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1、常用类型常用类型Ecoli DNA连接酶连接酶T4 DNA连接酶连接酶来源来源_T4噬菌体噬菌体功能功能只只“缝合缝合”_“缝合缝合”_结果结果恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的_作用结果作用结果作用底物作用底物作用部位作用部位名称名称将单个脱氧核苷酸依将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端次连接到单链末端脱氧核苷酸脱氧核苷酸磷酸二酯键磷酸二酯键DNA聚聚合合酶酶或或 热热 稳稳 定定DNA聚合酶聚合酶将两个将两个DNA片段连片段连接为一个接为一个DNA分子分子DNA片段片段磷酸二酯键磷酸二酯键DNA连接酶连接酶将将DNA切成两个片切成两个片段段DNA磷酸二酯键磷
2、酸二酯键限制酶限制酶将单个核糖核苷酸将单个核糖核苷酸依次连接到单链末依次连接到单链末端端核糖核苷酸核糖核苷酸磷酸二酯键磷酸二酯键RNA聚合酶聚合酶将双链将双链DNA分子局分子局部解旋为单链，形部解旋为单链，形成两条长链成两条长链DNA碱基对之间碱基对之间的氢键的氢键解旋酶解旋酶将将DNA片段水解为片段水解为单个脱氧核苷酸单个脱氧核苷酸DNA磷酸二酯键磷酸二酯键DNA(水解水解)酶酶作用结果作用结果作用底物作用底物作用部位作用部位名称名称解析解析返回返回限制酶限制酶BamHBclSau3AHind识别序识别序列及切列及切割位点割位点过程过程说明说明图解图解变性变性当当温温度度上上升升到到 以以上
3、上时时，双双链链DNA解解聚为单链聚为单链复性复性温度下降到温度下降到_左右，两种引物通过左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链碱基互补配对与两条单链DNA结合结合72 左左右右时时，_有有最最大大活活性，可使性，可使DNA新链由新链由5端向端向3端延伸端延伸 人工合成人工合成从基因文库中获取从基因文库中获取过过程程反转反转录法录法化学合化学合成法成法从部分基因文库，如从部分基因文库，如cDNA文库中获取文库中获取从基因组文从基因组文库中获取库中获取方方法法基因工程基因工程蛋白质工程蛋白质工程项目项目区别区别与联系与联系定定向向改改造造生生物物的的遗遗传传特特性性，以以获获得得人人类类所所需
4、需的的类型或生物产品类型或生物产品定定向向改改造造或或生生产产人人类类所所需需的蛋白质的蛋白质实质实质获获取取目目的的基基因因构构建建基基因因表表达达载载体体将将目目的的基基因因导导入入受受体体细细胞胞目目的的基因的检测与鉴定基因的检测与鉴定预预期期蛋蛋白白质质功功能能设设计计预预期期的的蛋蛋白白质质结结构构推推测测应应有有的的氨氨基基酸酸序序列列找找到到相相对应的脱氧核苷酸序列对应的脱氧核苷酸序列过程过程区区别别基因工程基因工程蛋白质工程蛋白质工程项目项目区别与区别与联系联系区区别别蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程的第二代基因工程基因工程中所利用的某些酶需要通过蛋白基因工程中所利用的某些酶需要通过蛋白质工程进行修饰、改造质工程进行修饰、改造联系联系只只能能生生产产自自然然界界已已有有的的蛋蛋白质白质可可生生产产自自然然界界没没有的蛋白质有的蛋白质结果结果解析解析解析解析解析解析