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1、 实验题目：血红蛋白测定与红细胞计数实验题目：血红蛋白测定与红细胞计数检验诊断学教研室检验诊断学教研室检验诊断学教研室检验诊断学教研室 张群智张群智张群智张群智 教授教授教授教授实验目的要求：实验目的要求：通过血红蛋白测定、红细胞计数实验要求：通过血红蛋白测定、红细胞计数实验要求：1、掌握红细胞计数、血红蛋白测定的原理、方、掌握红细胞计数、血红蛋白测定的原理、方法及注意事项。法及注意事项。2、掌握血细胞计数板的结构、掌握血细胞计数板的结构 一、血红蛋白测定一、血红蛋白测定(Hemoglobin简称简称Hb)（氰化高铁血红蛋白法）（氰化高铁血红蛋白法）【原理原理】血红蛋白中的亚铁离子（血红蛋白中
2、的亚铁离子（Fe2+）被高铁氰）被高铁氰化钾氧化成高离子（化钾氧化成高离子（Fe3+），血红蛋白转化成），血红蛋白转化成高铁血红蛋白，高铁血红蛋白与氰离子（高铁血红蛋白，高铁血红蛋白与氰离子（CN-）结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白。用光）结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白。用光电比色计在电比色计在540nm波长比色。从波长比色。从HicN参考液制参考液制作的标准曲线上读取血红蛋白克数。作的标准曲线上读取血红蛋白克数。【操作操作】取试剂取试剂5毫升加入血液毫升加入血液20ul混匀置混匀置5分钟后分钟后用用721光电比色仪，光电比色仪，540nm波长，试剂为空波长，试剂为空白调白调0点比色，读取光
3、密度，查标准曲线得点比色，读取光密度，查标准曲线得结果。结果。红细胞计数红细胞计数(red blood cell简称简称RBC)显微镜直接计数显微镜直接计数(试管法试管法)【原理原理】一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中显微镜下计数释后，充入血细胞计数池中显微镜下计数一定容积内的细胞，再换算成每升标本的细胞再换算成每升标本的细胞数报告。数报告。【操作方法操作方法】l、取红细胞稀释液、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试毫升，放入一小试管内。管内。2、用血红蛋白吸管吸血至、用血红蛋白吸管吸血至l0ul处。处。3、擦去管尖外部余血将血液迅
4、速轻轻吹入盛、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内，吸上清液嗽洗吸管有红细胞稀释液的试管内，吸上清液嗽洗吸管2-3次，立即摇匀。次，立即摇匀。4、用玻棒取混悬液少量，充入计数池内。、用玻棒取混悬液少量，充入计数池内。5、待、待23分钟，让红细胞完全下沉后，将计分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。红细胞计数的区域红细胞计数的区域:中心大方格中的中心大方格中的5个中方格个中方格(正中一个和四正中一个和四角各一个角各一个)。计数原则计数原
5、则:数上不数下，数左不数右的计数原则即凡压数上不数下，数左不数右的计数原则即凡压在中方格边线在中方格边线(双线双线)上的红细胞，只计上侧与上的红细胞，只计上侧与左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不计入。计入。【计算计算】红细胞数红细胞数/L=5个中方格内红细胞数个中方格内红细胞数510201106或或 红细胞数红细胞数/L=5个中方格内红细胞数个中方格内红细胞数1001012 式中式中5 5个中方格换算成个中方格换算成1个大方格个大方格 10 1个大方格容积为个大方格容积为0.1ul，换算成，换算成1.0 uL。201 血液的稀释倍数血液的稀释倍数
6、106 由由u1换算成换算成L【注意事项注意事项】1、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血，、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有血凝块应重新采操作迅速避免血液凝固，如有血凝块应重新采血。血。同时做血红蛋白测定，白细胞计数和分类同时做血红蛋白测定，白细胞计数和分类计数，在采血时应先做血膜再做红细胞，然后计数，在采血时应先做血膜再做红细胞，然后做白细胞，血红蛋白检验，避免红细胞破坏。做白细胞，血红蛋白检验，避免红细胞破坏。2、充液：、充液：充液前，红细胞复液要充分摇匀，红细胞充液前，红细胞复液要充分摇匀，红细胞悬液注入计数池内要求分布均匀，不可有气泡，悬液注入计数池内要求分布均匀，不可有气泡，亦不可有多余液体外溢。亦不可有多余液体外溢。3、质量控制：、质量控制：中方格内红细胞分布应均匀，健康成人每中方格内红细胞分布应均匀，健康成人每中方格红细胞数约为中方格红细胞数约为80100个，各中方格内个，各中方格内之红细胞相近，如悬殊过大之红细胞相近，如悬殊过大(超过超过10个细胞以个细胞以上的上的)应重混匀再充填。应重混匀再充填。报告方式：报告方式：Hb：gL RBC:l012/L