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1、蛋白质组学的应用_蛋白质组学在脾虚证研究中的应用 摘要：介绍了近10年来脾虚的探讨概况，从蛋白质学的特点和脾虚证探讨中存在的问题着手，阐述了蛋白质组学在脾虚证探讨中的重要性及探讨思路。 关键词：蛋白组学；脾虚证；探讨思路 中图分类号：R203 文献标识码：A文章编号：16737717(2008)01001802 传统中医理论认为，脾为后天之本，主运化，为气血生化之源，脾主肌肉四肢，开窍于口。现代探讨认为，脾(胃)是以消化系统为主的多系统、多器官的综合功能单位，涉及现代医学消化汲取、水盐代谢、能量转换、神经、内分泌、免疫、血液、运动功能等。由于脾(胃)功能的重要性以及脾虚证涉及众多的疾病和困难的
2、病理改变，脾虚证作为证候学探讨的重要课题始终是中医临床和基础探讨的重点。 1脾虚证的探讨概况 脾虚证是中医临床最为常见的证候之一，脾虚证的现代探讨始终是中医基础理论探讨中的重要内容。近几十年来脾虚证的本质探讨取得了显著成果，关于脾虚证候发生发展的机理有人提出很多学说，涉及到70余项生化指标的改变。 1.1脾虚证与消化道各种异样变更有关专家们认为。脾虚证与消化道的病理变更、消化功能下降、胃肠道黏膜爱护性屏障作用减弱及胃肠道激素水平紊乱等亲密相关。如彭成等探讨发觉，脾虚模型组大鼠空肠上皮细胞微绒毛肿胀、脱落、数量削减、排列紊乱，这可能是导致小肠汲取功能低下的缘由所在。王洪海等采纳游泳劳倦加饮食失节
3、法造模，发觉脾虚大鼠造模3周后可出现多种胃肠激素如生长抑素、血管活性肠肽(VIP)、B内啡肽(BEP)、神经肽Y(NPY)水平的异样改变。严茂祥等探讨发觉脾虚证大鼠结肠组织中生长抑素(ss)含量较正常组明显增高，胰高糖素(Glu)含量较正常组明显降低，神经肽Y(NPY)、血管活性肠肽(VIP)及P物质(SP)与正常组无显著差异，认为胃肠激素的变更对脾虚证的发生可能起着重要的干脆或问接作用。宋述财等运用“胃肠电检测系统”视察脾虚湿困及其它脾胃虚实证的胃电频谱改变，分析胃动力变更，结果发觉脾胃气虚证患者胃电减弱。进餐反应延迟。李燕舞等在探讨大黄脾虚模型大鼠即时分别的胃壁细胞电镜下可见明显扩张的分泌
4、小管，小管内可见增长密集的微绒毛，但囊泡状结构少见。程学仁等采纳细胞形态立体计量学的方法，对脾虚证患者十二指肠汲取细胞的线粒体进行探讨，发觉脾虚证与十二指肠汲取细胞线粒体的变更有肯定关系。宋于刚等对慢性胃病为主的脾虚患者胃窦黏膜进行探讨，发觉其分泌的G、D细胞数均削减，D细胞面积缩小，GD细胞数和细胞面积比值均增高，因而认为G、D细胞的改变可能是慢性胃病脾虚证胃肠功能障碍的一个重要病理机制。 1.2脾虚证与免疫功能低下有关专家们探讨后认为脾虚证患者及动物模型均存在不同程度的非特异性免疫、细胞免疫功能低下，体液免疫功能紊乱，消化道局部免疫功能下降等异样。林心舜等在试验中测定了脾虚模型小鼠免疫器官
5、重量和吞噬细胞功能的改变，结果发觉，与正常小鼠相比，脾虚小鼠脾、胸腺重量以及全血白细胞、腹腔巨噬细胞的吞噬功能显著低下，提示脾虚的发生与免疫功能低下有着亲密关系。王洪海等采纳复合病因(过度劳倦加饮食失节)造模法，造成脾虚证大鼠模型，造模3周后大鼠的体重、胸腺、脾重量明显降低，复原周后未见明显复原，血清细胞因子水平出现了白细胞介素1B(IL1B)降低、白细胞介素6(IL6)、白细胞介素2(IL2)、TNFa的紊乱改变现象。丁洁试验证明。脾虚证患者外周T淋巴细胞的分化增殖实力下降，末梢血中T淋巴细胞总数、协助性T淋巴细胞明显削减，抑制性T淋巴细胞相对增多，说明脾虚患者细胞免疫功能降低，免疫调整机制
6、紊乱。章梅等采纳化学发光测定和分析的方法，证明脾虚证小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和细胞免疫功能下降，经四君子汤治疗后腹腔巨噬细胞吞噬功能和细胞免疫功能明显复原和增加。温庆祥等探讨发觉，脾虚证患者血清白细胞介素一4(IL4)、白细胞介素8(IL8)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(1gA)水平不同程度降低，其免疫功能下降，经四君子汤治疗后均较治疗前明显上升。 1.3脾与证与基因变更基因技术是近10年来发展最快的科研手段之一，在中医“证”实质的探讨中得到了广泛应用。王肃等应用基因芯片技术探讨利血平脾虚证大鼠模型大脑皮层基因表达谱的改变，发觉筛选出两张芯片上4096条靶基因
7、中，脾虚证模型基因差异表达一样的基因145条，占检测基因的3.54，其中已知基因表达上调的有27条，表达下调的有20条。初步分析后认为，模型大鼠大脑皮层的基因表达变更涉及免疫、细胞骨架运动、能量代谢、蛋白合成和细胞内信号转导等多个方面，提示脾虚证明质涉及大脑皮层的基因表达谱变更。钱会南等采纳苦降泻下、饮食失节和劳倦过度法建立脾虚大鼠模型，以免疫组化和原位杂交法检测下丘脑腹侧核、海马CAl区、前额叶皮层AVP水平和基因表达改变，结果发觉模型组上述脑区AVP免疫阳性反应物水平明显降低，治疗组明显上升；模型组海马CAl区、前额叶皮层AVPmRNA表达显著下降。提示脾虚模型大鼠学习记忆及脑内对学习记忆
8、有促进和增加作用的SP、VIP明显下降。杨传标等在探讨大肠癌脾虚证与bcl2基因表达的相关性及中药健脾康复汤的调整作用的试验探讨中，发觉大肠癌脾虚证患者酸刺激后的唾液淀粉酶活性显著下降，组织标本bcl2基因表达阳性率明显上升。 另外，探讨表明脾虚证尚涉及血液动力降低、酶学变更、代谢功能变更、神经功能紊乱、自由基代谢异样等。由于现代蛋白质组学探讨技术的发展，脾虚证与蛋白质组学的关系探讨受到重视。 2脾虚证蛋白组探讨的价值与探讨思路 蛋白质作为生物体最重要的结构，但同时又是生命活动的干脆执行者，它的组成远比基因浩大和困难，具有相对独立的代谢过程，对生物机体内部和外部因素具有产生反应的实力。而且蛋白
9、质之间存在着活跃、广泛的相互作用，因此蛋白质组是基因组探讨的逻辑发展。与具有同源性和普遍性的基因相比，蛋白质组具有动态性、时间性、空间性、特异性等特征。这与同样具有整体性、动态性、时相性、困难性等特点的中医“证”有着惊人的相像，也正是这个特点，使蛋白质组在脾虚证的探讨中具有极为重要的价值，如前述所，脾虚证的探讨虽然已经取得了不少成果，但由于涉及的指标多、系统广，具有特异诊断功能的指标极少，有很多指标的改变不仅在脾虚证中可见，在其它证候中也可出现类似的改变，毫无疑问，如在脾虚证探讨中引入蛋白质组学，将无论对脾虚证的微观诊断和临床用药产生重要影响。 笔者拟就脾虚证的蛋白质组学有关内容进行全面探讨。
10、依据大量的文献资料以及初步的试验探讨，笔者认为首先应依据现有探讨成果，建立脾虚证的动物模型，探讨脾虚证、正常动物和其它证(如肾虚证)的蛋白质组学的差异表达。其次，从临床角度着手，对常见疾病(如消化性溃疡、慢性胃炎、慢性肠炎等)的脾虚证蛋白质组学进行探讨，以了解其“异病同证”的蛋白质组学的表达状况，将辨证与辨病相结合，通过这种方式努力找寻与脾虚证微观诊断亲密相关的蛋白质表达，了解其结构的功能状态，并建立相关的数据库。在此基础上进一步扩大病种探讨，对各种疾病脾虚证的蛋白质组学绽开探讨，采纳上述相同的方法和途径分别建立各种疾病脾虚证的相关蛋白质组学的数据库。其三，运用健脾中药(如人参、白术等)和方剂
11、(如四君子汤等)对脾虚证模型进行治疗，了解其对筛选出的差异蛋白质，是否有调整作用。其四，运用生物信息学、数理统计方法进行综合分析和归纳，以期发觉脾虚证特异性蛋白，深化了解健脾中药(或方剂)的靶蛋白，为将来临床药物探讨供应基础。其五，采纳western plotting和ELISA等方法对已筛选出的靶蛋白进行验证，以确定筛选出的蛋白质是否为所要找的反映脾虚证特点的特异性蛋白。 脾虚证是中医临床最为常见的证型，近几十年来国内外对该证的探讨已较为系统和全面，但仍存在很多不足，随着蛋白质学探讨方法的引入，对该证明质的探讨必将带来突破性进展，尤其是在脾虚证动物模型的比较探讨、脾虚证的特异性蛋白和健脾中药作用的靶蛋白的探讨，无论对于脾虚的微观诊断抑或临床治疗脾虚证的方药筛选等均将产生巨大的作用。