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1、u标本采集的重要性和原则标本采集的重要性和原则u霍乱霍乱等肠道传染病采样要求等肠道传染病采样要求u感染性物质的包装运送要求感染性物质的包装运送要求u存在的问题和对策存在的问题和对策 主主 要要 内内 容容第1页/共39页 标本是进行一切实验室检测的基础；标本是进行一切实验室检测的基础；所有实验室检测的结果都依赖于所得所有实验室检测的结果都依赖于所得到标本的质量；到标本的质量；直接关系到实验室检测的准确性与效直接关系到实验室检测的准确性与效率；率；标本采集和运送的重要性标本采集和运送的重要性第2页/共39页 影响到处置事件的评估与策略制定。l疫情处理：疫情的判断与防控策略的制定疫情处理：疫情的判
2、断与防控策略的制定l监测与普查：流行状况的评估监测与普查：流行状况的评估l病例诊断：治疗方案制定、病人预后、疾病例诊断：治疗方案制定、病人预后、疾病负担病负担 标本采集和运送的重要性标本采集和运送的重要性第3页/共39页l 标本采集的好坏，对整个检验工作的质量影响很大；l粪便或呕吐物等标本的采集应争取在发病早期、服用抗菌药物之前；l尽快送到检验室检验；l在全部采样检验过程中，接触样本人员要严格执行生物安全操作的有关规定。标本的采集、送检的原则第4页/共39页标本的采集、送检和保存注意项血液标本处理：血液标本处理：不同采血管要求：室温孵育、及时动；不同采血管要求：室温孵育、及时动；不明原因疾病标
3、本不明原因疾病标本：无菌、无抗生素保存管；：无菌、无抗生素保存管；用于细菌检测：避免盲目增菌、转运培养基用于细菌检测：避免盲目增菌、转运培养基 （污染标本：切忌无选择性增菌）（污染标本：切忌无选择性增菌）用于病毒检测：病毒保存液用于病毒检测：病毒保存液 保存运输温度保存运输温度 用于病毒检测：低温（用于病毒检测：低温（-20）用于细菌检测：用于细菌检测：4或室温（弧菌），禁零下。或室温（弧菌），禁零下。第5页/共39页腹泻病人必须在肠道门诊内由医护人员采集粪便腹泻病人必须在肠道门诊内由医护人员采集粪便标本，做好标本登记，实行有泻必采、有样必送。标本，做好标本登记，实行有泻必采、有样必送。医院微
4、生物检验室设立霍乱弧菌检测实验室或专医院微生物检验室设立霍乱弧菌检测实验室或专区，开展霍乱弧菌检测。区，开展霍乱弧菌检测。分离的霍乱弧菌要速送到属地疾控中心进行复核分离的霍乱弧菌要速送到属地疾控中心进行复核和鉴定。和鉴定。分离的伤寒和副伤寒菌株、其它沙门氏菌、痢疾分离的伤寒和副伤寒菌株、其它沙门氏菌、痢疾杆菌和大肠杆菌和大肠O157O157等，要及时送到属地疾控中心等，要及时送到属地疾控中心复核。复核。霍乱等采样及检测要求霍乱等采样及检测要求第6页/共39页水样便的腹泻病人水样便的腹泻病人集体聚餐引起的腹泻病人集体聚餐引起的腹泻病人来自霍乱疫区的腹泻病人来自霍乱疫区的腹泻病人发现病人或带菌者的
5、自然村、居委会和单位发现病人或带菌者的自然村、居委会和单位范围内范围内要在使用抗生素以前，采集吐泻物或其污染要在使用抗生素以前，采集吐泻物或其污染的物品，按检验规程作霍乱弧菌快检，再按的物品，按检验规程作霍乱弧菌快检，再按检验规程作霍乱弧菌检验规程作霍乱弧菌培养。培养。霍乱等采样及检测要求霍乱等采样及检测要求第7页/共39页在标本采集过程中，注意使用一次性隔离服、手套、防在标本采集过程中，注意使用一次性隔离服、手套、防护口罩（以免飞溅）等防护措施护口罩（以免飞溅）等防护措施在标本采集过程中在标本采集过程中,严格采取预防措施，防止针头等锐器严格采取预防措施，防止针头等锐器刺伤（尤其是已经采集过病
6、人血液的针头）刺伤（尤其是已经采集过病人血液的针头）采样人员恰当防护，防护过度可能造成人群的恐慌，出采样人员恰当防护，防护过度可能造成人群的恐慌，出现不必要的麻烦现不必要的麻烦 生物安全防护问题第8页/共39页 霍乱霍乱标本的采集、送检和保存依据为依据为霍乱防治手册霍乱防治手册u粪便：粪便：标本的采集以病人粪便为主，水样便采取13mL，成形便采取指甲大小的粪量。直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内35cm处采取。急性期病人取水样便标本在增菌培养的同时可取其粘液絮片或用棉拭子直接接种于碱性琼脂、TCBS琼脂培养基。带菌者粪便都应接种碱性蛋白胨水增菌，放37增菌68h后，从菌膜下表层取一接种环培养物，
7、划线接种于碱性琼脂、TCBS琼脂培养基。第9页/共39页霍乱霍乱标本的采集、送检和保存采集的标本不能立即检查的，要放入碱性蛋白胨水或文腊二氏保存液或插入Cary-Blair二氏半固体保存培养基中；标本与保存液比例约为15；送检标本时应填写“标本送检单”写明姓名、地址、发病时间、采集时间、临床诊断、用药信息等；运送过程中双层包装，勿污染容器口外壁，专人运送，送检箱每次用后须做消毒处理第10页/共39页霍乱弧菌外环境标本检索样品的采集处理 （1）水样标本：取水样450ml1mol/LNaOH调PH至8.4-9.2。加浓10倍碱性蛋白胨水中，再加入1%亚碲酸钾0.5-1ml；（2）食品标本：食品 5
8、0g样品碾碎，加到PH9.2，250ml 碱性胨水中；（3）水生动物标本：贝壳类取可内组织，鱼类取腮部和肠内容物。第11页/共39页O157:H7大肠杆菌标本的采集、送检和保存l粪便标本的采集应争取在发病早期，服用抗菌药物之前并尽快送到检验室。采集腹泻病人粪便以血性水样便为主，也可以用直肠棉拭或采便管采取，肛拭标本应染有粪便。腹泻病人血性水样便标本从采集到送检不得超过24h,采集的标本应插入卡里-布莱尔（Cary-Blair）半固体保存培养基中，立即送试验室接种于培养基。培养基要定期调换，保持培养液新鲜。第12页/共39页O157:H7大肠杆菌标本的采集、送检和保存水、食品、环境检验标本：采集
9、应在24小时内送至实验室进行增菌、培养、分离；特殊样品的采集：应遵循不重复的原则。如采集苍蝇标本：可以选择公厕、酒店、垃圾场、市场、定点屠宰市场及养殖场等。生熟肉制品：可以选择市场、超市、加工厂等；特殊样品的处理：畜、禽等的生、熟肉样品尽快无菌将样品剪碎、研磨并加入增菌液中；苍蝇等样本直接研磨后加入增菌液中。第13页/共39页O157:H7大肠杆菌标本的采集、送检和保存p样品检验单应填写完整，与样品一起送实验室。必须提供与分离菌株相对应的患者的临床资料和流行病学资料；p使用免疫磁珠富集技术和山梨醇麦康琼脂或科玛嘉琼脂分离肠出血性大肠杆菌O157：H7；p按照山梨醇不发酵、O157：H7特异性血
10、清初筛、生化反应、PCR进行肠出血性大肠杆菌O157：H7的初筛和鉴定；p初筛阳性的菌落和可疑菌落应该保存下来，交上级进行分子生物学等鉴定和分型。第14页/共39页 志 贺 氏 菌标本的采集、送检和保存u以新鲜粘液新鲜粘液血便血便为主(亦可采用肛拭子取)。最好在服药前采便,取便后应及时送检验室接种培养，否则应将粪便标本或肛拭子放入带有保存液的管内，或置 Cary-Blair 运送培养基内；u送检验室培养或放置 4-8冰箱暂存，在收到送检标本后，应即刻接种培养；u 慢性痢疾患者或带菌者粪便、食品等标本,可先置有保存液或运送培养基内,取标本接种于 GN 肉汤中，在室温 25 时即有增菌作用,接种量
11、不能超出1:10。增菌时间不能超过 6 小时。第15页/共39页伤寒、副伤寒标本的采集、送检和保存血培养血培养：确诊依据，第一周阳性率可达：确诊依据，第一周阳性率可达90%，第三，第三周降为周降为3040%，第四周时常阴性。用含胆汁的培养，第四周时常阴性。用含胆汁的培养基，已用抗生素的患者可取血凝块做培养；基，已用抗生素的患者可取血凝块做培养；骨髓培养骨髓培养：阳性率高，用抗菌素后有效；：阳性率高，用抗菌素后有效；尿、粪便培养尿、粪便培养十二指肠引流液（胆汁）培养十二指肠引流液（胆汁）培养玫瑰疹的刮出物或活检切片培养玫瑰疹的刮出物或活检切片培养第16页/共39页伤寒、副伤寒标本的采集、送检和保
12、存标本采集 按不同病期采集不同种类的标本。l粪便：发病第2到3周；l尿：发病第2到3周；l血液、骨髓:发病第1到2周；l食品、水、其他标本如玫瑰疹刮取物,胆汁,媒介昆虫苍蝇类尽快采取。第17页/共39页其它其它肠道传染病样本采集肠道传染病样本采集小肠结肠炎耶尔森氏菌；空空 肠肠 弯弯 曲菌曲菌致 腹 泻 原 虫腹泻病毒亦为重要病原 轮状病毒（5岁以下儿童严重腹泻的最普遍病原，占腹泻住院儿童的2060%）杯状病、星状病毒（2%9%）肠道腺病毒（2.8%8.7%）第18页/共39页 菌株保存与移交每分离出一株细菌，即建立菌株保存档案，详细记录菌株的来源、分离的时间和地点及取材病人的基本信息和流行病
13、学特征；同时准备2支半固体，每管加3.5ml半固体；用接种针挑取菌落接种半固体，37培养18小时。管内加入石蜡使其隔绝空气，室温或4避光保存。一管保存在当地实验室，另一管菌株附档案逐级上送疾病预防控制中心复核；上送菌株经初步鉴定后，填写菌株上送登记表及送检单，按照感染性样本运送要求进行，每次移交均填写交接记录。基层对首发病例分离的霍乱菌株需送上一级实验室做进一步鉴定或复查，建议常温下保存送检,不主张冷(冻)藏送检霍乱菌种或样品。第19页/共39页感染性物质的包装运送要求感染性物质的包装运送要求第20页/共39页高致病性病原微生物标本运输流程第21页/共39页感染性物质包装分类国际民航组织危险物
14、品航空安全运输技术细则中将感染性物质分为A、B两类。名录要求：通过其他交通工 具运输的可参照以上标准包装禁止使用公共电/汽车和城市铁路(地铁/轻轨)运输病原微生物菌(毒)种或样本！第22页/共39页感染性物质包装分类第23页/共39页感染性物质包装分类A类：对健康人或动物造成永久性残疾或致命疾病的感染性物质。包装：最耐用的三层包装，并附上完整的危险品申报单。培训运输人员。第24页/共39页感染性物质包装分类航空运输A类包装（UN号2814）第25页/共39页感染性物质包装分类B类：不符合列入A类标准的感染性物质 运输专用名称为诊断标本或临床标本或生命物质B类。包装：三层包装,不需要危险品申报单
15、。第26页/共39页感染性物质包装分类航空运输B类包装（UN号3373第27页/共39页A类、B类包装的共同点三层包装 第一层包装要求用保存标本的原始容器（外螺旋管），需将盖口密封。第二层包装可以采用专用二级包装桶或耐高压塑料袋。第三层包装是将密封好的第二层包装放入运输包装盒，运输包装盒要求有保持冷藏低温功能。主容器和辅助包装，必须能承受在-40至+55温度范围内95kPa的内部压力而无渗漏。完整的包装必须能通过危险物品航空安全运输技术细则规定的跌落试验，跌落高度不低于1.2m。外包装标识、联系人、地址清楚第28页/共39页A类、B类包装的区别 A类包装 B类包装 定义 对人或动物致死或永久致
16、残 不符合列入A类标准的感染性物质 运输专用名称 感染性物质，可感染人的 诊断标本或临床标本或生命物质B类 UN编号 UN2814 UN3373 运输对象 名录中规定的第一类、第二类病原微生物及其样本；第三类中包装分类为A类的病原微生物 名录中规定的第三类、第四类病原微生物及其样本 UN专用标记需要不需要主容器 防水，防穿刺，防泄漏 防破损、防泄漏 次级容器 防水，防穿刺，防泄漏 防破损、防泄漏 外包装 最小边长100mm 至少有一个表面 100mm100mm 危险品申报单 需要 不需要 标识 UN3373客机单包装主容器最大运输量 液体50mL，固体50g 液体1L，固体4kg 第29页/共
17、39页感染性物质运送时应随身携带生物危害物质溢出紧急处理箱 第30页/共39页标本包装系统要求 容器材料标识密封无菌三防两耐生物危险警告用语提示用语放置方向高/低温-4055-4055（液氮-196-196）高压（95kPa95kPa）水破损泄漏必须在符合生物安全规定的场所中进行包装！第31页/共39页单位内部感染性物质运送要求A类包单位内部不同建筑物间感染性物质运送应使用两层包装系统。（如：病房与病房之间、采样点到实验室以及大楼内部的样品转移第32页/共39页11年工作中年工作中存在的主要问题存在的主要问题 和今后工作对策和今后工作对策第33页/共39页11年工作中的主要问题年工作中的主要问
18、题 腹泻病检测工作不平衡腹泻病检测工作不平衡缺少部分检验工作必备的诊断血清、培养基，疟疾镜检缺少部分检验工作必备的诊断血清、培养基，疟疾镜检设备不全，血片抽检及保留记录不完整；设备不全，血片抽检及保留记录不完整；部分医疗卫生单位实验室腹泻病检测工作薄弱；部分医疗卫生单位实验室腹泻病检测工作薄弱；痢疾菌株的分离、上送部分单位重视程度还要加强，有痢疾菌株的分离、上送部分单位重视程度还要加强，有一株多传现象；一株多传现象；辖区所抽检医疗单位部分存在检验登记不全，辖区所抽检医疗单位部分存在检验登记不全，霍乱快诊霍乱快诊率、培养率未达标，率、培养率未达标，痢疾杆菌分离培养率低等；痢疾杆菌分离培养率低等；
19、食源性疾病样本相关诊治大夫缺乏及时留存意识；食源性疾病样本相关诊治大夫缺乏及时留存意识；部分乡镇医院的腹泻病检测工作还须规范。部分乡镇医院的腹泻病检测工作还须规范。第34页/共39页2012年工作中的问题年工作中的问题-对对策策 领导重视，增强责任心，进一步加强实验室自身能力建领导重视，增强责任心，进一步加强实验室自身能力建设：设：人员培养管理、实验室设备、实验室耗材运行人员培养管理、实验室设备、实验室耗材运行支持、项目建设等；支持、项目建设等；对辖区进行有效培训，按照工作意见要求跟踪检查督导，对辖区进行有效培训，按照工作意见要求跟踪检查督导，实验室应全程参与；实验室应全程参与；为辖区医疗单位
20、作好技术支持，保持有效的沟通，建立为辖区医疗单位作好技术支持，保持有效的沟通，建立示范单位，促进其他单位整体检测工作的提升；示范单位，促进其他单位整体检测工作的提升；规范培训、抽查、督导和检测原始记录。规范培训、抽查、督导和检测原始记录。第35页/共39页2012年工作要求年工作要求 加强培训，认真学习相关法规、标准：加强培训，认真学习相关法规、标准：实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求GB 19489-2004病原微生物实验室生物安全管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定理
21、规定人间传染的病原微生物名录人间传染的病原微生物名录加强微生物实验室规范化建设：加强微生物实验室规范化建设：根据卫办疾控发根据卫办疾控发2004108号号省、地、县级疾病预防控制中省、地、县级疾病预防控制中心实验室检验能力和设备装备标准心实验室检验能力和设备装备标准，-微生物鉴定仪器设备；样品的采集、运输、保藏设备；提高微生物鉴定仪器设备；样品的采集、运输、保藏设备；提高微生物鉴定仪器设备；样品的采集、运输、保藏设备；提高微生物鉴定仪器设备；样品的采集、运输、保藏设备；提高实验室人员检测技能；加强实验室检测质量控制；逐渐完善应实验室人员检测技能；加强实验室检测质量控制；逐渐完善应实验室人员检测
22、技能；加强实验室检测质量控制；逐渐完善应实验室人员检测技能；加强实验室检测质量控制；逐渐完善应急检测项目储备急检测项目储备急检测项目储备急检测项目储备 第36页/共39页 2012年工作要求年工作要求 必须建立至少必须建立至少1间符合标准的二级生物安全实验室；间符合标准的二级生物安全实验室；-按照按照2004年年11月月5颁布的中华人民共和国国务院第颁布的中华人民共和国国务院第424号号病原微生物实验室生物安全管病原微生物实验室生物安全管理条例理条例规定，要求各区县并进行生物安全实验室的使用和生物安全知规定，要求各区县并进行生物安全实验室的使用和生物安全知识的培训。识的培训。加强分离菌（毒）及
23、传染性样品管理：按照相关规定对实验室质控菌加强分离菌（毒）及传染性样品管理：按照相关规定对实验室质控菌种和分离样本、或菌种进行保存，并将分离菌种及时按要求逐级上送。种和分离样本、或菌种进行保存，并将分离菌种及时按要求逐级上送。结合本辖区往年传染病发生情况，积极主动开展常见传染病病菌和食结合本辖区往年传染病发生情况，积极主动开展常见传染病病菌和食源性疾病病原体的检测和分离工作。源性疾病病原体的检测和分离工作。加强对辖区医疗单位实验室检测技术指导和工作督导加强对辖区医疗单位实验室检测技术指导和工作督导县及县级以上医院（包括同级别的企业、民营医院）县及县级以上医院（包括同级别的企业、民营医院）配备就诊病人登记表、采样用品和样品保存液或增菌液等。第37页/共39页谢谢 谢谢！；密码jnwsws第38页/共39页感谢您的观看。感谢您的观看。第39页/共39页