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1、临床微生物学检查临床微生物学检查1引 言 微生物的分类微生物的分类？v原核细胞型：细菌、放线菌、螺旋体、支原体、衣原原核细胞型：细菌、放线菌、螺旋体、支原体、衣原体、立克次氏体。体、立克次氏体。v真核细胞型：真菌真核细胞型：真菌、原虫。、原虫。v非细胞型：病毒和亚病毒。非细胞型：病毒和亚病毒。“一虫二毒三菌四体”2临床微生物学检查v利用微生物学相关检验技术，利用微生物学相关检验技术，快速、准确快速、准确检验检验和鉴定临床标本中的病原微生物，并对引起感和鉴定临床标本中的病原微生物，并对引起感染的微生物进行染的微生物进行药物敏感性试验药物敏感性试验，指导临床合指导临床合理使用抗菌药物理使用抗菌药物
2、，为临床对，为临床对感染性疾病感染性疾病诊断、诊断、治疗、流行病学调查研究以及医院感染控制等治疗、流行病学调查研究以及医院感染控制等提供科学依据。提供科学依据。3崇德 精医 博爱 奉献主要内容标本采集、运送和保存标本采集、运送和保存1临床常用微生物学检查法临床常用微生物学检查法2 抗生素敏感试验和耐药性监测抗生素敏感试验和耐药性监测34一般原则v在感染的在感染的早期或急性期、使用抗生素前早期或急性期、使用抗生素前或伤口局部或伤口局部治疗前采集。治疗前采集。v所有标本的采集、运送和保存应在无菌操作、所有标本的采集、运送和保存应在无菌操作、防止防止污染污染的原则下进行。的原则下进行。v采用无菌容器
3、，容器应密封、防止渗漏，不可混入采用无菌容器，容器应密封、防止渗漏，不可混入消毒液或添加防腐剂。消毒液或添加防腐剂。v及时送检：及时送检：常规细菌学检验室温中不超过常规细菌学检验室温中不超过1h，如不，如不能及时送检，能及时送检，4保存不能超过保存不能超过8h；特殊细菌检验；特殊细菌检验如血培养、脑脊液、生殖道标本不可以冷藏。如血培养、脑脊液、生殖道标本不可以冷藏。5血培养1.采血指征采血指征：发热：发热(38)或低温或低温(36)，寒战，白，寒战，白细胞增多，细胞增多，c反应蛋白升高，严重的局部感染如脑膜炎、反应蛋白升高，严重的局部感染如脑膜炎、心内膜炎、肺炎、肾盂肾炎、腹部术后感染等，导管
4、心内膜炎、肺炎、肾盂肾炎、腹部术后感染等，导管介入或血液透析患者；介入或血液透析患者；2.采血时间采血时间：使用抗菌药之前，对间歇性寒战或发热应：使用抗菌药之前，对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前在寒战或体温高峰到来之前0.51h采集血液，或于采集血液，或于寒战或发烧后寒战或发烧后1h内进行；内进行；3.采血部位采血部位：推荐肘静脉，疑似细菌性心内膜炎时以肘：推荐肘静脉，疑似细菌性心内膜炎时以肘动脉或股动脉为好，避免从导管采集；多次采血时，动脉或股动脉为好，避免从导管采集；多次采血时，应在不同部位进行。应在不同部位进行。6血培养4 采血量采血量：成人需氧和厌氧各：成人需氧和厌氧各1瓶
5、为瓶为1套，套，58ml/瓶，瓶，短时间内采集短时间内采集23套；儿童仅需氧瓶，采血量套；儿童仅需氧瓶，采血量15ml;5 采血方法采血方法：皮肤消毒：皮肤消毒：75%酒精擦拭静脉穿刺部位酒精擦拭静脉穿刺部位待待30s以上；以上；1%2%碘酊作用碘酊作用30s或或10%碘伏碘伏60s，从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达，从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达3cm以上；以上；75%酒精脱碘，酒精脱碘，待干待干。培养瓶消毒：。培养瓶消毒：70%酒精擦拭血培养瓶橡皮塞，作用酒精擦拭血培养瓶橡皮塞，作用60s，待干待干。用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头直接注入血培养用注射器无菌穿刺取血后，勿换针
6、头直接注入血培养瓶，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。瓶，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。781 采集指征采集指征：尿液标本尿液标本有典型的尿路感染症状；有典型的尿路感染症状；肉眼脓尿或血尿；肉眼脓尿或血尿；尿常规检查表现为白细胞或亚硝酸盐阳性；尿常规检查表现为白细胞或亚硝酸盐阳性；不明原因发热，无其他局部症状；不明原因发热，无其他局部症状；留置导尿管的患者出现发热；留置导尿管的患者出现发热；膀胱排空功能受损；膀胱排空功能受损；泌尿系统疾病手术前。泌尿系统疾病手术前。9尿液标本尿液标本2 采集时机采集时机：用药前、：用药前、输液或饮水前输液或饮水前，并使尿液在膀，并使尿液在膀胱内停留胱内停留一夜或至少一夜或
7、至少4h以上；以上；3 采集方法采集方法：v清洁中段尿：用肥皂水清洗尿道口或外阴部，排尿清洁中段尿：用肥皂水清洗尿道口或外阴部，排尿时弃去前段尿，收集中段尿时弃去前段尿，收集中段尿10-20ml送检；送检；v留置导尿管：建议更换导尿管后采集留置导尿管：建议更换导尿管后采集10无菌体液无菌体液脑脊液标本脑脊液标本v立即保温送检或床边接种（引起脑膜炎的病原体脑膜立即保温送检或床边接种（引起脑膜炎的病原体脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌等抵抗力弱）炎奈瑟菌、肺炎链球菌等抵抗力弱）v建议：同时送血培养建议：同时送血培养 胸水、腹水和心包液胸水、腹水和心包液v含菌量少宜采集较大量标本或注入血培养瓶送检。含菌量少
8、宜采集较大量标本或注入血培养瓶送检。v注意：厌氧菌感染常见注意：厌氧菌感染常见11化脓及创伤感染标本化脓及创伤感染标本v先用无菌生理盐水清洗伤口及病灶表面的杂菌；先用无菌生理盐水清洗伤口及病灶表面的杂菌；v采取伤口及病灶采取伤口及病灶基底部或边缘部（接近肉芽组织）基底部或边缘部（接近肉芽组织）的的分泌物；分泌物；v脓肿标本以无菌注射器抽取为好，脓肿标本以无菌注射器抽取为好，注意排尽注射器内注意排尽注射器内空气空气。v注意：注意：请务必注明采集部位请务必注明采集部位12呼吸道标本呼吸道标本1 1 咳痰咳痰v生理盐水漱口，咳出深部痰生理盐水漱口，咳出深部痰v合格的痰标本合格的痰标本:扁平上皮细胞扁
9、平上皮细胞1010个个/低倍视野且低倍视野且WBC25WBC25个个/低倍视野。低倍视野。2 2 气管吸出物气管吸出物v气管插管患者出现肺炎症状时气管插管患者出现肺炎症状时3 3 支气管肺泡盥洗液支气管肺泡盥洗液(BALF)(BALF)当下呼吸道感染患者伴有高热症状时当下呼吸道感染患者伴有高热症状时建议同时做血培养！建议同时做血培养！13崇德 精医 博爱 奉献主要内容标本采集、运送和保存标本采集、运送和保存1临床常用微生物学检查法临床常用微生物学检查法2 抗生素敏感试验和耐药性监测抗生素敏感试验和耐药性监测314一、直接显微镜检查v形态学检查是微生物检验的重要方法之一，形态学检查是微生物检验的
10、重要方法之一，根据其形态、结构和染色反应性等，做出快根据其形态、结构和染色反应性等，做出快速初步诊断，为临床治疗提供依据。速初步诊断，为临床治疗提供依据。15肺炎链球菌16念珠菌v七夕知何夕七夕知何夕v云是牛女期云是牛女期v人间轻别离人间轻别离v微界念真心（菌）微界念真心（菌）v丝作鹊桥引丝作鹊桥引v子为河汉星子为河汉星v相偎复相依相偎复相依v无情胜有情无情胜有情v图片来自北京医院陈东科老师图片来自北京医院陈东科老师17新型隐球菌新型隐球菌18二、分离培养与鉴定v大多数细菌均可以通过人工方法培养，而衣原体大多数细菌均可以通过人工方法培养，而衣原体和病毒的分离培养往往需要活组织、鸡胚、特殊和病毒
11、的分离培养往往需要活组织、鸡胚、特殊细胞株及动物接种。细胞株及动物接种。19肺炎链球菌图片来自北京医院陈东科老师20白假丝酵母菌21新型隐球菌22三、抗原检测v沙眼衣原体抗原检测沙眼衣原体抗原检测23四、抗体检测四、抗体检测v获得性免疫缺陷综合征获得性免疫缺陷综合征（Acquired immune deficiency syndromeAcquired immune deficiency syndrome，），）v2015年世界艾滋病日主题：年世界艾滋病日主题：“行动起来，向行动起来，向零零艾滋迈进艾滋迈进合力抗艾，共担责任，共享合力抗艾，共担责任，共享未来未来”。241 初 筛检测方法：检测
12、方法：检测方法：检测方法：酶联免疫试验（酶联免疫试验（ELISAELISA）免疫胶体金快速试验免疫胶体金快速试验报告方式报告方式报告方式报告方式：筛查试验（筛查试验（筛查试验（筛查试验（-）“HIVHIVHIVHIV抗体阴性抗体阴性抗体阴性抗体阴性”筛查试验（筛查试验（筛查试验（筛查试验（+）“HIVHIVHIVHIV抗体待复查抗体待复查抗体待复查抗体待复查”25免疫胶体金快速试验免疫胶体金快速试验262 复 检 初筛（）初筛（）标本要求：原标本标本要求：原标本重新采集标本重新采集标本1份份 （两份标本同时送检）（两份标本同时送检）检测方法：另换筛查试剂盒检测方法：另换筛查试剂盒273 确 认
13、v检测方法：检测方法：免疫印迹实验（免疫印迹实验（WBWB）v报告方式：报告方式：HIVHIV抗体确认实验（）：抗体确认实验（）：“HIVHIV抗体阳性抗体阳性”28五、核酸检测v1、乙型肝炎病毒核酸检测、乙型肝炎病毒核酸检测v2、丙型肝炎病毒核酸检测、丙型肝炎病毒核酸检测v3、人乳头瘤病毒核酸检测、人乳头瘤病毒核酸检测v3、衣原体核酸检测、衣原体核酸检测v4、淋球菌核酸检测、淋球菌核酸检测v5、单纯疱疹病毒核酸检测、单纯疱疹病毒核酸检测v6、结核分枝杆菌核酸检测、结核分枝杆菌核酸检测29崇德 精医 博爱 奉献主要内容标本采集、运送和保存标本采集、运送和保存1临床常用微生物学检查法临床常用微生物学检查法2 抗生素敏感试验和耐药性监测抗生素敏感试验和耐药性监测330抗生素敏感试验-K-B法31抗生素敏感试验-MIC法3233