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2、8;71/0.837!?,?%王春林等辅酶。口服剂型临床研究资料&内部资料?%+#6469 1 920/345 670860 34398,4696034;1?7044241 0.60./一443 98;71/0.837,!%?1?(卫 志华等新桑与临床?&?!,?肝素钠生产工艺中若干问题的研讨四川大学生物系魏章祥喊丫肝素是重要的生化药物之一,它具有抗凝血、抗肿瘤、抗病毒等药理作用,广泛分布于哺乳动物的肺、肠、小肠粘膜等组织中,由于我国猪的资源丰富,小肠粘膜价格低廉,故目前大都以此为原料生产肝素钠,如何提高粗品的产量、质量,如何提高精品生产中肝素的回收串。这是本文所要讨论的主要问题。从目前国内收
3、购的租品来看,抗凝效价一般在%47。有的甚至将粗品经 过除酸蛋 柱 彩 贡后,效价也仅有7左右,作者认为,这些原因的造成并不在于工艺本身有什么大的差异。只是由于生产粗品的厂家技术力量较弱,而工业生产中的情况往往是较复杂的,要正确掌握和灵活运用国内已报道的离子交换法生产肝素钠豹各种工艺条件,就 必须将粗品生产中常见的闷题提出来加以深入 的研究,以提高和稳定我国肝索生产的产量和质量。现在国内普遍使用?!?,。,等几种强碱阴树脂,基本工 艺流程可表示如下离交粘膜、提取一洗涤,洗!?或。,等乙醇沉淀氧化脱一洗脱 液一抽滤烘干一粗品一精品。下面分别对各工艺步骤中某些易出现的问题加以讨论一、提取过程中某些
4、 因素对肝素产/的影响提取过程是在一定条件下肝素从肥大细胞内释放并使肝素蛋白质 复合物 发生解离的 过程,对于提取过程的某些影响因素,国内也有资料报道,在实际生产中,情况较为复杂,作者曾考察了几个肝素租品厂的枯膜康料,发现里面常常混杂着大量的肠皮和断节小肠,且总固体量 只有左右,这是影响提取率和产盘的原因之一,如果要使这样的原料达到最大提取的暂时储存问题,现在先讨论下树脂使用前的冲洗。这个问题看 起来似乎很小,但影响 甚大,有许多单位为了图方便,省事,当树脂在 经过处理或浸泡后,不是 进行 漂洗&尽管许多工 艺书上写的是漂洗,而是将树脂装在袋内用自来水冲洗,这实际上是不能将树 脂内部或表面的杂
5、质排除掉,日积月累,树 脂的表而 孔穴就会被大量堵塞,在交换 吸 附时,肝素就不能进入树脂内部进行反应,只能进行一些表 而 交换,能够进去反应 的物质大多是一些小分子物质&部分堵塞的孔穴。有些粗品厂在 用新树脂进行生产 时,开始几个月内产量质量都毕木 正常,但到 后来就发现产量和质量都明显)降,其部份原因就是 忽略了漂洗树 脂的爪要性。其次是树脂在每次使用完毕&洗脱 后后,应 充分漂洗干净,浸泡于)一!的酸水中,使其充分膨胀,有的则不然,将其浸泡于%一的3,)溶液中,生产实践证明,离子交换树脂在高离子强度的溶 液内浸泡五小时以上,树脂的颗粒会发生收缩,致使树 脂的孔穴变小。达不到各种树脂 的额
6、定 交换容量。尤其是膨胀率小的树脂如?!?#对肝素产 欣和质量的影响 更 为明显。以上两种七,6况就是一工业生产中常 见的树 脂“中毒”现象之一。作一若价对以上两种 倩况的分析结6仑进行 了考察,即在同一条件下,将正常漂洗,储存的树乃6亏与 非正常冲洗,储存的树脂加入 提取液内,交换吸材八小时&按工 艺条件后,测定提取、一甲盯素的残留量,结果见 下表表4才正 常漂洗储存非正常漂 洗储存吸附后&7 4、4?友造批号?!附前#%吸 附后!#%吸 附有!#!&只,土今(一了一)八舀月住。+,。乃了氏./0 1叹率,必须将粘膜里混杂的肠皮和断节小肠加以切割或绞碎,原则上说,在以生物材料提 取生化产品时
7、,组织的粒度愈细,则生物物质 就越易从细胞内释放出来,据英国、西德、美国等国家的专利报道,含肝素的动物组 织在投料前需进行绞碎或在+234冷冻后刨成片状并纹碎。然后再进行原料的进一步处理。这样可使肝素的提取率大为提高。实验证明,如果在投料前将原料按以上方法进行预处理,则一次提取的提取率可达5 6左右。反之,一次提取的提取率仅为7 6左右,有的甚至 7 6都不到。由此可见提取前原料预处理的重要性。此外,温度声,8)9:用量,时间等对提取率都有很大影响。在具体运用这些条件时,应当注 意以下一些原则。,;温度为限,其它如?和时间等在生产中都易掌握,提取 时,如果按一般工 艺 要求,肠粘膜应 加一 定
8、量的水,如肠粘膜原料中含有大量的 断节肠皮和小肠,且还有大量水分,若肠粘膜的总固体量低于+6,就不用加水提取。反之,应加适当自来水进行提取,以利用以后的过滤和 交换。二、交换吸附对产量 和质量的影响;强碱性阴离子交换树脂在肝素钠生产中的使用 和储存问题,55和。树脂是 由苯乙烯和对苯二乙烯 或液体石蜡%共聚合 成后,在其苯环上引入季胺基 一8十 9%9 一%而成的,外观为球形,它 们的活性基团是季胺基。能够与肝素进行交换反应 的离子是季胺 基因上 的9 一离子。这两种树脂的表面具有许多孔穴,以增加树脂的表面积和交换容量。新购买的树脂,由于孔穴 内部很多杂质,以致孔穴堵塞,所以,应该按常规将树脂
9、进行认真处理。所谓使用和储存,是指在树脂加人提取液 之前的冲洗以及使用后3,由上表可见,在其它工艺条件不变的估况一,树脂的 正常漂洗,储存是十分关键的,应当指出的是,即使是非正常的冲洗和储存的树脂,尽管肝素钠 吸附得很 少,但是在 最后 的洗涤,飞尸、洗脱沉淀时仍有大量的白色沉淀,有的单位因无检验手段,无法判断是肝素还是杂质。待以后发现时,生产巳经蒙受了很大的损失,这是应该特别注意的。!#离交过程对粗品产量和质量 的影响这 里主要强调的是对工 艺本身的正确掌握问题,要使离交的效果好,首先提取液必须澄表!批号静态洗涤?!7?%7?7?7动态洗涤?7?!?7?+7?!(71司卜电甲清,尽 量渺瞬罚
10、版溯理“竞争一性”杂质,在离交过程中,由于时间较长,户要获得较高质量和产量的肝素粗品,以动态洗会有所下降,夏天这种情况尤为明显,应随时涤为宜。调 整 到规定的范围,因为是影响肝素或树脂!#洗脱电荷情况 的一个重 要因素,当月下降到 一定程目前国内生产肝素钠 的工艺中,洗脱液的度后,不仅肝素不能交换上去,就是交换上树浓度多数为3 4,且都为静态洗脱,为了考脂的肝素也会因本身电荷的改变而脱离下来,察3 4 在工业生产中的实际效果,我们测某些 厂就是忽略了上述原因造成了经济上的很定了。树脂用于肠衣盐液生产时3 4大损失。和+3,)的洗脱情况,首先按工艺要求将三、洗涤、洗脱 对肝素质/的影响树脂用3
11、4分别静态洗脱三次后。水洗至?#洗涤指从树脂上除去杂质的过 程,目无咸味,浸泡于+_3 4中过夜,次日搅前一般均采用静态洗涤,其特点是简便,不需拌4小时后,取其 上清液进行测定,发现 要特殊设备,但是使用静态洗涤要获得在产量3 4洗脱后的浸泡液内含肝素!。74和质量上两者兼顾的满意结果似乎比较困难。不等,而+3 4洗脱后的浸泡液内 含肝素因为在静态洗涤时,涤洗液是非流动相 的。当仅?一?%74或几乎没有肝素,从理论上讲,洗涤开始后,“杂质”不断从树脂上进入洗涤3 4洗脱是完全可以的,但在实际生产液,洗涤速度就逐步减慢,最后达到平衡,欲中,尽管在加洗脱液前将树脂滤干,但树脂的使杂质能洗干净,就必
12、须增加洗涤次数或洗涤孔穴内仍含有大量水分或 洗涤液。当 其液的体积,据实验证明,用?#!3,)作为3,)洗脱液加入时,实际浓度仅有!#%!#洗涤液时,溶液每毫升含肝素约单位左右,3 4,因而不能保证将肝素洗脱完全。但当采因此如果洗涤液的体积 过大,肝素的损失也就用+3 4 洗脱时,实际浓度就有#%左右。相应增多。但是如果采用动态洗涤,因洗涤液这 是静态洗脱的情况,如果用动态洗脱,因洗是流动相的,杂质从树脂中进入洗涤液后便不脱液是流动的,3 4 洗脱就完全可以达到断被“带走”。这样在树脂 的每一“位点”周预 期 目的,还可使用天青)法判断洗脱终点,围就 不会达到平 衡,直至将杂质全部洗掉,我保证
13、洗脱完全,且可以达到“浓缩”洗脱液 的们 曾对以上两种洗涤方式进行了考察分析,即目的,节约乙醇。在同一条件下,将?!?、?树脂用。#%,)四、肝素粗品的质盘对精品产/和质且的一4#)3 4分别进行静态和动态洗涤,同样影响洗至树脂体积的+一%倍,最后用+3 4 洗粗品的质量如何,直接关系到精品生产的脱后,?#%倍?%乙醇沉淀,粗品烘干后测定产量和质量,肝素精品的生产目前国内大都采效价,结果见表!用过氧化氢一高锰酸钾组合氧化法,即使采用可以看出,在同一条件下,动态洗涤比静态洗这种两步氧化的方法,有的质觉也不一定达到涤的肝素效价平均 提高约 7。因此说,双版本标准,由于近年来精品的需求量大,粗品货源
14、相对紧缺,故目前对粗品的质量要求不高,仅要求抗凝效价在 7以上,有的地方甚至要求在%7以上,对其它质量标准无任何要求,以目前的状况进行肝素精品生产,产量&效价回收率一般在(左右,有的甚至连(也达不到,但是如果将粗品的抗凝效价提高到?!7左右,其 它质量指标&如重金属等加以适当控制,则精品的产量将会大大提高,据李菊平等采用猪肠衣盐提取的肝素租品&?7以上进行精品生产的报告和作者的一些实验事实证明,如果采用较高效价的肝素粗品&?!7左右来生产精品,仅虽一次氧化&!后,精品的各项质量指标均超过 或达到双版本标准,尤其是光吸 收值和钾含量更好。色泽洁白,且效价回收率一次&不包括回收最 低 可达+#,最
15、高 可达巧#,平均回收率也在#!,较目前一般的精品产量提高?一!。成本由%元亿单位降低至!(%元亿单位,生产周 期较原来缩短约?,经济效益是不言而喻的。根据以上事实,作者认为,如果通过提高粗品的质量指标来增加精品生产的经济效益,从而从本扭转目前许多精品厂 的亏损局面是完全 可行的。肝素钠生物测定法中一种简便猪血浆法的研究重庆市药品检验所谢金 明肝素钠生物测定方法有多种,所使用的血凝材料各国药典规定不同。如美国药典规定绵羊血浆,日本药局方规定牛全血,英国药典规定牛全血和绵羊血浆,我国药典规定兔全血等。随着对肝素钠生物测定法血凝材料的研究,能否把猪血浆作为法定血 凝材料,一直受到药检工作者的重视。
16、由于各国药典对肝素钠生物测定方法的实验设计要求不同,对血凝材料的规定、处理、贮存,对血凝终点观测的方法不同,以及对肝素钠的抗血凝效力强度要求不同等因素,因此,肝素钠产品外销或内销,必须根据不同国家药典的规定,而采用 相应的生物测定方法。但是,在肝素钠粗制品生产 和精制品生产过程中,质量控制所采用的生物效价测定方法,一般为非法定方法。应满足取材便捷、结果准确等要求。国内曾报导用猪血浆代替兔血浆,参照美国药典法设计所测得的肝素钠 抗血凝效价与兔血浆法近似。由于取血条件复杂和实验结果计算较繁,较难推广应用。但是,它表明了猪血浆应用于肝素钠抗血凝效价测定 的可行性。为了促进墓层生产单位能就地取材开 展
17、肝素钠产品的质量控制,提高产品的收得率,本文采用混合猪血浆作血凝材料,按简捷法进行实验设计&“,对肝素钠进行抗血凝效价测定。测定结果与采 用山羊血浆作血 凝材料,按美国药典法,美国公 司瑞 克尔药厂法测定 的结果近似。报导 于下一、材料与方 法拘修酸钠猪血浆的 制备将 拘摊酸钠溶液,预先放入清洁干燥的广口瓶内。用一清洁干燥 的容器,接!一头健康猪 屠宰时放出的新鲜血液,加入广口瓶内。使构株酸钠溶液与新鲜猪血液的容积 比为?。混合均匀后,置离心机内,以?%转分的 速度分离血浆,离心?%分钟。血浆分装于清洁干燥的血浆瓶或其他适宜的容器内,置一?的冰箱内冻 结贮存。实验 时,取 冻结猪血浆一瓶,置(值温水 浴中解冻,用双层纱布或脱脂棉过滤,除去血浆中游离纤维蛋 白物,放 入冷藏瓶中待用。一般将猪血浆。专调节在?一?时左右,以#?氯化钠溶液为稀释 剂。!#肝 素钠标准品溶液的配 制精密称取肝