《参与DNA复制有关的酶和蛋白质.pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《参与DNA复制有关的酶和蛋白质.pptx（51页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、 现在已经知道约现在已经知道约2020多种蛋白质参与复制。多种蛋白质参与复制。（1 1）聚合酶）聚合酶（2 2）解解 链、链、解解 旋旋 酶酶 类类（3 3）引发酶）引发酶（4 4）连接酶）连接酶 下表是与大肠杆菌复制有关的蛋白质。下表是与大肠杆菌复制有关的蛋白质。第1页/共51页蛋白质名称蛋白质名称分子量分子量103U亚基数亚基数 功功 能能每个菌中的每个菌中的分子数分子数毫克蛋白质毫克蛋白质公斤细胞（湿重）公斤细胞（湿重）SSBi蛋白蛋白n蛋白蛋白n 蛋白蛋白n蛋白蛋白dnaCdnaB引发酶引发酶 74 80 25 75 11 29300 6044111161与单链结合与单链结合预引发预引
2、发预引发预引发部位识别部位识别,ATPase预引发预引发预引发预引发移动启动子移动启动子,ATPase引发合成引发合成300 50 30 70 -100 20 50 20 0.5 0.3 0.3 0.2表表与大肠杆菌复制有关的蛋白质与大肠杆菌复制有关的蛋白质接下页接下页BACK第2页/共51页蛋白质名称蛋白质名称分子量分子量103U亚基数亚基数 功功 能能每个菌中的分子每个菌中的分子数数毫克蛋白质毫克蛋白质公斤细胞（湿重）公斤细胞（湿重）Pol 全酶全酶 140 25 10 37 52 32 831121211链的延长链的延长30020 0.5Pol 1091填补缺口和切去引填补缺口和切去引物
3、物30010连接酶连接酶 741连接连接30010拓扑异构酶拓扑异构酶 400 210 190422引进超螺旋引进超螺旋_25025rep 蛋白蛋白 解链酶解链酶dnaA 65 75 4811解开双链解开双链复制起始复制起始5050002000.6Rep蛋白是一种大肠杆菌解链酶蛋白是一种大肠杆菌解链酶第3页/共51页1DNA聚合酶聚合酶DNA聚聚合合酶酶是是指指以以脱脱氧氧核核苷苷三三磷磷酸酸作作为为底底物物催催化化合合成成DNA的一类酶。的一类酶。全称：全称：DNA依赖的依赖的DNA聚合酶聚合酶(DNA-dependentDNApolymerase)简称：简称：DNA-pol活性：1.53
4、的聚合活性的聚合活性2.核酸外切酶活性核酸外切酶活性第4页/共51页所有DNA聚合酶的作用方式基本相似。它们催化脱氧核苷三磷酸加到复制中的DNA链的3羟基末端，合成方向从53，由模板决定加上何种脱氧核苷酸。第5页/共51页5AGCTTCAGGATA3|3TCGAAGTCCTAGCGAC53 5 外切酶活性外切酶活性5 3 外切酶活性外切酶活性?能切除突变的能切除突变的DNA片段和片段和RNA引物。引物。能辨认错配的碱基对，并将其水解。能辨认错配的碱基对，并将其水解。核酸外切酶活性核酸外切酶活性 目录第6页/共51页第7页/共51页DNADNA聚合酶的分类聚合酶的分类DNA-pol主要的修复酶主
5、要的修复酶DNA-pol次要的修复酶次要的修复酶DNA-pol复制酶复制酶DNA-polIVSOS修复修复DNA-polVSOS修复修复原核生物的聚合酶原核生物的聚合酶第8页/共51页(1)大肠杆菌大肠杆菌DNA聚合酶聚合酶I(Pol)纯纯的的DNA聚聚合合酶酶I由由分分子子量量109000U(109KD)，含含928个个氨氨基基酸酸残残基基的的一一条肽链构成，每个大肠杆菌细胞中大约含条肽链构成，每个大肠杆菌细胞中大约含400个酶分子。个酶分子。(单链多肽）单链多肽）功能功能：对复制中的错误进行校读，对复制和对复制中的错误进行校读，对复制和修复中出现的空隙进行填补。修复中出现的空隙进行填补。第
6、9页/共51页323个氨基酸个氨基酸小片段（小片段（34KD）5 核酸外切酶活性核酸外切酶活性大片段大片段/Klenow片段片段（76KD）604个氨基酸个氨基酸DNA聚合酶活性聚合酶活性 5 核酸外切酶活性核酸外切酶活性N端端C端端枯草杆菌蛋白酶或枯草杆菌蛋白酶或胰蛋白酶胰蛋白酶DNA-pol第10页/共51页DNA聚合酶聚合酶的的多种活性。多种活性。53聚合活性：聚合活性：在模板指导下，以脱氧核苷三磷酸为底物在引物在模板指导下，以脱氧核苷三磷酸为底物在引物3-OH末端加上脱氧核苷末端加上脱氧核苷酸酸。每个酶分子每分钟添加。每个酶分子每分钟添加1000个单核苷酸。个单核苷酸。聚合酶催化的聚合
7、酶催化的DNA的合成需要以下条件：的合成需要以下条件：模板模板 四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸 必须有一必须有一3-OH末端的引物，且此引物必须与模板正确形成氢键末端的引物，且此引物必须与模板正确形成氢键合成从合成从53方向进行，如图方向进行，如图7-8和图和图7-9所示所示第11页/共51页第12页/共51页 35外切酶活性：外切酶活性：没有脱氧核苷三磷酸底物时没有脱氧核苷三磷酸底物时，DNA聚合酶聚合酶I能从能从3-OH开开始以始以35方向水解方向水解DNA，产生，产生5-单核苷酸。单核苷酸。实际上实际上DNA复制时，加上去的脱氧核苷酸不一定每次都正复制时，加上去的脱氧核苷酸不一定每次都正确
8、，错误的机会不少，有时甚至加上一个不与模板配对的核苷确，错误的机会不少，有时甚至加上一个不与模板配对的核苷酸，酸，当当3-OH末端的碱基不与模板配对时聚合酶就无聚合活性，末端的碱基不与模板配对时聚合酶就无聚合活性，此时它具有的此时它具有的35外切酶活性可以切除这个不配对的核苷酸，外切酶活性可以切除这个不配对的核苷酸，这一碱基切除后，外切核酸酶活性终止，聚合酶活性恢复，这一碱基切除后，外切核酸酶活性终止，聚合酶活性恢复，如如图图7-10所示。所以聚合酶的所示。所以聚合酶的35外切酶活性也叫外切酶活性也叫修补活性修补活性。第13页/共51页第14页/共51页53外切酶活性：外切酶活性：DNA聚合酶
9、聚合酶I具有具有53外切酶活性。外切酶活性。如图如图7-11，其特点是：，其特点是：只能在只能在5-P末端一个接一个地切除核苷酸；末端一个接一个地切除核苷酸；能连续地切除多个核苷酸；能连续地切除多个核苷酸；只只切切除除配配对对的的5-P末末端端核核苷苷酸酸，不不切切除除不不配配对对的的单单链链5-P末端核苷酸；末端核苷酸；既能切除脱氧核苷酸也能切除核苷酸；既能切除脱氧核苷酸也能切除核苷酸；对对只只具具有有5-P末末端端的的切切口口也也有有活活性性（由由于于在在DNA复复制制过过程程中中一一般般情情况况下下只只在在RNA引引物物处处才才有有缺缺口口，因因此此53外外切切酶酶活活性的主要功能是切除
10、核糖核苷酸引物性的主要功能是切除核糖核苷酸引物）。）。第15页/共51页第16页/共51页切口翻译切口翻译(nicktranslation)DNA聚合酶聚合酶I的的53外切酶活性和聚合活性同时作用可外切酶活性和聚合活性同时作用可以进行切口翻译以进行切口翻译(nicktranslation)，用来，用来制造放射性探针制造放射性探针。在反应物里加入同位素标记的脱氧单核苷酸，在反应物里加入同位素标记的脱氧单核苷酸，DNA聚合酶聚合酶I首先利用首先利用53外切酶活性，从切口处逐个切下外切酶活性，从切口处逐个切下DNA上的核苷上的核苷酸，再利用酸，再利用3-OH末端聚合作用末端聚合作用逐个将标记的核苷酸
11、加上去逐个将标记的核苷酸加上去(图图712)。第17页/共51页5353第18页/共51页内切酶活性：内切酶活性：DNA聚聚合合酶酶I也也具具有有53内内切切酶酶活活性性，如如图图7-13所所示示。在在两两个个碱碱基基之之间切开产生一个具有间切开产生一个具有5-P末端的末端的不配对碱基的片段不配对碱基的片段。很多实验证明很多实验证明DNA聚合酶聚合酶I在大肠杆菌复制中不是主要的合成酶，而在大肠杆菌复制中不是主要的合成酶，而是是在除去在除去RNA引物和损伤修复中起重要作用。引物和损伤修复中起重要作用。第19页/共51页不配对的片段不配对的片段内切酶活性内切酶活性第20页/共51页（2）大肠杆菌大
12、肠杆菌DNA聚合酶聚合酶 DNA聚聚合合酶酶缺缺陷陷的的突突变变株株仍仍能能生生存存，这这表表明明DNApol不不是是DNA复复制制的的主主要要聚聚合合酶酶。人人们们开开始始寻寻找找另另外外的的DNA聚聚合合酶酶，并并于于1970年发现了年发现了DNApol。从从53方向合成方向合成DNA 具有具有35外切酶活性外切酶活性，但没有，但没有53外切酶活性。外切酶活性。在体外的合成速率比体内的速率要低得多，带有这个酶缺陷在体外的合成速率比体内的速率要低得多，带有这个酶缺陷的大肠杆菌突变株染色体的复制各方面都正常，它在体内的功能的大肠杆菌突变株染色体的复制各方面都正常，它在体内的功能可能和可能和DN
13、A聚合酶聚合酶I类似。类似。第21页/共51页(3)大肠杆菌大肠杆菌DNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶是体内是体内DNA复制所必需的酶复制所必需的酶带带有有DNA聚聚合合酶酶的的温温度度敏敏感感突突变变(polc)的的大大肠肠杆杆菌菌在在限限制制温温度度下下是是不不能能存存活活的的，从从这这种种菌菌株株得得到到的的裂裂解解液液也也不不能能合合成成DNA，当当加加入入正正常常细细菌菌的的DNA聚聚合合酶酶时时可可以以恢恢复复它它的的聚聚合合能能力力，因因此此不不同同于于DNA聚聚合酶合酶I和和，聚合酶聚合酶是体内是体内DNA复制所必需的酶。复制所必需的酶。DNA多多聚聚酶酶相相当当复复杂杂，其其结结
14、构构和和各各亚亚基基的的功功能能如如图图1124，25所示。所示。DNA pol 具有具有53聚合功能。聚合功能。第22页/共51页DNA聚合酶聚合酶 的的“核心酶核心酶”由由、三种亚基组成。三种亚基组成。亚基具有合成亚基具有合成DNA的能力。的能力。亚基具有亚基具有35外切酶的功能，起到外切酶的功能，起到校正的作用。校正的作用。亚基可能在组装中发挥功能。亚基可能在组装中发挥功能。亚基加到核心酶上使其二聚化，亚基加到核心酶上使其二聚化，进一步产生进一步产生pol III。复合体加入到复合体加入到pol，进一，进一步形成步形成 pol 复合体。复合体。复合体是由复合体是由，和和亚基组成，其作用是
15、固定亚基组成，其作用是固定亚基这个亚基这个“夹子夹子”的支架。的支架。亚基亚基：形成夹钳，保持催化核形成夹钳，保持催化核心和模板链的结合心和模板链的结合第23页/共51页聚合酶聚合酶的活性的活性聚聚合合活活性性：DNA复复制制时时聚聚合合酶酶全全酶酶十十分分重重要要，它它可可以以在在DNA模模板板上上的的引引物物的的3-OH上上以以每每分分钟钟约约50000核核苷苷酸酸的的速速率逐个延伸新生的率逐个延伸新生的DNA。35和和53的外切酶活性：的外切酶活性：pol的的53外外切切酶酶活活性性与与pol的的不不同同，pol的的53外外切切酶酶活活性性只只对对单单链链 DNA有有作作用用，因因此此不
16、不能能用用于于缺缺口口翻翻译译。DNA聚合酶聚合酶的作用范围如图的作用范围如图7-14所示。所示。第24页/共51页第25页/共51页催化DNA聚合参与DNA损伤的应急状态修复修复合成、切除引物、填补空隙功能2040400分子数/细胞1011亚基数+-+5 外切酶活性+5 外切酶活性+5 聚合酶活性polIIIpolIIpolIE.Coli中的中的DNA聚合酶聚合酶第26页/共51页(4)真核生物中的真核生物中的DNA聚合酶聚合酶所有真核生物中的聚合酶的性质基本上同大肠杆菌中的所有真核生物中的聚合酶的性质基本上同大肠杆菌中的聚合酶相似，它的活性有赖于模板，带聚合酶相似，它的活性有赖于模板，带3
17、-OH的引物，四种脱的引物，四种脱氧核糖核苷磷酸。氧核糖核苷磷酸。目前发现的真核生物目前发现的真核生物DNA聚合酶有聚合酶有。DNA聚聚合合酶酶：在在迅迅速速增增殖殖的的细细胞胞中中活活力力较较高高。酶酶分分子子量量在在165,000一一175,000U之之间间。最最合合适适的的底底物物是是带带缺缺口口的的双双链链DNA，但但是是带带引引物物的的变变性性DNA也也是是很很好好的的底底物物。是是真真核核生生物物的复制酶。的复制酶。它它同同大大肠肠杆杆菌菌DNA聚聚合合酶酶最最大大不不同同之之处处在在于于不不具具外外切切酶酶活性活性。第27页/共51页DNA聚聚合合酶酶(损损伤伤修修复复)：为为分
18、分子子量量较较小小(43,000U)的的聚聚合合酶酶。在在整整个个细细胞胞周周期期中中它它的的活活力力没没有有变变化化，它它利利用用DnaseI处处理理过过的的天天然然DNA作作模模板板，对对变性变性DNA几乎没有活性，不具外切酶的活性几乎没有活性，不具外切酶的活性。DNA聚聚合合酶酶（线线粒粒体体）：是是一一个个大大分分子子酶酶，在在细细胞胞内内含含量量很很低低，因因此此不不容容易易纯纯化化。这这个个酶酶可可以以使使用用带带缺缺口口的的DNA作作底底物物，但但以以多多聚聚(A)、寡寡聚聚(dT)8-10作为底物，酶活力更高。作为底物，酶活力更高。DNA聚合酶聚合酶负责线粒体负责线粒体DNA的
19、复制。的复制。DNA聚聚合合酶酶和和DNA聚聚合合酶酶（主主要要复复制制酶酶）:是是真真核核生生物物的的复复制制酶酶，主主要根据是聚合酶要根据是聚合酶的活性随细胞周期而变化。的活性随细胞周期而变化。DNA聚合酶聚合酶：功能不详。：功能不详。第28页/共51页2DNA连接酶连接酶DNALigaseDNA连连接接酶酶催催化化一一个个DNA链链的的5磷磷酸酸根根与与另另一一DNA链链的的3羟基形成磷酸二酯键。羟基形成磷酸二酯键。但但两两个个链链都都必必须须与与同同一一另另外外的的链链互互补补结结合合，而而且且两两链链必必须须相相邻邻，即即只只能能连连接接一一个个切切口口(nick)而而不不能能连连接
20、接一一个个豁豁口口(gap)(丢丢失核苷酸失核苷酸)，如，如图图7-15所示。所示。例例子子：T4诱诱导导的的连连接接酶酶不不仅仅能能在在模模板板上上连连接接DNA和和DNA之之间间的的切切口口，也也能能连连接接RNA和和RNA之之间间的的切切口口，不不仅仅能能连连接接DNA中中的的单单链链切切口口或或双双链链的的粘粘性性末末端端，而而且且能能连连接接平平头头双双链链DNA。大大肠肠杆菌连接酶则不行杆菌连接酶则不行。第29页/共51页第30页/共51页3与解链有关的酶和蛋白质与解链有关的酶和蛋白质DNA是双螺旋，在复制中双螺旋要解开，双螺旋的解是双螺旋，在复制中双螺旋要解开，双螺旋的解开使得复
21、制叉前面产生正超螺旋，如果这些应力不以某种开使得复制叉前面产生正超螺旋，如果这些应力不以某种方式释放将妨碍复制叉前进。方式释放将妨碍复制叉前进。现在已找到一些酶和蛋白质，它们或者能使现在已找到一些酶和蛋白质，它们或者能使DNA双链双链变得易于解开，或者可以使超螺旋分子松弛，以下介绍一变得易于解开，或者可以使超螺旋分子松弛，以下介绍一些这类蛋白质。些这类蛋白质。第31页/共51页(1)单链结合蛋白单链结合蛋白(SSB蛋白蛋白)SSB蛋蛋白白：是是缺缺乏乏酶酶活活性性的的复复制制辅辅助助蛋蛋白白，可可以以在在远远低低于于Tm的的温温度度下下使使双双链链DNA拆拆开开，并并牢牢牢牢地地结结合合在在单
22、单链链DNA上上，稳稳定定单单链链区区域域的的蛋蛋白白质质。（SSB保保护护复复制制中中的的DNA单单链链部部分分不被核酸酶降解）不被核酸酶降解）首首先先在在大大肠肠杆杆菌菌中中发发现现，后后来来发发现现许许多多种种生生物物中中都都有有这这类类蛋蛋白白质质。在在文文献献中中，这这类类蛋蛋白白曾曾用用过过多多种种名名称称：解解旋旋蛋蛋白白(unwindingproteill)，熔熔化化蛋蛋白白(mel2ingprptein)，螺螺旋旋降降稳稳蛋蛋白白(helixdestabizingprotein)。第32页/共51页(2)解链酶（解链酶（DNA解旋酶；解旋酶；DNAhelicases）解解链链
23、酶酶(解解螺螺旋旋酶酶)：是是一一类类能能通通过过水水解解ATP获获得得能能量量来来解解开开双链双链DNA的酶称为的酶称为DNA解链酶解链酶。解链酶依赖于单链解链酶依赖于单链DNA的存在的存在分解分解ATP获得能量获得能量具具引发酶的功能引发酶的功能（合（合成小片段的成小片段的RNA作为后随链的引物作为后随链的引物）如如果果双双链链DNA中中有有单单链链末末端端或或缺缺口口，则则DNA解解链链酶酶可可以以首首先先结结合合在在这这一一部部分分，然然后后逐逐步步向向双双链链方方向向移移动动，复复制制时时大大部部分分DNA解解链链酶酶可可以以沿沿着着后后随随链链模模板板的的53方方向向随随着着复复制
24、制叉叉的的前前进进而而移移动动，只只有有rep蛋蛋白白（一一种种大大肠肠杆杆菌菌解解链链酶酶）是是沿沿前前导导链链模模板板的的35方方向向移移动动。因因此此在在复复制制时时rep蛋蛋白白和和某某DNA解解链链酶酶分分别别在在DNA的的两两条母链上协同作用以解开双链条母链上协同作用以解开双链DNA（图图7-16）第33页/共51页第34页/共51页第35页/共51页 (3)拓扑异构酶(Topoisomerase)：是催化DNA拓扑异构体(Topoisomer)相互转换的一类酶。拓扑异构酶能与DNA形成共价结合的蛋白质-DNA中间体，从而在其骨架的磷酸二酯键处造成暂时性裂口，使DNA的多核苷酸链得
25、以穿越，从而改变DNA分子的拓扑状态。根据酶作用的机理及其介导一条链还是二条链的断裂，拓扑异构酶可分为型和型。第36页/共51页 型拓扑异构酶的共同特点是：仅切断双链DNA中的一条链，即催化瞬时的单链断裂和连接。不需要能量辅助因子，如ATP和NAD等，因此不能催化需能的超螺旋化结构。型拓扑异构酶一般都使高度超螺旋的DNA松弛。型拓扑异构酶的共同特点是：同时切断、缝合DNA的两条链。需要能量辅助因子，可以作用于任何相交的两对双链DNA。第37页/共51页大肠杆菌拓扑异构酶大肠杆菌拓扑异构酶I（属于（属于型酶型酶）概述：拓扑异构酶概述：拓扑异构酶 (E.coli)催化负超螺旋催化负超螺旋DNA的的
26、松弛松弛。拓扑异构酶拓扑异构酶也参与也参与DNA的打结和解结。的打结和解结。将两个互补的单链将两个互补的单链DNA环耦合为双链环耦合为双链DNA环。环。完整的全酶是一分子量完整的全酶是一分子量97 kDa的蛋白。的蛋白。第38页/共51页 大肠杆菌拓扑异构酶 I 的特点是：仅切断双链DNA中的单链并催化瞬时的单链断裂和连接。由于反应的产物还是闭环DNA，因此，酶反应机制是先切开双链DNA中的一条链，使切开链的末端沿螺旋的方向转动，然后把切口封起来，达到松旋的目的。不需要能量辅助因子。如：ATP NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)，最初从大肠杆菌中分离到一种叫蛋白，后来定名为大肠杆菌拓扑异构酶 I。
27、第39页/共51页StructureoftheTopoI/contactwithDNA第40页/共51页后后来来发发现现这这种种酶酶广广泛泛存存在在于于各各种种生生物物中中，不不同同学学者者曾曾给给予予各各种种命命名名：转转轴轴酶酶(swivelase)，松松旋旋酶酶(untwistingenzyme)，DNA松松 弛弛 酶酶(DNA relaxing enzyme)，切切 割割 封封 口口 酶酶(nickingclosingenzyme)。TopoI酶酶松松弛弛超超螺螺旋旋DNA时时不不需需要要ATP，它它可可以以催催化化三三种拓扑转换反应种拓扑转换反应(图图7-17)。第41页/共51页拓
28、扑异构酶拓扑异构酶 I(E.coli)催化负超螺旋催化负超螺旋DNA的的松弛。松弛。拓扑异构酶拓扑异构酶 I也参与也参与DNA的打结和解结。的打结和解结。将两个互补的单链将两个互补的单链DNA环耦合为双链环耦合为双链DNA环。环。第42页/共51页TopoIReactions仅切断双链DNA的一条链，即催化瞬时的单链断裂和连接，不需要能量辅助因子如ATP和NAD等第43页/共51页TopoI作用机制23图图2-21拓扑异构酶拓扑异构酶的作用机制的作用机制第44页/共51页拓扑异构酶拓扑异构酶（属于（属于型酶）型酶）概概述述：Topo广广泛泛存存在在于于各各种种生生物物中中，它它是是完完成成复复
29、制制所所必必需需的的一一种种酶酶，可可使使完完成成复复制制后后的的两两个个子子代代环状双链环状双链DNA互相分开。互相分开。第45页/共51页 大肠杆菌拓扑异构酶 的共同特点是：同时切断、缝合双链DNA的两条链，不需要单链切口存在，它使松弛的双股环型DNA转化为负超螺旋DNA。需要能量辅助因子 如：ATP NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)。拓扑异构酶没有DNA特异性。拓扑异构酶 又称DNA旋转酶(DNA gyrase)，或紧旋拓扑异构酶(twisting topoisomerase)，它由两个亚基和两个亚基组成。第46页/共51页拓扑异构酶拓扑异构酶可以在水解可以在水解ATP的同时使松弛的同时使
30、松弛状态环状状态环状DNA转变为负超螺旋转变为负超螺旋DNA，其反应机制，其反应机制不同于拓扑异构酶不同于拓扑异构酶I，每次引起的超螺旋数变化，每次引起的超螺旋数变化为为2(见图见图7-18)。这种反应说明拓扑异构酶这种反应说明拓扑异构酶每次能使每次能使DNA的的两条链同时切断，让另一条双链两条链同时切断，让另一条双链DNA穿过断口，穿过断口，再将已切断的末端重新封接起来，其反应过程可再将已切断的末端重新封接起来，其反应过程可参考图参考图7-19。第47页/共51页TopoII作用机制图图2-22E.coliDNA旋转酶导入负超螺旋的作用机理旋转酶导入负超螺旋的作用机理第48页/共51页TopoIIReactions26同时切断、缝合DNA的两条链，不需要单链切口存在，因而每个反应后改变两个链环数；需要能量辅助因子。第49页/共51页希腊字母读法阿拉法阿拉法北塔北塔咖吗咖吗德儿塔德儿塔易普塞龙易普塞龙贼塔贼塔姨塔姨塔习塔习塔哎欧塔哎欧塔卡怕卡怕蓝母达蓝母达谬谬拗拗可赛可赛欧麦克龙欧麦克龙派派漏漏西格马西格马掏掏优普塞龙优普塞龙faifai（夫爱切）（夫爱切）开（去声）开（去声）坡赛坡赛欧梅咖欧梅咖除特殊说明，除特殊说明，“汉译汉译”最后一最后一个音节为轻声。个音节为轻声。第50页/共51页感谢您的观看。第51页/共51页