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1、第七章第七章芳酸及其酯类芳酸及其酯类芳酸及其酯类芳酸及其酯类药物的分析药物的分析药物的分析药物的分析药物分析教研室药物分析教研室Analysis of Aromatic carboxylic acids&estersContentsChemical structure&featureChemical structure&feature1Identification2Detection of specific impuritiesDetection of specific impurities3Assay 4第一节第一节 结构与性质结构与性质特点 均有苯环、羧酸或其酯均有苯环、羧酸或其酯 水杨酸
2、类水杨酸类和和苯甲酸类结构苯甲酸类结构中的羧基直接与苯环相连中的羧基直接与苯环相连 除了酸性基团外，各自具有本身的官能团除了酸性基团外，各自具有本身的官能团 分子中苯环、羧酸和取代基的相互影响，使芳酸的分子中苯环、羧酸和取代基的相互影响，使芳酸的酸性强度各有不同酸性强度各有不同第一节第一节 结构与性质结构与性质(一一)苯甲酸类苯甲酸类苯甲酸(benzoic acid)丙磺舒(probenecid)甲芬那酸(mefenamic acid)羟苯乙酯(ethylparoben)(二二)水杨酸类水杨酸类第一节第一节 结构与性质结构与性质水杨酸 SA(salicylic acid)阿司匹林(aspiri
3、n)对氨基水杨酸钠(PAS-Na)双水杨酯salsalate贝诺酯(Benorilate)(三三)其它芳酸类其它芳酸类氯贝丁酯(clofibrate)布洛芬(ibuprofen)第一节第一节 结构与性质结构与性质第二节第二节 鉴鉴 别别(一一)铁盐铁盐紫堇色赭色米黄色pH5.06.0T.S.FeCl3pH46中性溶液第二节第二节 鉴鉴 别别布洛芬第二节第二节 鉴鉴 别别氯贝丁酯Fe/3紫色羟肟酸铁配位化合物第二节第二节 鉴鉴 别别(二二)重氮化重氮化-偶合反应偶合反应贝诺酯橙红色(三三)氧化反应氧化反应第二节第二节 鉴鉴 别别甲芬那酸H2SO4深蓝色黄色并产生绿色荧光随即变为棕绿色(四四)水解
4、反应水解反应第二节第二节 鉴鉴 别别(五五)分解产物的反应分解产物的反应(六六)UV第二节第二节 鉴鉴 别别(七七)IR-COOH-OH-COOHPh-C邻位取代Ph第二节第二节 鉴鉴 别别N-HO-HN-HPh:C=C芳胺酚第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查一、阿司匹林生产工艺ASA副产物SAu 溶液澄清度溶液澄清度u 水杨酸水杨酸u 易碳化物易碳化物u 炽灼残渣炽灼残渣u 重金属重金属第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查1.1.溶液澄清度溶液澄清度(Na(Na2 2COCO3 3溶液溶液)醋酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯阿司匹林样品阿司匹林样品0.50g，加温热至约，加温热至约45C
5、的碳酸钠试液的碳酸钠试液10ml溶解后，溶液应该澄清。溶解后，溶液应该澄清。2.2.水杨酸水杨酸第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查淡黄、红棕、深棕色二、对氨基水杨酸钠第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查间氨基酚第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查1.1.双相滴定法双相滴定法(Ch.P)样品样品0.3g0.3g合并乙醚液合并乙醚液无水乙醚25ml3次水10ml甲基橙指示剂HCl滴定液滴定液滴定滴定杂质杂质杂质杂质HCl HCl HCl HCl 转溶入转溶入转溶入转溶入H H H H2 2 2 2O O O O相相相相消耗滴定液不得超过0.30ml第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查2.
6、HPLC法法(USP)色谱条件色谱柱色谱柱C18，(250mm4.6mm，10m)流动相流动相NaH2PO4(0.05M)-Na2HPO4(0.05M)-MeOH(含含氢氧化氢氧化四丁基胺四丁基胺1.9g)（425:425:150）检测波长检测波长254nm内标内标磺胺磺胺间氨基酚杂质限量间氨基酚杂质限量=10(C/W)(Ru/Rs)(%)CC标准对照液浓度标准对照液浓度WPAS-NaWPAS-Na含量含量RuRu供试溶液中间氨基酚与磺胺峰相应值之比供试溶液中间氨基酚与磺胺峰相应值之比RsRs标准溶液中间氨基酚与磺胺峰相应值之比标准溶液中间氨基酚与磺胺峰相应值之比0.25%第三节第三节 特殊杂
7、质检查特殊杂质检查样品中含有样品中含有-COOH-COOH，-SO-SO3 3H H基团时，选用的离子对试基团时，选用的离子对试剂应为剂应为带正电荷的有机胺盐带正电荷的有机胺盐除离子对试剂外，还需加入磷酸盐或其它除离子对试剂外，还需加入磷酸盐或其它缓冲液缓冲液，以控制流动相的酸度，使酸性官能团解离以控制流动相的酸度，使酸性官能团解离样品中含有样品中含有-NH-NH2 2，-NH-NH-基团或其它阳离子时，应选基团或其它阳离子时，应选用用烷基磺酸盐或硫酸盐烷基磺酸盐或硫酸盐作为离子化试剂作为离子化试剂样品中若同时含有不同性质的基团时，则以上规则样品中若同时含有不同性质的基团时，则以上规则选择的离
8、子对试剂均为合理选择的离子对试剂均为合理三、二氟尼柳第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查供试品对照品色谱柱：色谱柱：C18流动相：水流动相：水-甲醇甲醇-乙腈乙腈-冰醋酸冰醋酸检测波长：检测波长：254nm供试品溶液的色谱图中供试品溶液的色谱图中如果有杂质，各杂质的如果有杂质，各杂质的峰面积之和不得大于对峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积。照溶液主峰面积。第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查四、甲芬那酸n 铜盐铜盐原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法n 有关物质有关物质HPLC五、氯贝丁酯n 对氯酚对氯酚GC、HPLCn 挥发性杂质挥发性杂质GC第四节第四节 含量测定含量测定一、酸碱滴定法
9、(Acid-base titration method)苯甲酸苯甲酸pKa 4.20水杨酸水杨酸pKa 2.98酸性较强酸性较强羧酸邻位羧酸邻位-OH-OH，吸电子基团，使酸性增加；吸电子基团，使酸性增加；分子内氢键，更增加了其极性分子内氢键，更增加了其极性直接滴定Aspirin、丙磺舒丙磺舒(Ch.P.BP.JP 等等)苯甲酸苯甲酸(Ch.P等等)均均采用本法采用本法第四节第四节 含量测定含量测定1.直接滴定法直接滴定法乙醇乙醇作用：溶解作用：溶解ASAASA；防止；防止ASAASA在水溶在水溶 液中滴定过程易水解液中滴定过程易水解中性乙醇：中性乙醇：对指示剂对指示剂(酚酞酚酞)而言为中性，
10、而言为中性，可消除滴定误差可消除滴定误差 pKa 36 的药物溶于中性醇的药物溶于中性醇,可可直接用直接用NaOH滴定滴定 pKa 69 的药物要用的药物要用非水溶液滴定法非水溶液滴定法若若若若SASA不合格，不宜采用本法不合格，不宜采用本法不合格，不宜采用本法不合格，不宜采用本法第四节第四节 含量测定含量测定2.水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法(Residual titration after hydrolysis)取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，缓缓煮沸10min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并
11、将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4第四节第四节 含量测定含量测定T毫摩尔质量0.5规定的硫酸浓度为0.25mol/L第四节第四节 含量测定含量测定3.两步滴定法两步滴定法(Two-step titration)Aspirin片枸橼酸枸橼酸Citric acid酒石酸酒石酸Trataric acid水解产物水解产物水杨酸水杨酸SAHAc第一步第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc第二步：第二步：水解后剩余滴定第四节第四节 含量测定含量测定取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林0.3g)，
12、置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性)20ml，振摇使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液(0.1mol/L)至显粉红色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，用H2SO4液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每每1ml1ml的的NaOHNaOH液液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于18.02mg18.02mg的的C C9 9H H8 8OO4 4第四节第四节 含量测定含量测定计算计算：称取10片重 1.8240g片粉重 0.5312gCNaOH：0.1032mol/LC 0.0
13、5120mol/L 标示量 0.1g V-3.02ml V0-20.18ml第四节第四节 含量测定含量测定二、亚硝酸钠滴定法对氨基水杨酸钠第四节第四节 含量测定含量测定三、双相滴定法(Titrimetry in two phases)苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于水易溶于水易溶于水易溶于水；苯甲酸不溶于水，不利于终点的正确判断 因此，利用苯甲酸能溶苯甲酸能溶苯甲酸能溶苯甲酸能溶于有机溶剂于有机溶剂于有机溶剂于有机溶剂的性质，采用双相滴定法HCl乙醚(苯甲酸)H2O(苯甲酸钠)0.5mol/L25ml1.5g50ml分出分出H H2 2O O层，置具塞锥层，置具塞锥形瓶形
14、瓶乙醚层用乙醚层用H H2 2O 5mlO 5ml洗涤，洗涤，洗液并入锥形瓶洗液并入锥形瓶加乙醚加乙醚20ml20ml，继续用继续用HClHCl滴定，至水层显持滴定，至水层显持续的橙红色续的橙红色第四节第四节 含量测定含量测定四、UV1.直接直接UV法法2.离子交换离子交换-UV法法氯贝丁酯在氯贝丁酯在226nm226nm的波长处有最大吸收，但对氯酚等的波长处有最大吸收，但对氯酚等有关物质亦有吸收，干扰有关物质亦有吸收，干扰UVUV法的测定。根据氯贝丁酯法的测定。根据氯贝丁酯为酯结构，不能发生电离，而有关物质可发生酸性解为酯结构，不能发生电离，而有关物质可发生酸性解离的性质差异，采用阴离子交换
15、色谱分离后，采用离的性质差异，采用阴离子交换色谱分离后，采用UVUV法测定。法测定。第四节第四节 含量测定含量测定3.CPC-UV法法(Column Partition Chromatography)利用固定相酸碱性的不同酸碱性的不同进行分离利用药物和固定相起化学反应而进行分离利用生成离子对离子对进行层析分离单纯靠选择流动相进行分离200300mm60mm4mm22mm层析柱玻棉压榨棒350mm21mm担体：硅藻土：硅藻土(Celite 545)(Celite 545)固定相：一定：一定pHpH的缓冲水溶液的缓冲水溶液流动相：与水不相混溶的有机：与水不相混溶的有机溶剂溶剂(洗脱前必须先用水饱和
16、洗脱前必须先用水饱和)第四节第四节 含量测定含量测定a.SA测定玻棉磷酸磷酸-硅藻土硅藻土FeCl3-尿素尿素-硅藻土硅藻土供试液制备供试液制备l用用CHCl3 50ml洗涤，弃去洗涤，弃去 (洗去洗去ASA)l10ml冰冰HAc-水饱和乙醚液水饱和乙醚液(110)(使使紫色配位化合物被分解紫色配位化合物被分解，SA析出析出)l洗脱液收集于已盛有洗脱液收集于已盛有10ml甲醇和甲醇和2滴滴HCl的的50ml量瓶中量瓶中，继用，继用30mlCHCl3洗，并稀释至刻度洗，并稀释至刻度第四节第四节 含量测定含量测定测定：测定：306nm测定供试液和测定供试液和SA对照品液对照品液A供试液供试液 A对
17、照品液对照品液L=75(g/ml)10ml 100mg1000 100%0.75%SA与试剂生成与试剂生成紫色水杨酸铁紫色水杨酸铁配位化合物，在柱配位化合物，在柱上上移动慢移动慢，带窄带窄，色泽较深，色泽较深若有若有Fe3+洗下，洗下，黄色黄色影响测定结果影响测定结果 消除干扰方法消除干扰方法：于底部拌有磷酸的硅藻土，：于底部拌有磷酸的硅藻土，生成生成不溶解的不溶解的FePO4第四节第四节 含量测定含量测定b.ASA测定供试液制备洗脱洗脱 5,25mlCHCl3，弃去，弃去CHCl3洗脱洗脱 10ml冰冰HAc-CHCl3(110)*；85ml冰冰HAc-CHCl3(1100)，并稀释至，并稀释至100ml测定测定：280nm 空白空白：CHCl3NaHCONaHCO3 3使使ASA和和SA成盐成盐保留于柱上保留于柱上 用用CHClCHCl3 3洗脱的目的洗脱的目的：去除中性或碱性杂质去除中性或碱性杂质冰冰HAcHAc酸化的目的酸化的目的：使使ASAASA游离游离，易被，易被 CHCl3洗脱洗脱第四节第四节 含量测定含量测定五、HPLC第五节 体内药物分析