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1、仪仪 器器 分分 析析Instrumental AnalysisInstrumental Analysis分子发光光谱法分子发光光谱法Molecular Luminesence SpectrumetryMolecular Luminesence Spectrumetry分子荧光分子荧光分子荧光分子荧光分子荧光分子荧光:Fluorescence;Fluorescence;Fluorescence;分子磷光分子磷光分子磷光分子磷光分子磷光分子磷光:PhosphorescencePhosphorescencePhosphorescence1主要和常用的荧光磷光分光光度计及型号主要和常用的荧光磷光分光
2、光度计及型号HITACHIHITACHI（日立）（日立）F-4500 F-4500 荧光分光光度计荧光分光光度计 荧光/磷光/发光分光光度计(PerkinElmer)LS-55 2 1 分子发光的基本原理分子发光的基本原理vv第第一一次次记记录录荧荧光光现现象象的的是是1616世世纪纪西西班班牙牙的的内内科科医医生生和和植植物物学学家家N.MonardesN.Monardes，15751575年年 他他 提提 到到 在在 含含 有有 一一 种种 称称 为为“Lignum“Lignum Nephriticum”Nephriticum”的木头切片的水溶液中，呈现了极为可爱的天蓝色。的木头切片的水溶
3、液中，呈现了极为可爱的天蓝色。vv直直到到18521852年年，StokesStokes在在考考察察奎奎宁宁和和叶叶绿绿素素的的荧荧光光时时，用用分分光光光光度度计计视视察察到到其其荧荧光光的的波波长长比比入入射射光光的的波波长长略略微微长长些些，才才推推断断这这种种现现象象是是这这些些物物质质在在吸吸取取光光能能后后重重新新放放射射不不同同波波长长的的光光，而而不不是是由由光光的的漫漫射射作作用用所所引引起起的的，从从而而导导入入了了荧荧光光是是光光放放射射的的概概念念，他还由发荧光的矿石他还由发荧光的矿石“萤石萤石”推演而提出推演而提出“荧光荧光”这一术语。这一术语。vv18671867年
4、年，GoppelsroderGoppelsroder进进行行了了历历史史上上首首次次的的荧荧光光分分析析工工作作，应应用铝用铝桑色素协作物的荧光进行铝的测定。桑色素协作物的荧光进行铝的测定。vv1919世世纪纪以以前前，荧荧光光的的视视察察是是靠靠肉肉眼眼进进行行的的，直直到到19281928年年，才才由由JetteJette和和WestWest提出了第一台荧光计。提出了第一台荧光计。3一一一一.分子荧光与磷光的产生分子荧光与磷光的产生分子荧光与磷光的产生分子荧光与磷光的产生1.1.单重态与三重态单重态与三重态单重态与三重态单重态与三重态 （p79p79）2.2.分子的活化与去活化分子的活化与
5、去活化3.3.分子发光的类型分子发光的类型分子发光的类型分子发光的类型按激发的模式分类：按激发的模式分类：按激发的模式分类：按激发的模式分类：按分子激发态的类型分类：按分子激发态的类型分类：按分子激发态的类型分类：按分子激发态的类型分类：光致发光光致发光光致发光光致发光化学发光化学发光化学发光化学发光/生物发光生物发光生物发光生物发光热致发光热致发光热致发光热致发光场致发光场致发光场致发光场致发光摩擦发光摩擦发光摩擦发光摩擦发光 分子发光分子发光分子发光分子发光分子发光分子发光分子发光分子发光荧光荧光荧光荧光磷光磷光磷光磷光瞬时荧光瞬时荧光瞬时荧光瞬时荧光迟滞荧光迟滞荧光迟滞荧光迟滞荧光按光子
6、能量分类：按光子能量分类：按光子能量分类：按光子能量分类：斯托克斯荧光斯托克斯荧光斯托克斯荧光斯托克斯荧光(Stokes)(Stokes)：exex emem共振荧光共振荧光共振荧光共振荧光(Resonance)(Resonance)：exex=emem 荧光荧光荧光荧光 4分子的活化与去活化分子的活化与去活化 (p78)S S0 0S S1 1T T1 1S S2 2紫紫紫紫外外外外可可可可见见见见吸吸吸吸收收收收光光光光谱谱谱谱外转移外转移外转移外转移紫紫紫紫外外外外可可可可见见见见共共共共振振振振荧荧荧荧光光光光光光光光谱谱谱谱内转移内转移内转移内转移荧光荧光荧光荧光系间系间系间系间窜跃
7、窜跃窜跃窜跃磷磷磷磷光光光光反系间反系间反系间反系间窜跃窜跃窜跃窜跃迟迟迟迟滞滞滞滞荧荧荧荧光光光光振动弛豫振动弛豫振动弛豫振动弛豫.无辐射跃迁的类型无辐射跃迁的类型无辐射跃迁的类型无辐射跃迁的类型振动弛豫振动弛豫振动弛豫振动弛豫:Vr 10-12sec:Vr 10-12sec外外外外 转转转转 移移移移:无辐射跃迁回到无辐射跃迁回到无辐射跃迁回到无辐射跃迁回到基态基态基态基态内内内内 转转转转 移移移移:S2S1:S2S1能级之间有能级之间有能级之间有能级之间有重叠重叠重叠重叠系间跨跃系间跨跃系间跨跃系间跨跃:S2T1:S2T1能级之间能级之间能级之间能级之间有重叠有重叠有重叠有重叠反系间窜
8、跃反系间窜跃反系间窜跃反系间窜跃:由外部获得能由外部获得能由外部获得能由外部获得能量后量后量后量后 T1 S2 T1 S2.辐射跃迁的类型辐射跃迁的类型辐射跃迁的类型辐射跃迁的类型共振荧光：共振荧光：共振荧光：共振荧光：1010-12-12 secsec荧荧荧荧 光：光：光：光：1010-8-8 secsec磷磷磷磷 光：光：光：光：110110-4-4 secsec迟滞荧光迟滞荧光迟滞荧光迟滞荧光:10102 21010-4-4 secsec5二二二二.分子荧光分子荧光分子荧光分子荧光(磷光磷光磷光磷光)光谱光谱光谱光谱1.1.荧光荧光荧光荧光(磷光磷光磷光磷光)激发光谱与放射光谱激发光谱与
9、放射光谱激发光谱与放射光谱激发光谱与放射光谱荧光荧光荧光荧光(磷光磷光磷光磷光)均为光致发光，在光辐射的作用下，荧光物质放射出不均为光致发光，在光辐射的作用下，荧光物质放射出不均为光致发光，在光辐射的作用下，荧光物质放射出不均为光致发光，在光辐射的作用下，荧光物质放射出不同波长的荧光。同波长的荧光。同波长的荧光。同波长的荧光。A.A.激发光谱激发光谱激发光谱激发光谱 (p79)(p79)固定固定固定固定 emem=620nm(MAX)=620nm(MAX)exex=290nm =290nm(MAX)(MAX)固定放射波长固定放射波长固定放射波长固定放射波长扫描激发波长扫描激发波长扫描激发波长扫
10、描激发波长荧光激发光谱与荧光激发光谱与荧光激发光谱与荧光激发光谱与紫外紫外紫外紫外-可见吸取光可见吸取光可见吸取光可见吸取光谱类似谱类似谱类似谱类似B.B.放射光谱放射光谱放射光谱放射光谱(荧光光谱荧光光谱荧光光谱荧光光谱)固定激发波长固定激发波长固定激发波长固定激发波长 扫描放射波长扫描放射波长扫描放射波长扫描放射波长62.2.2.2.三维荧光光谱三维荧光光谱三维荧光光谱三维荧光光谱I I F F f f f f(exex 、emem)蒽的激发光谱蒽的激发光谱蒽的激发光谱蒽的激发光谱固定放射波长、扫描激发波长固定放射波长、扫描激发波长固定放射波长、扫描激发波长固定放射波长、扫描激发波长7I
11、I F F f f f f(exex 、emem)蒽的放射光谱蒽的放射光谱蒽的放射光谱蒽的放射光谱固定激发波长、扫描放射波长固定激发波长、扫描放射波长固定激发波长、扫描放射波长固定激发波长、扫描放射波长8蒽的三维等高线光谱图蒽的三维等高线光谱图蒽的三维等高线光谱图蒽的三维等高线光谱图 9蒽的三维等荧光强度光谱蒽的三维等荧光强度光谱蒽的三维等荧光强度光谱蒽的三维等荧光强度光谱10VBVB1 1和和和和VBVB2 2的三维荧光光谱的三维荧光光谱的三维荧光光谱的三维荧光光谱11 exex=290nm =290nm(MAX)(MAX)固定固定固定固定 emem=620nm(MAX)=620nm(MAX
12、)固定固定固定固定 exex=290nm=290nm(MAX)(MAX)emem=620nm 620nm(MAX)(MAX)2.2.激发光谱与放射光谱的激发光谱与放射光谱的激发光谱与放射光谱的激发光谱与放射光谱的镜像关系镜像关系镜像关系镜像关系S S0 04 43 32 21 1S S1 14 43 32 21 11.1.放射光谱的形态与激发波长无关放射光谱的形态与激发波长无关放射光谱的形态与激发波长无关放射光谱的形态与激发波长无关分子的激发光谱可能含有几个激发带，但放射光谱只含一个放射带；即分子的激发光谱可能含有几个激发带，但放射光谱只含一个放射带；即分子的激发光谱可能含有几个激发带，但放射
13、光谱只含一个放射带；即分子的激发光谱可能含有几个激发带，但放射光谱只含一个放射带；即使分子被激发到高于使分子被激发到高于使分子被激发到高于使分子被激发到高于S1S1的电子态，由于经过极快的内转换和振动弛豫降到的电子态，由于经过极快的内转换和振动弛豫降到的电子态，由于经过极快的内转换和振动弛豫降到的电子态，由于经过极快的内转换和振动弛豫降到S1S1电子态的最低振动、转动能级，然后以辐射形式释放能量回到基态。电子态的最低振动、转动能级，然后以辐射形式释放能量回到基态。电子态的最低振动、转动能级，然后以辐射形式释放能量回到基态。电子态的最低振动、转动能级，然后以辐射形式释放能量回到基态。1 1 4
14、41 1 3 31 1 2 21 11 11 1 1 11 1 2 21 1 3 31 1 4 4三、三、三、三、荧光荧光荧光荧光(磷光磷光磷光磷光)光谱的特征光谱的特征光谱的特征光谱的特征 (p81)(p81)123.3.斯托克斯位移斯托克斯位移斯托克斯位移斯托克斯位移13对于稀溶液，当对于稀溶液，当对于稀溶液，当对于稀溶液，当 bc bc0.0.0505（磷光磷光磷光磷光 bc bc0.10001000 p p(s)(s)2.62.62.52.51.41.40.230.230.0140.0140.0020.0023 36.6.环境因素：溶剂效应、温度环境因素：溶剂效应、温度环境因素：溶剂效
15、应、温度环境因素：溶剂效应、温度蓝移蓝移蓝移蓝移:E E n*n*E E n*n*红移红移红移红移:E E*E E*在极性溶剂中：在极性溶剂中：在极性溶剂中：在极性溶剂中：无溶剂化作用无溶剂化作用无溶剂化作用无溶剂化作用有溶剂化作用有溶剂化作用有溶剂化作用有溶剂化作用22三三.金属螯合物的荧光金属螯合物的荧光1.1.螯合物中配位体的发光螯合物中配位体的发光螯合物中配位体的发光螯合物中配位体的发光2.2.螯合物中金属离子的发光螯合物中金属离子的发光螯合物中金属离子的发光螯合物中金属离子的发光8-8-羟基喹啉羟基喹啉羟基喹啉羟基喹啉弱荧光弱荧光弱荧光弱荧光8-8-羟基喹啉羟基喹啉羟基喹啉羟基喹啉-
16、Zn-Zn螯合螯合螯合螯合物物物物黄绿色强荧光黄绿色强荧光黄绿色强荧光黄绿色强荧光2,2-2,2-二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯无荧光无荧光无荧光无荧光2,2-2,2-二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯-Al-Al螯合物螯合物螯合物螯合物强荧光强荧光强荧光强荧光T T1 1系间窜跃系间窜跃系间窜跃系间窜跃S S0 0S S1 1d d*、f f*d d*d d f f*f f 荧光荧光荧光荧光分子内能量转移分子内能量转移分子内能量转移分子内能量转移23四四.荧光的猝灭荧光的猝灭 1.1.碰撞熄灭碰撞熄灭碰撞熄灭碰撞熄灭荧荧荧荧 光光光光 猝猝猝猝 灭：荧光分子与
17、溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起灭：荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起灭：荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起灭：荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起荧光强度降低或消逝的现象。荧光强度降低或消逝的现象。荧光强度降低或消逝的现象。荧光强度降低或消逝的现象。荧光猝灭剂：这些溶剂分子或其它溶质分子称为荧光猝灭剂。荧光猝灭剂：这些溶剂分子或其它溶质分子称为荧光猝灭剂。荧光猝灭剂：这些溶剂分子或其它溶质分子称为荧光猝灭剂。荧光猝灭剂：这些溶剂分子或其它溶质分子称为荧光猝灭剂。相对速率相对速率相对速率相对速率 1 1K K1 1 M M*K K2 2 MM*Q Q 与分子的直径
18、、与分子的直径、与分子的直径、与分子的直径、粘度、温度等因素粘度、温度等因素粘度、温度等因素粘度、温度等因素有关。有关。有关。有关。2.2.能量转移熄灭能量转移熄灭能量转移熄灭能量转移熄灭再吸取过程：再吸取过程：再吸取过程：再吸取过程：共振能量转移：共振能量转移：共振能量转移：共振能量转移：分子内能量转移：分子内能量转移：分子内能量转移：分子内能量转移：hvhv激发激发激发激发放射放射放射放射熄灭熄灭熄灭熄灭243.3.氧的熄灭作用氧的熄灭作用氧的熄灭作用氧的熄灭作用氧分子是荧光、磷光的熄灭剂，氧分子是荧光、磷光的熄灭剂，氧分子是荧光、磷光的熄灭剂，氧分子是荧光、磷光的熄灭剂，4.4.自熄灭与
19、自吸取自熄灭与自吸取自熄灭与自吸取自熄灭与自吸取当荧光物质的浓度大于当荧光物质的浓度大于当荧光物质的浓度大于当荧光物质的浓度大于1g/L1g/L时，常发生荧光的自熄灭时，常发生荧光的自熄灭时，常发生荧光的自熄灭时，常发生荧光的自熄灭(浓度熄灭浓度熄灭浓度熄灭浓度熄灭)自吸取：自吸取：自吸取：自吸取：没有除氧，溶液中没有除氧，溶液中没有除氧，溶液中没有除氧，溶液中难以视察到磷光难以视察到磷光难以视察到磷光难以视察到磷光由于由于由于由于 F 1F 1，使荧光，使荧光，使荧光，使荧光强度减弱或消逝强度减弱或消逝强度减弱或消逝强度减弱或消逝.形成二聚体：形成二聚体：形成二聚体：形成二聚体：由于二聚体不
20、发荧光，或放射荧光的能量有变更，造成自熄由于二聚体不发荧光，或放射荧光的能量有变更，造成自熄由于二聚体不发荧光，或放射荧光的能量有变更，造成自熄由于二聚体不发荧光，或放射荧光的能量有变更，造成自熄灭现象。灭现象。灭现象。灭现象。253 3 荧光荧光荧光荧光(磷光磷光磷光磷光)分光光度计分光光度计分光光度计分光光度计一一一一.主要组成及部件的功能主要组成及部件的功能主要组成及部件的功能主要组成及部件的功能荧光分光光度计工作原理基及仪器结构框图荧光分光光度计工作原理基及仪器结构框图荧光分光光度计工作原理基及仪器结构框图荧光分光光度计工作原理基及仪器结构框图光源光源光源光源氙氙氙氙灯灯灯灯激发单色器
21、激发单色器激发单色器激发单色器样品池样品池样品池样品池光电倍增管光电倍增管光电倍增管光电倍增管数据处理数据处理数据处理数据处理仪器限制仪器限制仪器限制仪器限制光源光源光源光源样品池样品池样品池样品池激发激发激发激发单色器单色器单色器单色器检测器检测器检测器检测器数据处理数据处理数据处理数据处理仪器控制仪器控制仪器控制仪器控制发射发射发射发射单色器单色器单色器单色器放射单色器放射单色器放射单色器放射单色器问问问问题题题题：荧荧荧荧光光光光分分分分光光光光光光光光度度度度计计计计与与与与紫紫紫紫外外外外-可可可可见见见见分分分分光光光光光度计有何异同点？光度计有何异同点？光度计有何异同点？光度计有
22、何异同点？26二二二二.光源光源光源光源1.1.光源的要求：光源的要求：光源的要求：光源的要求：vv放射强度足够且稳定的连续光谱放射强度足够且稳定的连续光谱放射强度足够且稳定的连续光谱放射强度足够且稳定的连续光谱vv光辐射强度随波长的变更小光辐射强度随波长的变更小光辐射强度随波长的变更小光辐射强度随波长的变更小vv有足够长的运用寿命有足够长的运用寿命有足够长的运用寿命有足够长的运用寿命2.2.氙灯光源氙灯光源氙灯光源氙灯光源常用气体放电灯类型：常用气体放电灯类型：常用气体放电灯类型：常用气体放电灯类型：氙灯光源氙灯光源氙灯光源氙灯光源 高压汞光源高压汞光源高压汞光源高压汞光源波长范围：波长范围
23、：波长范围：波长范围：2001000nm2001000nm工作压力：工作压力：工作压力：工作压力：520 atm520 atm启动电压：启动电压：启动电压：启动电压：2040KV2040KV运用寿命：运用寿命：运用寿命：运用寿命：10002000h10002000h最广泛应用的连续光源：最广泛应用的连续光源：最广泛应用的连续光源：最广泛应用的连续光源：放射波长范围宽放射波长范围宽放射波长范围宽放射波长范围宽 放射光强度大放射光强度大放射光强度大放射光强度大273.3.高压汞灯光源高压汞灯光源高压汞灯光源高压汞灯光源应用广泛的应用广泛的应用广泛的应用广泛的线光源线光源线光源线光源：253.725
24、3.7 296.5 302.2 312.6 296.5 302.2 312.6313.2 313.2 365.0 365.0 365.5 366.3365.5 366.3404.7 435.8404.7 435.8 546.1 557.0 546.1 557.0579.0 579.0 (nm)(nm)光源光源光源光源样品池样品池样品池样品池激发激发激发激发滤光片滤光片滤光片滤光片检测器检测器检测器检测器数据处理数据处理数据处理数据处理仪器控制仪器控制仪器控制仪器控制发射发射发射发射单色器单色器单色器单色器光源光源光源光源样品池样品池样品池样品池激发激发激发激发滤光片滤光片滤光片滤光片检测器检测
25、器检测器检测器数据处理数据处理数据处理数据处理仪器控制仪器控制仪器控制仪器控制发射发射发射发射滤光片滤光片滤光片滤光片28三三三三.单色单色单色单色器器器器四四四四.检测器检测器检测器检测器光电倍增管光电倍增管光电倍增管光电倍增管 放大倍数：放大倍数：放大倍数：放大倍数：2 2 2 2n n n n 5 5 5 5n n n n;n=10,10;n=10,10;n=10,10;n=10,103 3 3 3 101010107 7 7 7，最大最大最大最大101010108 8 8 8 101010109 9 9 9五五五五.样品池：液池、荧光池样品池：液池、荧光池样品池：液池、荧光池样品池：液
26、池、荧光池1.1.样品池的材料：与紫外样品池的材料：与紫外样品池的材料：与紫外样品池的材料：与紫外-可见分光光度计的吸取池一样可见分光光度计的吸取池一样可见分光光度计的吸取池一样可见分光光度计的吸取池一样2.2.吸取池的形态：紫外吸取池的形态：紫外吸取池的形态：紫外吸取池的形态：紫外-可见分光光度计的吸取池两面透光可见分光光度计的吸取池两面透光可见分光光度计的吸取池两面透光可见分光光度计的吸取池两面透光 荧光分光光度计的样品池四面透光荧光分光光度计的样品池四面透光荧光分光光度计的样品池四面透光荧光分光光度计的样品池四面透光波长范围波长范围波长范围波长范围3.3.运用留意事项运用留意事项运用留意
27、事项运用留意事项简洁裂开简洁裂开简洁裂开简洁裂开问题：紫外问题：紫外问题：紫外问题：紫外-可见分光光度计的吸取池与荧光分光光度计的可见分光光度计的吸取池与荧光分光光度计的可见分光光度计的吸取池与荧光分光光度计的可见分光光度计的吸取池与荧光分光光度计的样品池有什么区分？样品池有什么区分？样品池有什么区分？样品池有什么区分？沾污问题沾污问题沾污问题沾污问题激发单色器、放射单色器激发单色器、放射单色器激发单色器、放射单色器激发单色器、放射单色器29紫外紫外紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计可见分光光度计可见分光光度计:光源光源光源光源样品池样品池样品池样品池单色器单色器单色器单色器检测器检测器检
28、测器检测器数据处理数据处理数据处理数据处理仪器控制仪器控制仪器控制仪器控制荧光荧光荧光荧光(磷光磷光磷光磷光)分光光度计分光光度计分光光度计分光光度计:光源光源光源光源样品池样品池样品池样品池激发激发激发激发单色器单色器单色器单色器检测器检测器检测器检测器数据处理数据处理数据处理数据处理仪器控制仪器控制仪器控制仪器控制发射发射发射发射单色器单色器单色器单色器30紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计测量池测量池(吸取池吸取池)荧光分光光度计荧光分光光度计荧光分光光度计荧光分光光度计样品池样品池样品池样品池I0ItI0ItIF,p31六六六六.磷光分光光度计磷光分光光度计磷光分光光度计磷光分光光
29、度计1.1.光学系统与荧光分光光度计的区分光学系统与荧光分光光度计的区分光学系统与荧光分光光度计的区分光学系统与荧光分光光度计的区分光源光源光源光源样品池样品池样品池样品池激发激发激发激发单色器单色器单色器单色器检测器检测器检测器检测器数据处理数据处理数据处理数据处理仪器控制仪器控制仪器控制仪器控制发射发射发射发射单色器单色器单色器单色器切光器（斩波器）切光器（斩波器）切光器（斩波器）切光器（斩波器）共振荧光：共振荧光：共振荧光：共振荧光：1010-12-12 secsec荧荧荧荧 光：光：光：光：1010-8-8 secsec磷磷磷磷 光：光：光：光：110110-4-4 secsec迟滞荧
30、光：迟滞荧光：迟滞荧光：迟滞荧光：1001010010-4-4 secsec2.2.样品池与荧光分光光度计的区分样品池与荧光分光光度计的区分样品池与荧光分光光度计的区分样品池与荧光分光光度计的区分通常状况下，样品池须要放在盛液氮的石英杜瓦瓶通常状况下，样品池须要放在盛液氮的石英杜瓦瓶通常状况下，样品池须要放在盛液氮的石英杜瓦瓶通常状况下，样品池须要放在盛液氮的石英杜瓦瓶内，来测定低温磷光。内，来测定低温磷光。内，来测定低温磷光。内，来测定低温磷光。32 荧光分析法的应用荧光分析法的应用荧光分析法的应用荧光分析法的应用一一一一.工作曲线法工作曲线法工作曲线法工作曲线法荧光分析的灵敏度比紫外可见分
31、光光度法高荧光分析的灵敏度比紫外可见分光光度法高荧光分析的灵敏度比紫外可见分光光度法高荧光分析的灵敏度比紫外可见分光光度法高10103 310104 4.荧光熄灭工作曲线法荧光熄灭工作曲线法荧光熄灭工作曲线法荧光熄灭工作曲线法F Fx xF FC Cs sC Cx x干脆荧光标准曲线法干脆荧光标准曲线法干脆荧光标准曲线法干脆荧光标准曲线法F FC Cs sF Fx xC Cx x二二二二.荧光分析法的灵敏度荧光分析法的灵敏度荧光分析法的灵敏度荧光分析法的灵敏度留意：低浓度时成线性关系；高浓度时由于自猝灭、自吸取等缘由不留意：低浓度时成线性关系；高浓度时由于自猝灭、自吸取等缘由不留意：低浓度时成
32、线性关系；高浓度时由于自猝灭、自吸取等缘由不留意：低浓度时成线性关系；高浓度时由于自猝灭、自吸取等缘由不成线性关系。成线性关系。成线性关系。成线性关系。33在在在在紫紫紫紫外外外外光光光光照照照照射射射射下下下下会会会会发发发发生生生生荧荧荧荧光光光光的的的的无无无无机机机机化化化化合合合合物物物物很很很很少少少少，主主主主要要要要依依依依靠靠靠靠于于于于有机试剂形成的螯合物。有机试剂形成的螯合物。有机试剂形成的螯合物。有机试剂形成的螯合物。三三三三.荧光分析的应用荧光分析的应用荧光分析的应用荧光分析的应用1.1.无机化合物无机化合物无机化合物无机化合物vv干脆荧光测定法干脆荧光测定法干脆荧光
33、测定法干脆荧光测定法其其其其中中中中，较较较较常常常常测测测测定定定定的的的的元元元元素素素素有有有有：BeBe、AlAl、B B、GaGa、SeSe、MgMg、ZnZn、CdCd与某些稀土元素；测定的灵敏度有些可以达到与某些稀土元素；测定的灵敏度有些可以达到与某些稀土元素；测定的灵敏度有些可以达到与某些稀土元素；测定的灵敏度有些可以达到1010-10-10;某某某某些些些些元元元元素素素素虽虽虽虽然然然然不不不不与与与与有有有有机机机机试试试试剂剂剂剂形形形形成成成成发发发发荧荧荧荧光光光光的的的的协协协协作作作作物物物物，但但但但是是是是它它它它会会会会与与与与发发发发荧荧荧荧光光光光的的
34、的的协协协协作作作作物物物物争争争争夺夺夺夺配配配配位位位位体体体体，组组组组成成成成不不不不发发发发荧荧荧荧光光光光的的的的协协协协作作作作，使使使使其其其其产产产产生生生生荧荧荧荧光光光光熄灭，由荧光熄灭的强度此该元素的含量。熄灭，由荧光熄灭的强度此该元素的含量。熄灭，由荧光熄灭的强度此该元素的含量。熄灭，由荧光熄灭的强度此该元素的含量。较常测定的元素有：较常测定的元素有：较常测定的元素有：较常测定的元素有：F F、S S、FeFe、AgAg、CoCo、NiNi、CuCu、MoMo、WWvv荧光熄灭测定法荧光熄灭测定法荧光熄灭测定法荧光熄灭测定法 自自自自从从从从18671867年年年年G
35、oppelsroderGoppelsroder进进进进行行行行了了了了历历历历史史史史上上上上首首首首次次次次的的的的荧荧荧荧光光光光分分分分析析析析工工工工作作作作，应应应应用用用用铝铝铝铝桑桑桑桑色色色色素素素素协协协协作作作作物物物物的的的的荧荧荧荧光光光光进进进进行行行行铝铝铝铝的的的的测测测测定定定定以以以以来来来来，接接接接受受受受有机试剂可以测定有机试剂可以测定有机试剂可以测定有机试剂可以测定7070多种元素。多种元素。多种元素。多种元素。34vv催化荧光测定法催化荧光测定法催化荧光测定法催化荧光测定法较常测定的元素有：较常测定的元素有：较常测定的元素有：较常测定的元素有：CrC
36、r、NbNb、U U、TeTe、PbPb某某某某些些些些元元元元素素素素虽虽虽虽然然然然与与与与有有有有机机机机试试试试剂剂剂剂形形形形成成成成发发发发荧荧荧荧光光光光的的的的协协协协作作作作物物物物，但但但但是是是是反反反反应应应应速速速速度度度度慢慢慢慢，在在在在某某某某些些些些微微微微量量量量元元元元素素素素的的的的催催催催化化化化下下下下，反反反反应应应应速速速速度度度度会会会会加加加加快快快快，在在在在特特特特定定定定的的的的时时时时间内可用来测定微量元素。间内可用来测定微量元素。间内可用来测定微量元素。间内可用来测定微量元素。vv低温荧光测定法低温荧光测定法低温荧光测定法低温荧光测
37、定法常测定的元素有：常测定的元素有：常测定的元素有：常测定的元素有：CuCu、BeBe、FeFe、CoCo、OsOs、AgAg、AuAu、ZnZn、AlAl、TiTi、V V、MnMn、ErEr、H H2 2OO2 2、CNCN某某某某些些些些微微微微量量量量元元元元素素素素存存存存在在在在，会会会会催催催催化化化化发发发发荧荧荧荧光光光光的的的的协协协协作作作作物物物物产产产产生生生生荧荧荧荧光光光光熄熄熄熄灭灭灭灭，在特定的时间内可用来测定微量元素。在特定的时间内可用来测定微量元素。在特定的时间内可用来测定微量元素。在特定的时间内可用来测定微量元素。溶液温度的降低，显著增加溶液的荧光强度。
38、液氮溶液温度的降低，显著增加溶液的荧光强度。液氮溶液温度的降低，显著增加溶液的荧光强度。液氮溶液温度的降低，显著增加溶液的荧光强度。液氮 1960C1960C较常测定的元素有：较常测定的元素有：较常测定的元素有：较常测定的元素有：CeCe、SmSm、Tb Tb 等稀土元素等稀土元素等稀土元素等稀土元素SbSb、V V、PbPb、BiBi、NbNb、MnMnvv固体荧光测定法固体荧光测定法固体荧光测定法固体荧光测定法固体荧光发在荧光分析中也常常用到。固体荧光发在荧光分析中也常常用到。固体荧光发在荧光分析中也常常用到。固体荧光发在荧光分析中也常常用到。35芳芳芳芳香香香香族族族族化化化化合合合合物
39、物物物存存存存在在在在共共共共轭轭轭轭的的的的不不不不饱饱饱饱和和和和体体体体系系系系，是是是是有有有有机机机机化化化化合合合合物物物物荧荧荧荧光光光光测测测测定的主要类型。定的主要类型。定的主要类型。定的主要类型。.有机化合物有机化合物有机化合物有机化合物待测物待测物待测物待测物试剂试剂试剂试剂 exexmaxmax ememmaxmax测定范围测定范围测定范围测定范围 ppm ppm丙三醇丙三醇丙三醇丙三醇苯胺苯胺苯胺苯胺紫外紫外紫外紫外蓝色蓝色蓝色蓝色0.120.12糠醛糠醛糠醛糠醛蒽酮蒽酮蒽酮蒽酮4654655055051.5151.515氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸氧化酶氧化酶氧化酶氧化
40、酶3153154254250.01500.0150维生素维生素维生素维生素A A无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇345345490490020020蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质曙红丫曙红丫曙红丫曙红丫紫外紫外紫外紫外5405400.0660.066肾上腺素肾上腺素肾上腺素肾上腺素乙二胺乙二胺乙二胺乙二胺4204205255250.0010.020.0010.02 青霉素青霉素青霉素青霉素-甲氧基甲氧基甲氧基甲氧基-氯氯氯氯-(-(-氨乙基氨乙基氨乙基氨乙基)-)-氨基氮杂蒽氨基氮杂蒽氨基氮杂蒽氨基氮杂蒽4204205005000.06250.6250.06250.625玻璃酸梅玻璃酸梅玻璃酸梅玻璃
41、酸梅3-3-乙酰氧基吲哚乙酰氧基吲哚乙酰氧基吲哚乙酰氧基吲哚3953954704700.0010.0330.0010.033胍基丁胺胍基丁胺胍基丁胺胍基丁胺邻苯二醛邻苯二醛邻苯二醛邻苯二醛3653654704700.0550.055四氧嘧啶四氧嘧啶四氧嘧啶四氧嘧啶苯二胺苯二胺苯二胺苯二胺3653654854851010-4-43.3.生命与生物物质生命与生物物质生命与生物物质生命与生物物质 （如：（如：（如：（如：DNADNA相互作用，相互作用，相互作用，相互作用，VB VB的测定等）的测定等）的测定等）的测定等）36小分子与小分子与DNA相互作用探讨相互作用探讨D.Watson&H.Crick 应应 用用37激发波长激发波长525nm525nm，放射波长，放射波长500500700nm700nm的荧光图谱的荧光图谱 3839ScatchardScatchard金属协作物的金属协作物的Scarchard PlotScarchard Plot轴上的截距即n值为：0.234 结合常数为结合常数为8.24*104 L/mol8.24*104 L/mol40分子识别探讨分子识别探讨41