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1、关于细胞化学染色法第一页，本课件共有69页一、概念一、概念 细胞学和化学相结合的一门科学。细胞学和化学相结合的一门科学。以细胞形态学为基础，结合运用化学反以细胞形态学为基础，结合运用化学反应原理对血细胞内的各种化学物质（酶应原理对血细胞内的各种化学物质（酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等）类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。作定性、定位、半定量分析的方法。第二页，本课件共有69页二、临床应用二、临床应用辅助判断急性白血病的细胞类型辅助判断急性白血病的细胞类型 仅从细胞形态学观察白血病的诊断正确仅从细胞形态学观察白血病的诊断正确率约率约50-70%，如结合细胞化
2、学染色则可，如结合细胞化学染色则可提到提到90%以上。以上。辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断观察疾病疗效和预后观察疾病疗效和预后发病机制的探讨发病机制的探讨第三页，本课件共有69页三、基本步骤三、基本步骤固定固定显示显示复染复染第四页，本课件共有69页固固 定定目的：保持细胞结构及化学成分不变。目的：保持细胞结构及化学成分不变。方法：方法：1.物理法物理法2.干燥、火焰固定干燥、火焰固定2.化学法化学法3.蒸汽固定、液体固定蒸汽固定、液体固定4.（甲醛、乙醇、丙酮等）（甲醛、乙醇、丙酮等）第五页，本课件共有69页显示显示偶氮偶联法偶氮偶联法联苯胺法联苯胺法普
3、鲁士蓝反应普鲁士蓝反应雪夫反应雪夫反应金属沉淀法金属沉淀法第六页，本课件共有69页复复 染染目的：使各种细胞显示出来便于观察目的：使各种细胞显示出来便于观察染核：中性红、甲基绿、苏木精、核固红、染核：中性红、甲基绿、苏木精、核固红、沙黄等沙黄等染浆：伊红、刚果红、光绿等染浆：伊红、刚果红、光绿等第七页，本课件共有69页四、种类四、种类过氧化物酶染色、苏丹黑染色、过氧化物酶染色、苏丹黑染色、中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色过碘酸过碘酸-雪夫反应雪夫反应-醋酸奈酚酯酶染色醋酸奈酚酯酶染色酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色铁染色铁染色第八页，本课件共有69页过氧化物酶染色过氧化物酶染色(P
4、OX)过氧化物酶：过氧化物酶：是中性粒细胞含量最多的一种酶是中性粒细胞含量最多的一种酶 主要存在于线粒体和溶酶体中主要存在于线粒体和溶酶体中 主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒的主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒的过氧化物，使其放出氧，参加细胞内氧化过氧化物，使其放出氧，参加细胞内氧化还原过程。还原过程。第九页，本课件共有69页原理原理Washburn 法法四甲基联苯胺法四甲基联苯胺法改良改良pereira 染色法染色法第十页，本课件共有69页四甲基联苯胺法四甲基联苯胺法H2O2溶酶体颗粒溶酶体颗粒中的中的H2OO2四甲基联苯胺四甲基联苯胺O2联苯胺蓝联苯胺蓝联苯胺蓝亚硝基铁氰化钠联苯胺蓝亚硝
5、基铁氰化钠O2蓝色物质蓝色物质（沉淀）（沉淀）第十一页，本课件共有69页正常细胞的染色反应正常细胞的染色反应粒细胞系统粒细胞系统原粒（可为阴性）分叶（阳性程原粒（可为阴性）分叶（阳性程度逐渐增强）度逐渐增强）嗜酸阳性最强嗜酸阳性最强嗜碱阴性嗜碱阴性单核细胞系统阴性或弱阳性，（颗粒单核细胞系统阴性或弱阳性，（颗粒少而细）少而细）其他细胞阴性其他细胞阴性第十二页，本课件共有69页第十三页，本课件共有69页第十四页，本课件共有69页临床评价：临床评价：辅助诊断急性白血病细胞类型首辅助诊断急性白血病细胞类型首选、最重要的细胞化学染色。选、最重要的细胞化学染色。第十五页，本课件共有69页、帮助鉴别诊断急
6、性白血病的类型、帮助鉴别诊断急性白血病的类型急性粒细胞白血病：急性粒细胞白血病：原粒可呈阳性原粒可呈阳性(粗大，局限性分布），粗大，局限性分布），阴性不可排除。阴性不可排除。急性淋巴细胞白血病：急性淋巴细胞白血病：规定阳性率规定阳性率。急性单核细胞白血病：急性单核细胞白血病：原单可为阴性，少数可弱阳性，（少而细原单可为阴性，少数可弱阳性，（少而细小，常弥散分布）小，常弥散分布）。第十六页，本课件共有69页第十七页，本课件共有69页第十八页，本课件共有69页急性早幼粒细胞白血病与急性单核细胞急性早幼粒细胞白血病与急性单核细胞白血病鉴别白血病鉴别AML-M3 强阳性强阳性 组织细胞白血病、恶性组织
7、细胞病与急单组织细胞白血病、恶性组织细胞病与急单前两者阴性前两者阴性第十九页，本课件共有69页2.成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化活性增高：再生障碍性贫血、感染、急性活性增高：再生障碍性贫血、感染、急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病活性减低：急粒、慢粒、急单、活性减低：急粒、慢粒、急单、MDS、放射病、退化性中性粒细胞放射病、退化性中性粒细胞第二十页，本课件共有69页苏丹黑染色苏丹黑染色原理：能溶解于细胞内含脂结构中，使脂类原理：能溶解于细胞内含脂结构中，使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。物质显示出来，呈棕黑色或深黑
8、色。正常细胞的染色反应同（染色）正常细胞的染色反应同（染色）临床评价临床评价染色特异性高于染色染色特异性高于染色染色敏感性高于染色染色敏感性高于染色第二十一页，本课件共有69页中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色（）（）原理：中性粒细胞胞质中的原理：中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶碱性磷酸酶在在PH9.6的的碱性条件下碱性条件下能水解能水解磷酸奈酚钠磷酸奈酚钠底物，生成底物，生成奈酚奈酚，后者与，后者与偶氮盐偶氮盐偶联形成偶联形成不溶性的有色沉淀定位于胞质中的酶活性不溶性的有色沉淀定位于胞质中的酶活性处。处。第二十二页，本课件共有69页中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色（
9、）原理：原理：磷酸奈酚钠底物磷酸奈酚钠底物 PH9.6 碱性磷酸酶碱性磷酸酶(中性粒细胞胞质中中性粒细胞胞质中)奈酚奈酚+偶氮盐偶氮盐 (有色沉淀有色沉淀)第二十三页，本课件共有69页正常血细胞染色反应正常血细胞染色反应 NAP主要存在于中性成熟粒细胞主要存在于中性成熟粒细胞(杆杆状状分叶分叶)第二十四页，本课件共有69页第二十五页，本课件共有69页第二十六页，本课件共有69页第二十七页，本课件共有69页参考值：成人参考值：成人NAP阳性率阳性率10%-40%；NAP积分积分 40-80分分第二十八页，本课件共有69页积分增加：积分增加：细菌性感染细菌性感染、再生障碍性贫血再生障碍性贫血、骨骨
10、髓增殖性疾病髓增殖性疾病、慢性粒细胞白血病（加、慢性粒细胞白血病（加速期、急变期）、急性淋巴细胞白血病、速期、急变期）、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、骨髓慢性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、骨髓转移癌、肾上腺糖皮质激素及雄激素治疗转移癌、肾上腺糖皮质激素及雄激素治疗后等。后等。第二十九页，本课件共有69页积分下降：积分下降：慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性睡慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合症、恶眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合症、恶性组织细胞病等。性组织细胞病等。第三十页，本课件共有69页疾病的鉴别疾病的鉴别1.类白血病反应慢性粒细胞性白
11、类白血病反应慢性粒细胞性白血病血病2.细菌性感染病毒性感染细菌性感染病毒性感染3.急粒急淋急粒急淋4.恶性淋巴瘤恶性组织细胞病恶性淋巴瘤恶性组织细胞病第三十一页，本课件共有69页5.恶性组织细胞病反应性组织细胞增多恶性组织细胞病反应性组织细胞增多症症6.真性红细胞增多症继发性红细胞增多症真性红细胞增多症继发性红细胞增多症7.原发性血小板增多症继发性血小板增多原发性血小板增多症继发性血小板增多症症8.再生障碍性贫血再生障碍性贫血 阵发性睡眠性血红蛋阵发性睡眠性血红蛋白尿白尿第三十二页，本课件共有69页过碘酸过碘酸-雪夫反应雪夫反应原理：原理：乙二醇基（多糖类物质中）乙二醇基（多糖类物质中）过碘酸
12、过碘酸双醛基无色品红双醛基无色品红紫红色化合物紫红色化合物第三十三页，本课件共有69页正常血细胞染色反应正常血细胞染色反应粒细胞系统粒细胞系统原粒原粒（可为阴性）（可为阴性）分叶（阳性程度逐渐增强）分叶（阳性程度逐渐增强）嗜酸胞质呈红色嗜酸胞质呈红色,颗粒不着色颗粒不着色嗜碱反之嗜碱反之红细胞系统红细胞系统 阴性阴性单核细胞系统单核细胞系统 原单原单（可为阴性）（可为阴性）,其他为阳性。其他为阳性。第三十四页，本课件共有69页第三十五页，本课件共有69页第三十六页，本课件共有69页淋巴：大多阴性，少数阳性。淋巴：大多阴性，少数阳性。巨核及血小板：阳性巨核及血小板：阳性第三十七页，本课件共有69
13、页临床评价临床评价红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）白细胞系统疾病：白细胞系统疾病：急淋：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒急淋：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或块状）或块状）急粒：少数原粒呈阳性急粒：少数原粒呈阳性 急单：可呈阳性急单：可呈阳性第三十八页，本课件共有69页第三十九页，本课件共有69页M5 PAS(+)第四十页，本课件共有69页AML-M6第四十一页，本课件共有69页第四十二页，本课件共有69页AML-M7第四十三页，本课件共有69页M7 PAS(+)第四十四页，本课件共有
14、69页第四十五页，本课件共有69页第四十六页，本课件共有69页第四十七页，本课件共有69页-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色原理原理 -醋酸萘酚醋酸萘酚 PH中性中性 -醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶 -萘酚萘酚+重氮盐重氮盐(坚牢蓝坚牢蓝B)(黑色或灰黑色黑色或灰黑色)第四十八页，本课件共有69页正常血细胞的染色反应正常血细胞的染色反应单核细胞、粒细胞、淋巴细胞（均可单核细胞、粒细胞、淋巴细胞（均可+）单核细胞的阳性可被氟化钠抑制。单核细胞的阳性可被氟化钠抑制。氟化钠抑制率氟化钠抑制率=抑制前的阳性率抑制前的阳性率/积分积分-抑制后的抑制后的 抑制前的阳性率抑制前的阳性率/积分积分 100%第四十
15、九页，本课件共有69页临床评价：临床评价：1、鉴别白血病类型、鉴别白血病类型急单急单急粒急粒急性早幼粒细胞白血病（强阳性，不被急性早幼粒细胞白血病（强阳性，不被抑制）抑制）急性粒单细胞白血病急性粒单细胞白血病第五十页，本课件共有69页其他脂酶染色其他脂酶染色氯乙酸氯乙酸AS-D奈酚脂酶染色奈酚脂酶染色 几乎仅出现在粒细胞、特异性高。几乎仅出现在粒细胞、特异性高。临床意义：临床意义：急性粒细胞白血病有一定数量白血病细胞急性粒细胞白血病有一定数量白血病细胞阳性，可以肯定白血病细胞中有粒系成分，阳性，可以肯定白血病细胞中有粒系成分，阴性不排除急粒。阴性不排除急粒。第五十一页，本课件共有69页醋酸醋酸
16、AS-D萘酚酯酶染色萘酚酯酶染色 染色结果染色结果、临床意义基本同、临床意义基本同-NAE染染色。色。-丁酸萘酚酯酶染色丁酸萘酚酯酶染色 临床意义同临床意义同-NAE染色，特异性低于染色，特异性低于-NAE染色染色第五十二页，本课件共有69页酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色原理：原理：偶氮偶联法：偶氮偶联法：Gomori硫化铅法硫化铅法抗酒石酸酸性磷酸酶染色抗酒石酸酸性磷酸酶染色第五十三页，本课件共有69页第五十四页，本课件共有69页第五十五页，本课件共有69页临床评价：临床评价：诊断多毛细胞白血病诊断多毛细胞白血病 毛细胞呈阳性，阳性反应不被毛细胞呈阳性，阳性反应不被L-酒石酒石酸抑制。酸抑制。
17、第五十六页，本课件共有69页第五十七页，本课件共有69页铁染色铁染色1、原理：、原理：铁铁+亚铁氰化钾亚铁氰化钾酸性环境酸性环境 亚铁氰化铁（兰色）亚铁氰化铁（兰色）第五十八页，本课件共有69页2、正常血细胞的染色反应、正常血细胞的染色反应贮存铁部位：巨噬细胞和幼红细胞贮存铁部位：巨噬细胞和幼红细胞细胞外铁细胞外铁：骨髓小粒的巨噬细胞中：骨髓小粒的巨噬细胞中呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状可将细胞外铁分为（可将细胞外铁分为（-）、（）、（+）、（）、（+）（+）、（）、（+）。）。第五十九页，本课件共有69页细胞内铁细胞内铁：指存在于中幼红、晚幼红、成：指存在于
18、中幼红、晚幼红、成熟红细胞中的铁。熟红细胞中的铁。铁粒幼红细胞铁粒幼红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的：胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。幼红细胞。环形铁粒幼细胞环形铁粒幼细胞：幼红细胞胞质内蓝色颗：幼红细胞胞质内蓝色颗粒在粒在 10(6)颗以上，围核周颗以上，围核周2/3(1/2)以上以上者。者。第六十页，本课件共有69页第六十一页，本课件共有69页第六十二页，本课件共有69页细胞外铁细胞外铁第六十三页，本课件共有69页细胞内铁细胞内铁第六十四页，本课件共有69页环形铁粒幼细胞环形铁粒幼细胞第六十五页，本课件共有69页结果判读：结果判读：细胞外铁：细胞外铁：可分五级标准可分五级标准 (-)：无颗粒
19、：无颗粒 (+)：有少数铁颗粒或偶见铁小珠：有少数铁颗粒或偶见铁小珠(颗粒体积大颗粒体积大于嗜酸性粒细胞的颗粒者称为铁珠于嗜酸性粒细胞的颗粒者称为铁珠)。(+)：有较多的铁颗粒和小珠。：有较多的铁颗粒和小珠。(+)：有很多的铁颗粒、小珠和少数小块状。：有很多的铁颗粒、小珠和少数小块状。(+)：有极多铁颗粒、小珠，有很多的小块，：有极多铁颗粒、小珠，有很多的小块，密集成堆。密集成堆。第六十六页，本课件共有69页 细胞内铁：细胞内铁：用油镜计数用油镜计数100个中、晚幼红细胞，记录胞浆中含个中、晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色铁粒的细胞有蓝色铁粒的细胞(铁粒幼红细胞铁粒幼红细胞)的百分率。的百分率。
20、根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色深浅和根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情况，将铁粒幼红细胞分为四型：颗粒分布情况，将铁粒幼红细胞分为四型：I 型：幼红细胞内含铁粒型：幼红细胞内含铁粒1-2粒；粒；型：幼红细胞内含铁粒型：幼红细胞内含铁粒3-5粒；粒；型：幼红细胞内含铁粒型：幼红细胞内含铁粒610粒；粒；型：幼红细胞内含铁粒型：幼红细胞内含铁粒10粒。粒。第六十七页，本课件共有69页参考范围参考范围：细胞外铁细胞外铁：（+）（）（+）细胞内铁：铁粒幼红细胞细胞内铁：铁粒幼红细胞12%44%，以，以型为主，少数为型为主，少数为型。型。第六十八页，本课件共有69页感谢大家观看第六十九页，本课件共有69页