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1、HIV实验室检测培训实验室检测培训1艾滋病基础知识艾滋病基础知识-定义定义 艾滋病（艾滋病（AIDS）：）：由人类免疫缺陷病毒由人类免疫缺陷病毒（HIV）所引所引 起的一种以辅助性起的一种以辅助性T淋巴细胞淋巴细胞（CD4+T淋巴细胞）数量减少导致免疫功能淋巴细胞）数量减少导致免疫功能减退为主要特征的严重传染性疾病。减退为主要特征的严重传染性疾病。-来源来源 20世纪世纪40-50年代的非洲，年代的非洲，HIV病毒可能由猴病毒可能由猴子体内的猿免疫缺陷病毒演变而来子体内的猿免疫缺陷病毒演变而来2-流行流行 最早在美国发现最早在美国发现 欧洲欧洲 非洲非洲 20世纪世纪80年代中后期传播到亚洲年
2、代中后期传播到亚洲-感染的自然发展过程感染的自然发展过程窗口期窗口期 受到受到HIV感染到可以检测出艾滋病抗感染到可以检测出艾滋病抗 体的这一段时间体的这一段时间 特点：轻微的一过性感冒症状特点：轻微的一过性感冒症状 在窗口期内检测不出抗体在窗口期内检测不出抗体 感染（感染（HIV-1）2-3周可检出周可检出P24抗原抗原 感染者的血液、精液、阴道分泌物等感染者的血液、精液、阴道分泌物等 体液中，含有大量体液中，含有大量HIV 3无症状潜伏期无症状潜伏期 8-10年年 特点：特点：HIV抗体抗体+临床症状出现临床症状出现 平均平均10年的潜伏期后出现年的潜伏期后出现艾滋病病人艾滋病病人 临床症
3、状出现后临床症状出现后1年发展为病年发展为病人人死亡死亡 无抗病毒治疗情况下，半年到无抗病毒治疗情况下，半年到2年的年的时间，病人死于艾滋病时间，病人死于艾滋病 HIV抗体（抗体（-）HIV抗体（抗体（+），无症状），无症状 HIV抗体抗体+有症状有症状 艾滋病艾滋病 4-8周周 810年年 1年年 0.52年左右年左右 个体感染艾滋病病毒后的自然发展过程个体感染艾滋病病毒后的自然发展过程 4HIV检测是艾滋病防治的一项检测是艾滋病防治的一项重要保证措施重要保证措施w明确明确HIV感染者（诊断）感染者（诊断）及早医学干预及早医学干预合宜的治疗指标和效果评估合宜的治疗指标和效果评估疫苗效果考评疫
4、苗效果考评w发现发现HIV阴性者阴性者做好减少危险（不安全性行为和药瘾者）的咨询做好减少危险（不安全性行为和药瘾者）的咨询w开展开展VCT的基础的基础w流行病学监测和专题研究流行病学监测和专题研究w公共卫生规划（政策形成、保险、控制等）公共卫生规划（政策形成、保险、控制等）w职业保护职业保护5达到保证措施的必要条件达到保证措施的必要条件w贯彻有关贯彻有关HIV检测的法规（实验室网络、人员、检测的法规（实验室网络、人员、仪器设备、房屋等条件）仪器设备、房屋等条件）w有效的检测方法和检测试剂有效的检测方法和检测试剂w常规质量控制和质量保证常规质量控制和质量保证6艾滋病检测工作管理文献艾滋病检测工作
5、管理文献1990.全国全国HIV检测管理规范（试行）检测管理规范（试行）1997.9.全国艾滋病检测工作规范全国艾滋病检测工作规范2004.8.全国艾滋病检测技术规范（试行）全国艾滋病检测技术规范（试行）-“规范规范”2003.全国艾滋病检测工作管理办法全国艾滋病检测工作管理办法 -“办法办法”2004.12全国艾滋病检测技术规范（正式）全国艾滋病检测技术规范（正式）2009 全国艾滋病检测技术规范（修订版）全国艾滋病检测技术规范（修订版）7HIV感染的实验诊断感染的实验诊断w检测方法检测方法HIV培养，核酸测定，培养，核酸测定，P24抗原检测，抗原检测，血清抗体测定血清抗体测定w金标准金标准
6、血清抗体测定，血清抗体测定，HIV感染后平均感染后平均25天检出，待天检出，待12周时周时几乎全检出几乎全检出wHIV抗体检测抗体检测两个阶段（筛查和确认）两个阶段（筛查和确认）三个程序（初筛复检确认）三个程序（初筛复检确认）23标本（血清，全血，唾液，尿液，滤纸干血）标本（血清，全血，唾液，尿液，滤纸干血）8HIV筛查试剂要求和种类筛查试剂要求和种类-要求要求SFDA SFDA 注册批准注册批准注册批准注册批准中检所中检所中检所中检所 批批检合格批批检合格批批检合格批批检合格CDC CDC 临床评估质量优良临床评估质量优良临床评估质量优良临床评估质量优良使用使用使用使用 有效期内有效期内有效
7、期内有效期内 采供血机构采供血机构采供血机构采供血机构 必须使用必须使用必须使用必须使用HIV-1/2HIV-1/2 -种类种类 酶联免疫试剂（酶联免疫试剂（酶联免疫试剂（酶联免疫试剂（EIAEIA）颗粒凝集试剂（颗粒凝集试剂（颗粒凝集试剂（颗粒凝集试剂（PAPA）其它快速试剂（其它快速试剂（其它快速试剂（其它快速试剂（RTRT）9检测注意事项检测注意事项-HIVHIV抗体检测工作应该按照全国艾滋病抗体检测工作应该按照全国艾滋病抗体检测工作应该按照全国艾滋病抗体检测工作应该按照全国艾滋病检测技术规范，在合格的艾滋病检测实验室检测技术规范，在合格的艾滋病检测实验室检测技术规范，在合格的艾滋病检测
8、实验室检测技术规范，在合格的艾滋病检测实验室进行进行进行进行-为了减少检测的错误和误差，应采取严格的为了减少检测的错误和误差，应采取严格的为了减少检测的错误和误差，应采取严格的为了减少检测的错误和误差，应采取严格的质量保证、质量控制和质量评价措施质量保证、质量控制和质量评价措施质量保证、质量控制和质量评价措施质量保证、质量控制和质量评价措施-注意实验室生物安全防护和职业暴露预防注意实验室生物安全防护和职业暴露预防注意实验室生物安全防护和职业暴露预防注意实验室生物安全防护和职业暴露预防-严格遵守实验室标准操作程序（严格遵守实验室标准操作程序（严格遵守实验室标准操作程序（严格遵守实验室标准操作程序
9、（SOPSOP），），），），按按按按照试剂盒说明书操作，注意防止样品间交叉污照试剂盒说明书操作，注意防止样品间交叉污照试剂盒说明书操作，注意防止样品间交叉污照试剂盒说明书操作，注意防止样品间交叉污染染染染10检测程序检测程序-筛查试验筛查试验-重复检测重复检测-确认试验确认试验11HIV抗体筛查抗体筛查-职责职责l经省卫生行政部门指定验收专家组，验收合格的经省卫生行政部门指定验收专家组，验收合格的HIV筛查筛查实验室实验室-方法、试剂方法、试剂l酶联免疫实验：第三代双抗原夹心法试剂（酶联免疫实验：第三代双抗原夹心法试剂（ELISA）l快速检测快速检测 明胶颗粒凝聚实验明胶颗粒凝聚实验 斑点斑
10、点ELISA 斑点免疫胶体金斑点免疫胶体金 艾滋病唾液检测卡艾滋病唾液检测卡12采集标本采集标本w血液标本血液标本w一般采集肘正中静脉血液一般采集肘正中静脉血液3-5mlw婴幼儿可选择颈外静脉婴幼儿可选择颈外静脉13采集标本采集标本w以肘静脉取血为例。选择适宜静脉，在上臂以肘静脉取血为例。选择适宜静脉，在上臂扎上压脉带。先用扎上压脉带。先用25g/L碘酊棉签于欲穿刺处碘酊棉签于欲穿刺处皮肤从内向外做环形消毒，待干后再用皮肤从内向外做环形消毒，待干后再用0.75L/L乙醇棉签以同样方式擦去碘迹。乙醇棉签以同样方式擦去碘迹。14采集标本采集标本w取无菌注射器，按牢针头，使针头斜面与针取无菌注射器，
11、按牢针头，使针头斜面与针筒刻度平行，并查看有无阻塞和漏气。采用筒刻度平行，并查看有无阻塞和漏气。采用一次性注射器还应注意包装是否密封，有无一次性注射器还应注意包装是否密封，有无过期，否则不得使用。过期，否则不得使用。15采集标本采集标本w嘱病人紧握拳头，使静脉显露。左手拇指固嘱病人紧握拳头，使静脉显露。左手拇指固定穿刺部位下端，右手持注射器，使针筒刻定穿刺部位下端，右手持注射器，使针筒刻度向上，先以约度向上，先以约30角度沿静脉正面进针，角度沿静脉正面进针，快速穿过皮肤刺入静脉中央。见回血后，右快速穿过皮肤刺入静脉中央。见回血后，右手固定注射器，用左手缓缓抽出注射器针栓，手固定注射器，用左手缓
12、缓抽出注射器针栓，至所需血量后，解除压脉带，放松拳头，以至所需血量后，解除压脉带，放松拳头，以消毒棉签压住穿刺孔，拔出针头。消毒棉签压住穿刺孔，拔出针头。16采集标本采集标本w取下针头，将血液沿管（瓶）壁缓慢注入容取下针头，将血液沿管（瓶）壁缓慢注入容器内，待血液自行凝固。血块收缩后，即可器内，待血液自行凝固。血块收缩后，即可分离出血清。如需全血或血浆，则将血液注分离出血清。如需全血或血浆，则将血液注入事先准备的抗凝管（瓶）中，轻轻混匀，入事先准备的抗凝管（瓶）中，轻轻混匀，防止凝固，即为抗凝血。经适当离心可分离防止凝固，即为抗凝血。经适当离心可分离出血浆。血清和血浆的主要差别是，血清中出血浆
13、。血清和血浆的主要差别是，血清中无纤维蛋白原。无纤维蛋白原。w采样完毕后应同时填写采样完毕后应同时填写采样登记表采样登记表17标本处理标本处理w将采集好的血液标本放入离心机将采集好的血液标本放入离心机3000转转/分离分离心心5分钟分钟w取出标本，用移液器（或一次性滴管）将血取出标本，用移液器（或一次性滴管）将血清移入血清储存管中（清移入血清储存管中（1.5ml）w检测完毕后将血清储存管盖紧，放入冰箱冷检测完毕后将血清储存管盖紧，放入冰箱冷冻室保存至少冻室保存至少2个月个月18胶体金快速检测技术胶体金快速检测技术19 一、原理一、原理w 本品采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维膜上预本品采用胶体
14、金免疫层析技术，在玻璃纤维膜上预包被金标记包被金标记HIVgp 160HIVgp 160和和gp3 6gp3 6抗原，在硝酸纤维膜检抗原，在硝酸纤维膜检测线和质控线上分别包被测线和质控线上分别包被HIVgp41HIVgp41、gp3 6gp3 6混合抗原和混合抗原和抗抗HIVgp41HIVgp41抗体，当检测进行时，样品中抗体，当检测进行时，样品中HIVHIV抗体可与抗体可与金标记的金标记的HIVHIV抗原结合形成复合物，由于层析作用抗原结合形成复合物，由于层析作用,使使复合物沿试纸条向前移动。若样品中含有可被检测的复合物沿试纸条向前移动。若样品中含有可被检测的HIVHIV抗体，则与检测线预包
15、被的抗体，则与检测线预包被的HIVHIV抗原结合形成抗原结合形成“金金标记标记HIVHIV抗原抗原-HIV-HIV抗体一抗体一HIVHIV包被抗原包被抗原 复合物凝聚显复合物凝聚显色；若样品中没有色；若样品中没有HIVHIV抗体或抗体或HIVHIV抗体的含量低于检测抗体的含量低于检测限时，则不形成复合物而不显色。限时，则不形成复合物而不显色。20二、试剂盒组成二、试剂盒组成 1.HIV(12)抗体胶体金试纸条板抗体胶体金试纸条板50人份人份盒，盒，(5条条)lO袋。袋。2.说明书说明书1份。份。3.稀释液稀释液l份，份，4ml瓶。瓶。21 三、操作步骤三、操作步骤根据试剂盒说明书进行操作！根据
16、试剂盒说明书进行操作！一般操作步骤：一般操作步骤：w 1将密封袋打开，取出所需试纸条将密封袋打开，取出所需试纸条板。板。w 2样本检测：取样本检测：取4 O ul待检样本加在试待检样本加在试纸条板的加样区，再在近加样区上方加纸条板的加样区，再在近加样区上方加1滴稀释液。滴稀释液。w 3 3 0分钟内观察并记录试验结果。分钟内观察并记录试验结果。22四、结果判断四、结果判断w 阳性结果：在试纸条板的检测窗阳性结果：在试纸条板的检测窗和质控窗位置上各出现一条紫红色条和质控窗位置上各出现一条紫红色条带。带。w 阴性结果：仅在试纸条板的质控阴性结果：仅在试纸条板的质控窗位置上出现一条紫红色条带。窗位置
17、上出现一条紫红色条带。w 无效结果：在试纸条板的检测窗无效结果：在试纸条板的检测窗和质控窗位置上均未出现紫红色条带和质控窗位置上均未出现紫红色条带为试验无效。为试验无效。23 五、实验结果判断示意图五、实验结果判断示意图24六、注意事项六、注意事项 1被检样品、试剂应在室温被检样品、试剂应在室温2 O左右平衡左右平衡30分钟分钟后检测。被检品应为新鲜样品。如发现试纸条板后检测。被检品应为新鲜样品。如发现试纸条板密封袋破损则需废弃。密封袋破损则需废弃。2高血脂和高胆红素样品对检测结果无显著性影响，高血脂和高胆红素样品对检测结果无显著性影响，但溶血样品，尤其是大量溶血样品对检测结果有显但溶血样品，
18、尤其是大量溶血样品对检测结果有显著影响。著影响。3当质控窗与检测窗上均不出现紫红色条带时，应当质控窗与检测窗上均不出现紫红色条带时，应重新测试，如果问题仍然存在，应立即停止使用此重新测试，如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品并与当地供货商联系。批号产品并与当地供货商联系。25 七、胶体金快速试剂实物七、胶体金快速试剂实物26HIV检测中的保密的认识检测中的保密的认识wHIV检测前后咨询中获得的隐私检测前后咨询中获得的隐私wHIV检测结果检测结果w与专业人员的讨论与专业人员的讨论w在各种场合中对受检者的讨论在各种场合中对受检者的讨论（包括会议）（包括会议）w档案记录与保存档案记录与保存w受
19、检者，家属，朋友和单位受检者，家属，朋友和单位w传报医院传报医院w匿名检测系统能确保保密，但不利于医学管理匿名检测系统能确保保密，但不利于医学管理27初筛结果处理初筛结果处理-初筛（初筛（-）出具出具“HIV抗体阴性抗体阴性”报告报告 初筛（初筛（+）可出具可出具“HIV抗体待复检抗体待复检”的的报告，报告，但不能出具阳性报告但不能出具阳性报告。-送复检送复检 填写填写填写填写复检检测单复检检测单复检检测单复检检测单，两人签字，两人签字，两人签字，两人签字 重新采集受检者的血样重新采集受检者的血样重新采集受检者的血样重新采集受检者的血样 原样和新样连同送样单原样和新样连同送样单原样和新样连同送
20、样单原样和新样连同送样单 HIVHIV筛查实验室筛查实验室筛查实验室筛查实验室 确认实验室确认实验室确认实验室确认实验室 筛查实验室复检筛查实验室复检筛查实验室复检筛查实验室复检 做好检测前后咨询做好检测前后咨询做好检测前后咨询做好检测前后咨询28样品样品筛查检测筛查检测一阴一阳一阴一阳均阳性反应均阳性反应阴性报告阴性报告送初筛实验室送初筛实验室进行复检进行复检重复检测重复检测均阴性反应均阴性反应阳性反应阳性反应原有试剂另一原有试剂另一种筛查试剂种筛查试剂筛查试剂筛查试剂阴性反应阴性反应检测点筛查试验流程图29重复检测重复检测-职责职责 HIV筛查实验室筛查实验室 或或 HIV确认实验室确认实
21、验室 筛查实验室拟作复检，加强自我质量控制筛查实验室拟作复检，加强自我质量控制筛查实验室拟作复检，加强自我质量控制筛查实验室拟作复检，加强自我质量控制-试剂试剂 选择：两种不同原理或厂家选择：两种不同原理或厂家选择：两种不同原理或厂家选择：两种不同原理或厂家 品种：品种：品种：品种：酶联免疫试剂酶联免疫试剂酶联免疫试剂酶联免疫试剂 快速检测试剂快速检测试剂快速检测试剂快速检测试剂 30重复检测结果处理重复检测结果处理-复检（复检（-）出具）出具“HIV抗体阴性抗体阴性”报告报告 复检（复检（+）可出具可出具“HIV抗体待复查抗体待复查”的报的报告，但不能出具阳性报告。告，但不能出具阳性报告。-
22、送确认送确认 填写复查送样单，两人签字填写复查送样单，两人签字 原样或新样连同送样单送确认实验室原样或新样连同送样单送确认实验室31确认实验确认实验-职责职责 确认实验室确认实验室-检测方法检测方法 免疫印迹实验（免疫印迹实验（WB）线性免疫实验（线性免疫实验（LIA）免疫荧光实验免疫荧光实验（IFA）32确认结果解释确认结果解释1.确认阴性（确认阴性（-）进行阴性咨询）进行阴性咨询2.确认阳性（确认阳性（+）进行阳性咨询）进行阳性咨询3.不确定结果按照不确定结果按照“全国艾滋病检测技全国艾滋病检测技术规范术规范”的规定进行随访的规定进行随访33 4当样品中抗体含量极高时，质控窗条当样品中抗体含量极高时，质控窗条带有所减弱，但此结果仍视为有效结果带有所减弱，但此结果仍视为有效结果(若若需进一步确认，可用需进一步确认，可用HIV抗体阴性血适量抗体阴性血适量稀释后再作测试稀释后再作测试)。5本品检测阳性结果须进行确证试验确本品检测阳性结果须进行确证试验确证。证。6测试过程中所接触血液样品，一律视测试过程中所接触血液样品，一律视为为HIV阳性操作。阳性操作。73 0分钟后观察的结果无效。分钟后观察的结果无效。34