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1、会计学1实验三实验三 环境因素对微生物的影响环境因素对微生物的影响一、实验目的一、实验目的1.1.了解了解温度温度对微生物生长的影对微生物生长的影响；响；2.2.了解了解抗生素抗生素（青霉素、氨苄（青霉素、氨苄青霉素等）的抗菌范围，学青霉素等）的抗菌范围，学习抗菌谱试验的基本方法。习抗菌谱试验的基本方法。3.3.了解了解消毒剂消毒剂（碘酒或酒精）（碘酒或酒精）对微生物分布的影响。对微生物分布的影响。4.4.了解了解紫外线紫外线杀菌对微生物的杀菌对微生物的作用特点作用特点第1页/共17页二、实验原理二、实验原理1.1.1.1.温度温度温度温度:影响微生物生长与存活的最重要因素。影响微生物生长与存
2、活的最重要因素。影响微生物生长与存活的最重要因素。影响微生物生长与存活的最重要因素。n n自然界的微生物可根据对温度的适应性分为自然界的微生物可根据对温度的适应性分为自然界的微生物可根据对温度的适应性分为自然界的微生物可根据对温度的适应性分为低温型、中温型和高温型。低温型、中温型和高温型。低温型、中温型和高温型。低温型、中温型和高温型。n n但不管哪一种温度型的微生物，都有生长温但不管哪一种温度型的微生物，都有生长温但不管哪一种温度型的微生物，都有生长温但不管哪一种温度型的微生物，都有生长温度范围。分为度范围。分为度范围。分为度范围。分为最高、最适和最低最高、最适和最低最高、最适和最低最高、最
3、适和最低生长温度。生长温度。生长温度。生长温度。在最适宜温度里生长良好：超过最高温度细在最适宜温度里生长良好：超过最高温度细在最适宜温度里生长良好：超过最高温度细在最适宜温度里生长良好：超过最高温度细胞死亡；低于最低温度细胞被抑制或死亡。胞死亡；低于最低温度细胞被抑制或死亡。胞死亡；低于最低温度细胞被抑制或死亡。胞死亡；低于最低温度细胞被抑制或死亡。第2页/共17页2.2.2.2.抗生素抗生素抗生素抗生素对微生物生长的影响：抗生素是对微生物生长的影响：抗生素是对微生物生长的影响：抗生素是对微生物生长的影响：抗生素是某些微生某些微生某些微生某些微生物物物物在生长代谢过程中在生长代谢过程中在生长代
4、谢过程中在生长代谢过程中产生的产生的产生的产生的能抑制或杀死其它微能抑制或杀死其它微能抑制或杀死其它微能抑制或杀死其它微生物的生物的生物的生物的次生代谢产物次生代谢产物次生代谢产物次生代谢产物。每种抗生素都有它固定的。每种抗生素都有它固定的。每种抗生素都有它固定的。每种抗生素都有它固定的抗菌范围和抗菌谱。抗菌范围和抗菌谱。抗菌范围和抗菌谱。抗菌范围和抗菌谱。pp例如例如例如例如青霉素青霉素青霉素青霉素只对只对只对只对革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌具有抗菌作用；具有抗菌作用；具有抗菌作用；具有抗菌作用；多多多多粘菌素粘菌素粘菌素粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称只对革兰
5、氏阴性菌有作用，这类抗生素称只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为为为为窄谱抗生素窄谱抗生素窄谱抗生素窄谱抗生素；pp另一些抗生素对多种细菌具有作用，例如另一些抗生素对多种细菌具有作用，例如另一些抗生素对多种细菌具有作用，例如另一些抗生素对多种细菌具有作用，例如四环素四环素四环素四环素、土霉素土霉素土霉素土霉素对许多革兰氏阳性菌和阴性菌都有作用称对许多革兰氏阳性菌和阴性菌都有作用称对许多革兰氏阳性菌和阴性菌都有作用称对许多革兰氏阳性菌和阴性菌都有作用称为为为为广谱抗生素。广谱抗生素。广谱抗生素。广谱抗生素。二、实验原理二、实验原理第3页/共17页n n比如比
6、如氨苄青霉素氨苄青霉素，对革兰，对革兰氏阳性球菌、氏阳性球菌、变形杆菌变形杆菌、沙门氏菌、痢疾杆菌、产沙门氏菌、痢疾杆菌、产气荚膜杆菌、气荚膜杆菌、大肠杆菌大肠杆菌及流感杆菌等都有很好的及流感杆菌等都有很好的抗菌效果。抗菌效果。二、实验原理二、实验原理第4页/共17页3.3.化学消毒剂化学消毒剂对微生物分对微生物分布的影响布的影响 人体人体皮肤皮肤分布着一定分布着一定种类与数量的微生物。使种类与数量的微生物。使用用化学消毒剂化学消毒剂对皮肤进行对皮肤进行表面消毒表面消毒是医院里进行无是医院里进行无菌操作常用的方法之一。菌操作常用的方法之一。二、实验原理二、实验原理第5页/共17页4.4.4.4
7、.紫外线紫外线紫外线紫外线的杀菌作用的杀菌作用的杀菌作用的杀菌作用 波长为波长为波长为波长为200-300nm200-300nm200-300nm200-300nm的紫外线都有杀菌能力，的紫外线都有杀菌能力，的紫外线都有杀菌能力，的紫外线都有杀菌能力，其中以其中以其中以其中以260nm260nm260nm260nm的杀菌能力最强的杀菌能力最强的杀菌能力最强的杀菌能力最强。其杀菌机理。其杀菌机理。其杀菌机理。其杀菌机理是是是是抑制抑制抑制抑制DNADNADNADNA复制，以及产生复制，以及产生复制，以及产生复制，以及产生臭氧和臭氧和臭氧和臭氧和H H H H2 2 2 2O O O O2 2 2
8、 2 而产而产而产而产生一定的杀菌作用。但紫外线生一定的杀菌作用。但紫外线生一定的杀菌作用。但紫外线生一定的杀菌作用。但紫外线穿透力弱穿透力弱穿透力弱穿透力弱，一，一，一，一般适用于般适用于般适用于般适用于表面消毒表面消毒表面消毒表面消毒和和和和空气消毒空气消毒空气消毒空气消毒。二、实验原理二、实验原理第6页/共17页三、实验材料1、菌种：大肠杆菌、白色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等。2、药敏片:青霉素、庆大霉素、环丙沙星、菌必治第7页/共17页四、实验步骤四、实验步骤1.1.1.1.温度温度温度温度对微生物生长的影响（对微生物生长的影响（对微生物生长的影响（对微生物生长的影响（每组每组每组每组）（
9、1 1 1 1）菌种菌种菌种菌种：大肠杆菌：大肠杆菌：大肠杆菌：大肠杆菌(白葡白葡白葡白葡)、枯草芽孢杆菌。、枯草芽孢杆菌。、枯草芽孢杆菌。、枯草芽孢杆菌。（2 2 2 2）培养基培养基培养基培养基：取肉汤培养基：取肉汤培养基：取肉汤培养基：取肉汤培养基（液体培养基）（液体培养基）（液体培养基）（液体培养基）5 5 5 5支支支支。（3 3 3 3）接种接种接种接种：分别接种：分别接种：分别接种：分别接种大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌(白葡白葡白葡白葡)和和和和枯草芽孢杆枯草芽孢杆枯草芽孢杆枯草芽孢杆菌菌菌菌各各各各2 2 2 2支支支支试管，余下试管，余下试管，余下试管，余下1 1 1 1
10、支不接种支不接种支不接种支不接种作阴性作阴性作阴性作阴性对照对照对照对照。（4 4 4 4）加热加热加热加热：取接种的：取接种的：取接种的：取接种的大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌(白葡白葡白葡白葡)和和和和枯草芽孢杆枯草芽孢杆枯草芽孢杆枯草芽孢杆菌菌菌菌培养基各培养基各培养基各培养基各1 1 1 1支，于支，于支，于支，于100100100100作用作用作用作用15min15min15min15min后取出，冷水后取出，冷水后取出，冷水后取出，冷水冲凉。冲凉。冲凉。冲凉。5 5 5 5支试管支试管支试管支试管放入放入放入放入37373737温箱培养。温箱培养。温箱培养。温箱培养。（5 5 5
11、 5）观察观察观察观察：培养：培养：培养：培养24h24h24h24h后后后后观察现象，并记录。观察现象，并记录。观察现象，并记录。观察现象，并记录。第8页/共17页2.2.2.2.抗生素抗生素抗生素抗生素对微生物生长的影响对微生物生长的影响对微生物生长的影响对微生物生长的影响（1 1 1 1）菌种菌种菌种菌种：大肠杆菌（大肠杆菌（大肠杆菌（大肠杆菌（G G G G）、）、）、）、白色白色白色白色葡萄球菌或金葡萄球菌或金葡萄球菌或金葡萄球菌或金黄色葡萄球菌（黄色葡萄球菌（黄色葡萄球菌（黄色葡萄球菌（G G G G）。）。）。）。（2 2 2 2）接菌接菌接菌接菌 用用用用接种环接种环接种环接种
12、环刮取一环菌体，轻放在平板上；将刮取一环菌体，轻放在平板上；将刮取一环菌体，轻放在平板上；将刮取一环菌体，轻放在平板上；将无菌无菌无菌无菌的棉签的棉签的棉签的棉签在在在在无菌水无菌水无菌水无菌水(液体培养基液体培养基液体培养基液体培养基)中润湿；用湿润中润湿；用湿润中润湿；用湿润中润湿；用湿润的无菌棉签将平板上的菌体的无菌棉签将平板上的菌体的无菌棉签将平板上的菌体的无菌棉签将平板上的菌体均匀涂布均匀涂布均匀涂布均匀涂布。（2 2种不同的菌种不同的菌各做各做1 1个个平板。）平板。）四、实验步骤四、实验步骤第9页/共17页（3 3 3 3）放置药敏片放置药敏片放置药敏片放置药敏片：用：用：用：用
13、无菌镊子无菌镊子无菌镊子无菌镊子取取取取4 4 4 4种种种种不不不不同的抗生素同的抗生素同的抗生素同的抗生素药敏片药敏片药敏片药敏片各各各各1 1 1 1个个个个，贴在平板，贴在平板，贴在平板，贴在平板上（每个平板放上（每个平板放上（每个平板放上（每个平板放4 4 4 4个），轻轻压一下，个），轻轻压一下，个），轻轻压一下，个），轻轻压一下，倒置。倒置。倒置。倒置。注意：注意：注意：注意：在贴滤纸条时在贴滤纸条时在贴滤纸条时在贴滤纸条时不要不要不要不要在培养基在培养基在培养基在培养基上上上上拖动拖动拖动拖动滤纸片，避免抗生素溶液在滤纸片，避免抗生素溶液在滤纸片，避免抗生素溶液在滤纸片，避免抗
14、生素溶液在培养基中扩散时分布不均匀。培养基中扩散时分布不均匀。培养基中扩散时分布不均匀。培养基中扩散时分布不均匀。（4 4）培养培养：平板于：平板于37373737培养培养培养培养24h24h24h24h后观察、后观察、后观察、后观察、记录实验现象。记录实验现象。记录实验现象。记录实验现象。四、实验步骤四、实验步骤第10页/共17页第11页/共17页3.3.3.3.化学消毒剂化学消毒剂化学消毒剂化学消毒剂对微生物分布的影响对微生物分布的影响对微生物分布的影响对微生物分布的影响（1 1 1 1）分区分区分区分区:将将将将1 1 1 1个个个个营养琼脂平板分为营养琼脂平板分为营养琼脂平板分为营养琼
15、脂平板分为4 4 4 4个个个个区域；区域；区域；区域；（2 2 2 2人人人人1 1 1 1个平板，每人个平板，每人个平板，每人个平板，每人2 2 2 2个区）个区）个区）个区）（2 2 2 2）接种接种接种接种：2 2 2 2名同学名同学名同学名同学直接用手指直接用手指直接用手指直接用手指在平板在平板在平板在平板的的的的2 2 2 2个区域划之字形，待用个区域划之字形，待用个区域划之字形，待用个区域划之字形，待用碘酒碘酒碘酒碘酒/酒精酒精酒精酒精棉球棉球棉球棉球消毒后消毒后消毒后消毒后，稍候片刻，再在另外，稍候片刻，再在另外，稍候片刻，再在另外，稍候片刻，再在另外2 2 2 2个区域个区域
16、个区域个区域划之字形划之字形划之字形划之字形；（3 3）培养培养：平板于：平板于37373737培养培养培养培养24h24h24h24h后观察、后观察、后观察、后观察、记录实验现象。记录实验现象。记录实验现象。记录实验现象。四、实验步骤四、实验步骤甲乙第12页/共17页4.4.4.4.紫外线紫外线紫外线紫外线的消毒作用（的消毒作用（的消毒作用（的消毒作用（穿透穿透穿透穿透作用）作用）作用）作用）（1 1 1 1）菌种：菌种：菌种：菌种：大肠杆菌、白色葡萄球菌大肠杆菌、白色葡萄球菌大肠杆菌、白色葡萄球菌大肠杆菌、白色葡萄球菌（2 2 2 2）接菌：接菌：接菌：接菌：用用用用接种环接种环接种环接种
17、环刮取一环菌体，轻放在平板上；将刮取一环菌体，轻放在平板上；将刮取一环菌体，轻放在平板上；将刮取一环菌体，轻放在平板上；将无无无无菌的棉签菌的棉签菌的棉签菌的棉签在在在在无菌水无菌水无菌水无菌水(液体培养基液体培养基液体培养基液体培养基)中润湿；用湿润的无菌中润湿；用湿润的无菌中润湿；用湿润的无菌中润湿；用湿润的无菌棉签将平板上的菌体棉签将平板上的菌体棉签将平板上的菌体棉签将平板上的菌体均匀涂布均匀涂布均匀涂布均匀涂布。【可做可做可做可做1 1 1 1种菌，也可做种菌，也可做种菌，也可做种菌，也可做2 2 2 2种（中间划线）种（中间划线）种（中间划线）种（中间划线）】。四、实验步骤四、实验步
18、骤四、实验步骤四、实验步骤第13页/共17页4.4.紫外线紫外线的消毒作用（的消毒作用（穿透穿透作用）作用）（4 4）照射照射：用平皿盖：用平皿盖半遮盖平板半遮盖平板，置于，置于紫外灯紫外灯照射照射15min15min。（5 5）培养培养：盖上平皿盖，：盖上平皿盖，于3737培养培养24h24h后观察后观察实验现象。实验现象。四、实验步骤四、实验步骤第14页/共17页第15页/共17页思考题思考题思考题思考题n n如果药敏实验的抑菌带隔一段时间如果药敏实验的抑菌带隔一段时间如果药敏实验的抑菌带隔一段时间如果药敏实验的抑菌带隔一段时间后又长出少许菌落，你如何解释后又长出少许菌落，你如何解释后又长出少许菌落，你如何解释后又长出少许菌落，你如何解释这种现象？这种现象？这种现象？这种现象？要 求上交实验报告，写清楚实验现象，并解释实验结果。第16页/共17页