实验三凝胶过滤法分离高铁血红蛋白.ppt

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1、凝胶过滤法分离高铁血红蛋白凝胶过滤法分离高铁血红蛋白实验三实验三v凝胶过滤凝胶过滤,又称,又称分子筛层析分子筛层析原理原理v凝胶凝胶柱中所装填料为多孔状颗粒,如葡聚柱中所装填料为多孔状颗粒,如葡聚 糖凝胶糖凝胶(Sephadex),可用来分离可用来分离蛋白质蛋白质K3Fe(CN)6 MetHb过量过量K3Fe(CN)6 Hb凝胶过滤法分离蛋白质凝胶过滤法分离蛋白质凝胶过滤法分离蛋白质凝胶过滤法分离蛋白质a:大球是葡聚糖凝胶颗粒大球是葡聚糖凝胶颗粒b:样品上柱后小分子进入凝胶微孔,样品上柱后小分子进入凝胶微孔,大分子不能进入故先洗脱出来大分子不能进入故先洗脱出来c:小分子则后洗脱出来小分子则后洗

2、脱出来小分子物质小分子物质大分子蛋白质大分子蛋白质葡聚糖葡聚糖凝胶凝胶分离原理分离原理注意事项注意事项2.上样时一定要靠近凝胶柱表面、沿柱上样时一定要靠近凝胶柱表面、沿柱 内壁缓缓滴加,不能冲击凝胶柱表面内壁缓缓滴加,不能冲击凝胶柱表面1.装柱后要检查柱床是否均匀,若有气装柱后要检查柱床是否均匀,若有气 泡或分层的界面时,需要重新装柱泡或分层的界面时,需要重新装柱气泡气泡气泡气泡分层分层分层分层太短太短太短太短防止防止防止防止干胶干胶干胶干胶太少太少太少太少12cm12cm7cm7cm3.洗脱时流速不可太快洗脱时流速不可太快4.尽量保持各管收集的液量一致尽量保持各管收集的液量一致5.洗脱过程中要防止洗脱过程中要防止凝胶柱凝胶柱液体流干液体流干6.洗脱完成后的凝胶要回收,勿丢弃洗脱完成后的凝胶要回收,勿丢弃 注意事项注意事项v若洗脱图谱只出现一个峰,试分析可能若洗脱图谱只出现一个峰,试分析可能 的原因。的原因。思考题思考题

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