘌呤结合HOOHHOOH水解与谷胱甘肽或葡萄糖醛酸结合解毒排出体外化学致癌物的代谢活化24四、四、DNA的损伤与突变的损伤与突变25插入DNAreplication26插入ProteinSynthesis27（一）DNA加合物
12、的形成与DNA损伤1、致癌物DNA加合物的形成n n非共价结合（常见于体外实验）平面型芳香烃平行地插入两个碱基对之间；另一些致癌物与碱基中不参与碱基配对的部位结合。n n共价结合（体内方式）导致DNA烷化、DNA交联、DNA单、双链断裂等；282、DNA损伤加合物的形成导致碱基替代、缺失、插入、颠换等DNA损伤。致癌物不仅与核DNA结合，还可与线粒体DNA结合。29插入AdditionandDeletionMutations30（二）DNA损伤的修复1.1.直接修复（光修复）：光复活酶（原原核核、低低等等真真核核生生物物，鸟鸟类类，而高等哺乳动物无而高等哺乳动物无）嘧啶二聚体。）嘧啶二聚体。2
13、.2.切除修复：DNA单链断裂修复嘧啶二聚体切除修复糖苷酶介导的碱基切除修复核甘酸切除修复313.重组修复PCR323.重组修复334.错配修复识别出正确的链，切除掉不正确的部分，然后通过DNA聚合酶和DNA连接酶的作用，合成正确配对的双链DNA。34（三）基因突变和染色体突变1.基因突变l l原癌基因活化和抑癌基因失活如，原癌基因Ras的突变、活化抑癌基因p53的失活或转变为癌基因l lDNADNA修复基因的突变修复基因的突变致癌物导致的致癌物导致的DNADNA损伤无法修复损伤无法修复基因突变基因突变DNADNA复制时错配碱基无法纠正复制时错配碱基无法纠正基因突变基因突变35基因突变的种类动
14、画362.2.染色体突变l l染色体重排l l染色体片段丢失l l非整倍体的形成37第二节第二节物理因素致癌物理因素致癌一、致癌物理因素的主要种类一、致癌物理因素的主要种类l l电电离离辐辐射射（微微波波、放放射射性性元元素素产产生生的的各各种种射射线线、紫外线等）紫外线等）n n粒粒子子辐辐射射（粒粒子子、电电子子、中中子子、射射线线、射射线、线、X X射线、紫外线等）射线、紫外线等）n n电电磁磁辐辐射射（极极低低频频或或极极高高频频的的电电磁磁场场可可能能对对人体有致癌作用）人体有致癌作用）l l固固体体和和胶胶体体致致癌癌物物（与与其其物物理理形形状状有有关关，而而与与其化学性质无关）
15、其化学性质无关）38各种粒子的能量质子2MeV；电子11000MeV；粒子5MeV；中子2.514MeV；39二、物理因素致癌的机制l l电离辐射：粒子经过之处产生许多离子对和自由基，这些物质可直接与DNA分子结合，导致DNA损伤。l l紫外线：UVA(320400nm)产生活性氧UVB(290320)、UVC(240290)直 接 断 裂DNA链l l固体和胶体致癌的机理不清。长度8m，直径1.5m的纤维致癌性最强。假说：物体表面因子对细胞的非特异性刺激。40第三节第三节有毒或危险的化学试剂有毒或危险的化学试剂1、实验室危险化学品分类：第第1类类爆炸品：爆炸品：本类化学品系指在外界作用下（如
16、受热、受压、撞击等），能发生剧的化学反应，瞬时产生大的气体和热，使周围压急骤上升，发生爆炸，对周围环境造成破坏的物质。如高氯酸、过氧化氢：强氧化剂，在加热的条件下会引起爆炸。41VEGF&angiogenesis-Cancer42第第2类类压缩气体和液化气体压缩气体和液化气体气体经压缩后贮存于耐压钢瓶内，具有危险性。钢瓶如果在太阳下曝晒或受热，当瓶内压升高至大于容器耐压限时，即能引起爆炸。43第第3类类燃液体燃液体n丙酮(Acetone)：燃、有激性n乙腈(Acetonitrile)：燃、有毒n氯仿(Chloroform)：有毒、有激性、致癌n环己烷(Cyclohexane)：高燃、有激性、有
17、毒n乙醇(Ethanol)：燃n乙酸乙酯(Ethylacetate)：燃、有激性n乙醚(Ether)：燃、有毒n甲醇(Methanol)：燃、有毒44第4类固体、自燃物品和遇湿燃物品n n赤磷，磺。n n白磷。n n属钾，钠，电石等。45第5类氧化剂和有机过氧化物氧化剂具有强的氧化性，按其同的性质遇酸、碱、受潮、强热或与燃物、有机物、还原剂等性质有抵触的物质混存能发生分解，引起燃烧和爆炸。46第6类毒害品指进入肌体后，积达一定的，能与体液和组织发生生物化学作用或生物物学变化，扰乱或破坏肌体的正常生功能，引起暂时性或持久性的病改变，甚至危及生命的物品。毒品分为剧毒品和有毒品。凡生物实验半数致死（
18、LD50）在50mg/kg以下者均称为剧毒品。n溴化乙锭（EB）：强效致突变剂n甲叉双丙烯酰胺：经毒性n四甲基二乙胺（TEMED）：经毒性47第7类放射性物品本类化学品系指放射性比活大于7.410Bq/kg的物品。人体受到过照射或吸入放射性粉尘能引起放射病。48第8类腐蚀品本类化学品系指能灼伤人体组织并对属等物品造成损坏的固体或液体。与皮肤接触在4小时内出现可见坏死现象,或温在55时，对20号钢的表面均匀腐蚀超过6.25mm的固体或液体。492、其他潜在危害物n n临床生物样品：血样、细菌、细胞核蛋白等。经过高温处理后可按常规废物处理。n尖锐的固体废弃物：普通固体废弃物如碎玻璃、针头等要收集到
19、尖锐物专用垃圾箱等待处置。50第四节第四节实验室安全防护措施实验室安全防护措施 级屏障：级屏障：个人防护个人防护，室内防护装置室内防护装置 级屏障：建筑级屏障：建筑 严格的实验室管理制度严格的实验室管理制度 标准操作规程（标准操作规程（SOP）51一、个人防护一、个人防护n安全意识，个人保健：容易疏忽，嫌麻烦等安全意识，个人保健：容易疏忽，嫌麻烦等安全意识，个人保健：容易疏忽，嫌麻烦等安全意识，个人保健：容易疏忽，嫌麻烦等n了解工作性质及病原特点：不同病原体了解工作性质及病原特点：不同病原体了解工作性质及病原特点：不同病原体了解工作性质及病原特点：不同病原体n熟悉实验室及仪器设备：严格执行熟悉
20、实验室及仪器设备：严格执行熟悉实验室及仪器设备：严格执行熟悉实验室及仪器设备：严格执行SOPSOPSOPSOPn良好的操作习惯良好的操作习惯良好的操作习惯良好的操作习惯n严格执行各项制度：避免形式主义严格执行各项制度：避免形式主义严格执行各项制度：避免形式主义严格执行各项制度：避免形式主义n防护用品：防护服（普通服，正压服），手套，防护用品：防护服（普通服，正压服），手套，防护用品：防护服（普通服，正压服），手套，防护用品：防护服（普通服，正压服），手套，口罩，防护镜，口罩，防护镜，口罩，防护镜，口罩，防护镜，洗眼器洗眼器洗眼器洗眼器等等等等5253CO2CO2培养箱使用注意事项培养箱使用注意
21、事项（1 1）组织培养皿需放在塑料盘内进行孵育。）组织培养皿需放在塑料盘内进行孵育。）组织培养皿需放在塑料盘内进行孵育。）组织培养皿需放在塑料盘内进行孵育。（2 2）培养瓶和碟不能叠放。）培养瓶和碟不能叠放。）培养瓶和碟不能叠放。）培养瓶和碟不能叠放。（3 3）定期清洁和消毒定期清洁和消毒定期清洁和消毒定期清洁和消毒。（4 4）防止漏气（）防止漏气（）防止漏气（）防止漏气（CO2CO2）。）。）。）。（5 5）专人管理，每天检查专人管理，每天检查专人管理，每天检查专人管理，每天检查CO2CO2，管道，温度等。管道，温度等。管道，温度等。管道，温度等。（6 6）避免在仪器上堆积物品。）避免在仪器
22、上堆积物品。）避免在仪器上堆积物品。）避免在仪器上堆积物品。54离心机：最易导致污染的设备！离心机：最易导致污染的设备！（1 1）在离心感染性材料时要把其放在密封的离心桶内。）在离心感染性材料时要把其放在密封的离心桶内。）在离心感染性材料时要把其放在密封的离心桶内。）在离心感染性材料时要把其放在密封的离心桶内。（2 2）离心桶在使用后要消毒其表面。）离心桶在使用后要消毒其表面。）离心桶在使用后要消毒其表面。）离心桶在使用后要消毒其表面。（3 3）如果怀疑离心机内有破损情况发生，需要等转头停）如果怀疑离心机内有破损情况发生，需要等转头停）如果怀疑离心机内有破损情况发生，需要等转头停）如果怀疑离心
23、机内有破损情况发生，需要等转头停止止止止3030分钟后再进行消毒。分钟后再进行消毒。分钟后再进行消毒。分钟后再进行消毒。（4 4）避免使用质量差的离心管。）避免使用质量差的离心管。）避免使用质量差的离心管。）避免使用质量差的离心管。（5 5）专人定期维修、保养、检定。）专人定期维修、保养、检定。）专人定期维修、保养、检定。）专人定期维修、保养、检定。（6 6）仪器放置位置要平，可承重，仪器上避免放置物品。）仪器放置位置要平，可承重，仪器上避免放置物品。）仪器放置位置要平，可承重，仪器上避免放置物品。）仪器放置位置要平，可承重，仪器上避免放置物品。55液氮罐液氮罐（1）要小心避免直接接触液氮，）
24、要小心避免直接接触液氮，当把样品管当把样品管移出液氮罐时要小心其会爆裂移出液氮罐时要小心其会爆裂。（2）选用优质冻存管。禁止用玻璃管保存样）选用优质冻存管。禁止用玻璃管保存样品。品。（3）存取样品时需注意防护。应戴防护镜，）存取样品时需注意防护。应戴防护镜，手套，口罩，穿防护服。手套，口罩，穿防护服。56 高压灭菌器高压灭菌器（1）定期检查排水桶。）定期检查排水桶。（2）注意防护，防止烫伤，待温度降）注意防护，防止烫伤，待温度降下后再开盖。下后再开盖。（3）一次高压物不宜过多。）一次高压物不宜过多。（4）检查压力和时间检查压力和时间。57显微镜显微镜（1）注意安全使用载玻片）注意安全使用载玻片
25、（2）按正确方向缓慢调解镜头）按正确方向缓慢调解镜头（3）一次观察样品不宜过多）一次观察样品不宜过多（4）注意劳逸结合注意劳逸结合58冰箱冰箱（1）安全存放样品）安全存放样品（2）专人管理制度）专人管理制度（3）定期检查）定期检查（4）相对分区）相对分区59二、实验室管理程序及制度二、实验室管理程序及制度生物安全实验室管理程序生物安全实验室管理程序成立生物安全委员会成立生物安全委员会编写生物安全手册编写生物安全手册编写各种标准操作程序（）编写各种标准操作程序（）人员培训人员培训实验室管理制度实验室管理制度60生物安全手册生物安全手册1 1、生物安全委员会名单、职责、人员分工及工、生物安全委员会
26、名单、职责、人员分工及工作机制作机制2 2、微生物危害评估：针对研究的病原体的危害、微生物危害评估：针对研究的病原体的危害3 3、实验室管理制度、实验室管理制度4 4、毒种及样品管理制度、毒种及样品管理制度5 5、实验室使用和操作规程、实验室使用和操作规程6 6、实验微生物操作规程、实验微生物操作规程7 7、实验室事故处理及报告规程、实验室事故处理及报告规程618 8、工作人员（含本人签字）实验室准入登记表、工作人员（含本人签字）实验室准入登记表9 9、实验室使用登记表、实验室使用登记表 1 10 0、实验室内仪器设备清单及设备安全注意事、实验室内仪器设备清单及设备安全注意事 项项 1111、
27、仪器设备使用登记表、仪器设备使用登记表 1212、工作人员培训记录、工作人员培训记录 1313、工作人员体检（含血清检查）和免疫接种登、工作人员体检（含血清检查）和免疫接种登 记表记表 62“三废”处理n n废气:1.产生少量有毒气体的实验应在通风橱内进行。通过排风设备将少量毒气排到室外；2.产生大量有毒气体的实验必须具备吸收或处理装置。n n废渣：少量有毒的废渣应埋于地下固定地点。63n n废液废液1.1.对于废酸液，可先用耐酸塑料网纱或玻对于废酸液，可先用耐酸塑料网纱或玻璃纤维过滤，然后加碱中和，调璃纤维过滤，然后加碱中和，调PHPH值至值至6-86-8后可排出，少量废渣埋于地下。后可排出
28、，少量废渣埋于地下。2.2.对于剧毒废液，必须采取相应的措施，对于剧毒废液，必须采取相应的措施，消除毒害作用后再进行处理。消除毒害作用后再进行处理。3.3.实验室内大量使用冷凝用水，无污染可实验室内大量使用冷凝用水，无污染可直接排放。直接排放。644.洗刷用，污染不大，可排入下水道。5.酸、碱、盐水溶液用后均倒入酸、碱盐污水桶、经中和后排入下水道。6.有机溶剂回收于有机污桶内，采用蒸馏、精馏等分离办法回收。7.重金属离子（包括）沉淀法等集中处理.65实验室伤害的预处理1.1.普通伤口：以生理食盐水清洗伤口，以胶普通伤口：以生理食盐水清洗伤口，以胶布固定。布固定。2.2.烧烫烧烫(灼灼)伤：以冷
29、水冲洗伤：以冷水冲洗1515至至3030分钟至散分钟至散热止痛热止痛以生理食盐水擦拭（勿以药膏、牙以生理食盐水擦拭（勿以药膏、牙膏、酱油涂抹或以纱布盖住）膏、酱油涂抹或以纱布盖住）紧急送至医紧急送至医院。（注意事项：水泡不可自行刺破）院。（注意事项：水泡不可自行刺破）3.3.化学药物灼伤：以大量清水冲洗化学药物灼伤：以大量清水冲洗以消毒以消毒纱布或消毒过布块覆盖伤口纱布或消毒过布块覆盖伤口紧急送至医院紧急送至医院处理。处理。66每天离开实验室应该注意：每天离开实验室应该注意：1.该放回冰箱的东西是否放回了，冰箱门是该放回冰箱的东西是否放回了，冰箱门是否关严了。否关严了。2.公用的东西是否还原了。公用的东西是否还原了。3.要清洗的仪器，瓶子是否泡上了。要清洗的仪器，瓶子是否泡上了。4.仪器的电源是否关掉了。仪器的电源是否关掉了。5.试验台面是否清理了。试验台面是否清理了。6.试验记录是否及时写了。试验记录是否及时写了。7.明天要做什么心里是否有个谱！明天要做什么心里是否有个谱！8.门窗是否关好了。门窗是否关好了。67