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1、脂质沉积性肌病外周血白细胞脂滴沉积的超微结构研究 福建医科大学附属第一医院神经内科 慕容慎行 王 柠 福建省泉州市第一医院神经内科 蔡 江 萍 脂质沉积性肌病(lipid storage myopathy,LSM)是由于肉毒碱（carnitine）或作用于脂质代谢的一些酶等缺乏，直接或间接地干扰了肌肉细胞内的脂质代谢，导致脂滴在肌纤维中的异常积聚而引起的肌病 lLSM有许多不典型的临床表现，其诊断必须依靠肌肉病理检查。l但肌肉活组织检查，具有损伤性，不易重复，病人较难接受，不适于随访病人。l因此探讨LSM的其他辅助性诊断手段，配合肌肉活组织病理检查具有重要的临床意义。研究现况l国外陆续有学者报
2、道LSM患者的周围血液白细胞脂肪染色可观察到脂滴存在。但文献中未见进一步系统研究的报道。l国内在这一研究领域尚为空白。研究目的l利用电镜检查较为深入地研究周围血液白细胞超微结构特征l探讨白细胞胞浆脂滴检测在LSM中的临床应用价值 研究对象 lLSM患者8例，男3例，女5例；年龄：10-41岁，平均年龄20.99.7岁；病程2-12年。全部病例均经临床表现、实验室检查、电镜和病理组化等检查综合确诊。l健康对照者5名，男性2名，女性3名，年龄：23-44岁，平均年龄30.68.3岁。5位自愿者血清CPK、LDH、ALT、AST、Mb均正常，无遗传性疾病家族史。临床资料l全部LSM病例均呈亚急性或慢
3、性病程，复发者4例。l均以肌无力为首发症状，双侧对称性，近端肌肉受累严重，远端肌肉受累较轻。l各部位肌肉受累情况：下肢8例，上肢7例，肩胛带及骨盆带肌各7例，颈肌7例，咀嚼肌5例，吞咽肌2例，呼吸肌2例。l肌萎缩6例，肌痛及肌压痛5例，l有家族史5例。l实验室检查：CPK：241-3297 IU/L，LDH：303-3080IU/L，ALT：52-418IU/L，AST：31-717IU/L，3例Mb110g/L。l肌电图均为肌源性损害。研究方法 l标本取材及制作：采血离心吸去上清液加入3%戊二醛-1.5%多聚甲醛-0.1M磷酸盐缓冲液4固定半小时细切成长条状标本 4固定2小时以上 0.1M
4、PBS漂洗三次 1%锇酸-1.5%亚铁氰化钾溶液4固定2小时系列梯度酒精、丙酮脱水定向包埋超薄切片电子染色。l电镜观察及细胞计数：Hu-12A型透射电镜观察并摄片。每份标本均按固定方向统一顺序计数50个中性粒细胞，统计沉积的脂滴总数和含有脂滴的阳性细胞数。统计学分析 l两组中性粒细胞含脂滴总数及含脂滴的中性粒细胞阳性率比较，若方差齐性采用t检验，若方差不齐采用t检验，并用SPSS10.0软件包统计。结结 果果 LSM患者：l周围血液白细胞胞浆中可见到脂滴存在，多圆形或椭圆形，l内容物接近透明，有的电子密度较高，l体积大小不等，直径约0.1-1.1m，l同一个细胞中脂滴常为2-3个，有的细胞脂滴
5、多达5个，l脂滴沉积以中性粒细胞明显，淋巴细胞及红细胞胞浆中未见脂滴。健康对照者：l周围血液白细胞中脂滴极为罕见，l细胞中脂滴多为1个，l体积细小，直径约0.1-0.2m。表表1 1两组中性粒细胞中沉积的脂滴数两组中性粒细胞中沉积的脂滴数LSM组 健康对照组 序号 细胞总数（个）脂滴数（个）序 号 细胞总数（个）脂滴数（个）150291 507250672 509350413 50 13450494 508550215 505650637502485052平均值*43.2517.47*8.402.97*平均值为同组数据的均值,*P0.01 表表2 2 两组周围血含脂滴的中性粒细胞阳性率两组周围
6、血含脂滴的中性粒细胞阳性率LSM组 健康对照组 序号 细胞总数（个）阳性细胞数（个）阳性率（%）序号 细胞总数（个）阳性细胞数（个）阳性率（%）150183615071425027542509183501938350132645023464508165501530550510650265275017348502346平均值*42.008.75*16.805.93*平均值为同组数据的均值,*P0.001讨讨 论论本文研究结果显示：lLSM患者周围血液白细胞胞浆中可观察到脂滴沉积,以中性粒细胞明显，红细胞及淋巴细胞未见脂滴存在。l健康对照组只在个别白细胞胞浆中观察到细小脂滴，极为罕见。白细胞胞浆中
7、出现脂滴沉积，其机制可能为：l白细胞膜存在肉毒碱摄取功能减弱，导致长链脂肪酸代谢异常；l全身型患者肝脏合成肉毒碱功能缺陷，血清肉毒碱水平降低。红细胞中未出现脂滴沉积，其原因可能为：l红细胞的能量供应，95%来源于糖原酵解，脂肪氧化代谢障碍时对其影响小，不导致脂滴沉积。国外有多位学者对其他神经肌肉病的周围血液白细胞进行研究：l发现除了LSM外，其他神经肌肉疾病均未见到类似的脂滴沉积l说明周围血液白细胞脂滴沉积仅见于LSMl因而周围血液白细胞脂滴沉积的电镜检查，对LSM的的诊断具有较高的特异性 lHart等4报道1例23个月的LSM患儿在发病初期周围血液白细胞未出现脂滴沉积。病情加重时，很快出现脂滴，油红O染色阳性。说明周围血液白细胞脂滴沉积，随病情加重而变化。l国内也有文献报道5，2例LSM患者白细胞内脂滴随病情好转而减少，作者认为白细胞内脂质沉积与病情轻重有关。结结 论论l周围血液白细胞脂滴沉积的电镜检查，可作为本病的一种简便、快速、特异性高的诊断方法。l抽取外周血液，具有损伤小，适于重复，患者容易接受等优点，l因此该项检查方法可应用于疾病初筛、病情随访、疗效判断，在临床工作中，对肌肉活组织病理检查,起着参照和补充的作用。