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1、菌种生产杂菌污染的原因分析 1灭菌不彻底 这一原因特点是导致的污染率高、发生早，出现污染的部位不规则培养基上中下均可出现杂菌菌落。这类污染常在接种培养 35 天后发生。一般杂菌的菌丝体与抱子经过高压 1211270C 保持 1.52.5h 均能杀 死。消毒不彻底引起的污染往往是由于没达到规定的温度与时间，或者是高压灭菌时冷空气没放尽所致。另 外，装锅时摆放太紧密，通气性不好，灭菌锅发生漏气，温度、压力达不到所需数值也可导致杂菌产生。2.培养料问题 拌料时主料与辅料未充分拌匀；水分含量不足或培养料成团未散开，吃水不透造成灭菌死角；或者培养 料不新鲜，本身带杂。3.母种带杂 菌种本身不纯。无论是母
2、种、原种还是栽培种，都要使用纯种接种培养。如果用于繁殖扩大的菌种本身 不纯，那么制备的新菌种也必然受到污染。污染常常表现在接种菌块之中或周围，呈小批量的规模，如果此 时不能及时发现，危害将进一步加大。有时生产的一批菌种中。集中在一起的菌种都出现污染，且都发生在 接种块周围则说明菌种带杂。因此，在生产母种时，要经常检查，对污染物及时清理，防止扩大时进一步污 染。4.接种污染 这类污染的特点是杂菌菌落先从菌种块上长出.杂茵的种类一致，通常成批量发生，且出现早，接种 3-5 天内就可肉眼鉴别。接种室或操作台消毒不彻底.接种时操作不严格，将杂菌抱子带入瓶中，这种污染常分 散出现于菌种表面。如一支被污染
3、的母种会造成扩接后的 46 瓶原种全部污染：一瓶被污染的原种（有时肉眼 难以发现）造成扩大后的 3050 瓶栽培种的污染。这类污染要靠严格检查菌种质量来克服，不但使用前要认真 检查.而且在培养全过程中要连续检查和观察.确保菌种纯度。5.接种操作污染 这类污染一般发生在接种口处.较接种物带菌和火菌不彻底造成的污染发生晚.一般接种后 7d 左右出现。其污染源主要是：接种室（箱）空气消毒不彻底；菌种瓶（袋）冷却时附在表面的杂菌；接种人员自身洁净度不良：违反接种操作规程等。操作不规范造成的菌种污染，杂菌不仅在接种块周围，还常出现在其他料面的表面，呈花花点点状，不一定集中一处，且无规律。这些操作技术包括
4、火菌操作、火菌后无菌处理、接种过程无菌 操作、接种后的培养条件控制等。需注意以下技术环节：5.1 不使棉塞打湿火菌码放时.棉塞切勿贴触锅壁；火菌结束后要自然冷却，不可强制冷却；当冷却至 一定程度后微开锅门.让锅内的余热把棉塞上的水气蒸发；火菌时，可同时火菌一些棉塞，留接种时换下打 湿的棉塞。52 洁净冷却灭菌后的菌种瓶（袋）不能直接放在有尘土的地面上冷却：冷却窒使用前可用紫外线灯和喷雾 相结合进行空气消毒。53 严格消毒接种室（箱）使用前须严格消毒；接种操作人员须在缓冲间穿戴专用衣帽（定期洗涤）；接种前要消毒双手。54 科学操作接种前做好一切准备工作。一次接种不间断。一气呵成：接种过程要少搬动
5、、少说话、小 动作，以减少空气震动和流动；接菌室（箱）内绝对无菌的只有酒精灯火焰周围很小的范围 接种操作应尽量在 这个小区内完成；拔棉塞时，不可用力直线上拔而应旋转式缓劲拔出，避免外界空气突然进入而带入杂菌；接种室（箱）每次的接种量不宜过大；接种时接种工具一旦触碰了非无菌物品，如种瓶外壁、操作台面等不 要再用来取种须重新火焰灼烧灭菌。6设备设施简陋引起灭茵后无菌状态的改变 本来灭菌后的菌种瓶（袋）已达无菌状态 但灭菌后的冷却和接种环境达不到洁净无菌 生产设备和生产环 节分散又往往忽略场地的大环境卫生，导致了污染。冷却过程中随着料温的降低，瓶（袋）内气压降低杂 菌孢子随其内外气压的动态平衡向瓶（
6、袋）内移动、定植。瓶袋外附有较多的灰尘（附着杂菌孢子）。成为接种操 作污染的污染源。这种类型接种后污染率较低随着培养时间的延长污染率逐渐增高。通常大量发生在接 种10d 以后甚至培养基表面已长满菌丝后，才陆续出现污染。7培养室及周围环境差 培养室温度太高，培养室相对湿度太大，超过 70以上利于杂菌滋生；培养室通气不良，有利于某些厌 氧菌发生；培养室本身不干净，消毒不严，空气中本身带杂。接种后污染率低，随着时间推移污染率逐渐增 高，这就是由培养环境造成的污染。如培养环境过于潮湿、污染源严重污染培养室、菌瓶棉塞潮湿、苗袋破 裂、虫鼠危害等。综合控制措施 1灭菌要彻底 高压灭菌上压前放尽冷空气，上压
7、后保持规定的压力与时间，高压灭菌应在锅内温度上升到 121C后再保 持 1.52.5h。高压灭菌，锅内瓶放置时应留一定的空隙，利于空气流动。灭菌彻底高压灭菌以 147.1 千帕,保持 2 小时，常压灭菌要求 4 小时内温度达到 100C后，持续不低于 1618 小时的灭菌时间，中间不降温。2.灭菌容量和堆放方式 用蒸汽锅炉送入蒸汽的高压灭菌锅.要做到锅炉汽化量与锅体容积相匹配，自带蒸汽发生器的燃煤、燃 油或电热的高压灭菌锅.以每次容量 200500 瓶（750IIIL）为宜.常压灭菌灶以每次容量不超过 1000 瓶（750mL）为宜。容量增大。灭菌时间要适当延长。锅内被灭菌物品的堆放形式对灭菌
8、效果影响显著.特别是以塑料袋 为容器时这种影响更大。因为塑料袋受热后变软如果装料不紧，叠压堆放，极易把升温前留有的间隙充 满.不利于蒸汽的流通和升温，影响灭菌效果。塑料袋摆放时.应以叠放 34 层为度.不可过量叠压。锅大 时要使用搁板。有条件的最好使用铁筐装筐灭菌。3.精制培养料 用于制作原种的培养料原料要新鲜，成团、结块的料要打碎，难吸水的培养料应先用足够的水拌湿，然 后充分拌匀。培养料配制后要尽快装袋，间隔时间越长，越引起易引起杂菌污染。培养料中拌入 0.1-0.2 的多菌灵可湿性粉剂。可抑制木霉和青霉的生长。用高压灭菌，拌料后要及时装瓶（袋），上锅灭菌，搁置时间 不宜超过 10h。4.培
9、养基的保管 接完种的培养基要及时放入清洁的、温度合理的培养室中。培养室最好紧靠接种室。这样能尽量减少再 污染的机会，使菌丝能迅速恢复生长。培养室的温度要因食用菌种类不同而不同，一般情况下，茶树菇和鸡 腿菇的最适宜培养温度均为20 C-28 C、滑菇为 18-2（）C、黑木耳为 25-28r。培养 5-7 天后，要及时检查，挑出 已经感染的菌种，轻拿轻放到远离菌种厂的指定位置，以防止杂菌弹射孢子，污染培养室环境。5.选择优良母种 严格挑选用于扩大生产的菌种，原料要求不霉烂变质。任何疑点都不可姑息.确保接种物的纯度。母种 应尽量采用生活力强、菌龄适宜、抗逆性强的优良菌株。绝对不能用病虫害侵入的菌种
10、。菌种纯化菌种从母 种到原种，再到栽培种的繁殖过程，都要严格执行无菌操作规程；认真检查质量，菌种纯度要求 100，方可 使用。6.接种时严格操作规程 提高从业人员技术素质，规范操作：生产场地要定期清洁、消毒.保持大环境的整洁状态。接种操作前，用 75的酒精棉球擦手.接种工具也要严格消毒，在火焰上操作要熟练、敏捷。7.无菌操作 严格操作接种室、接种帐、接种工具、接种人员的手臂等都要严格消毒。接种动作要快，达到快解 袋、快接种、快扎口。一批菌袋未接完，人员不要进出接种室。每个操作环节都要严格按无菌操作规程 进行，进入接种室后要少走动、少说话。接种环境清洁，接种室（箱）要密封和严格消毒。接种用具保持
11、清洁，用前消毒处理。接种室消毒应严格，并加装紫外线杀菌灯。科学管理发菌室干净清洁，做好消毒杀虫。8.降低培养室的空气湿度 空气湿度和杂菌的发生有密切的关系。空气湿度大，杂菌感染率高；湿度低，感染率也低。当其他条件相同时，培养室 空气湿度 80%左右时，杂菌感染率为 5%，当空气湿度增加到 90%H，感染率就上升到 15%。它们之间有相互关联又相互制 约的关系。第一，空气湿度高，空气中的各种杂菌孢子就容易萌发生长，不断繁殖，传播。而菌种生产上用的无棉盖，在空 气湿度较高的条件下，可以迅速通过无棉盖向瓶内伸展造成感染。第二，环境中杂菌孢子增加后，接种时杂菌感染的机会也天气多雨潮湿，更要加大通风，一
12、定做到温度、湿度、空气三者的相互关系。2 42 注意环境卫生降低杂菌孢子密度，培 养室及工作场所周围必须保持清洁，保持地面平整，干燥。室内一旦发现感染杂菌的瓶子应及时清除，定期进行喷药灭菌，以降低杂菌密度。尤其是高温多雨的季节更需注意。喷药次数一般是一周喷 1-2 次，可以喷来苏尔，或甲醛，或石炭酸。最好 是交替使用。9环境清洁干燥 净化环境严格按照无公害环境条件卫生消毒处理；培养室、冷却室，应与原料仓库、菇房、配料场保持 一定距离；周围环境应尽量清除污染源。如畜舍禽棚、化粪池、污水坑、垃圾场、废料堆等；并做好日常的 卫生清洁和定期消毒。工作结束后，立即将台面收拾干净，不留残物。培养室要通风干
13、燥，启用前清扫、消毒。培养菌种期间，每天要适当通风。当空气湿度大于 70%H 寸，要用吸湿机、空调机或用生130 石灰、木炭等降低室内湿度。定 期用杀虫或杀菌药剂消毒，同时也应注意防鼠。10药剂防治 菌床培养料上或菌袋两端发生少量绿霉时，用 0.1%甲基托布津、0.1%0.2%代森锌、0.1%0.2%多菌灵或 浓石灰水上清液涂抹或喷洒被害部位，可防止分生孢子扩散蔓延。若菌床或菌袋出现绿霉已深入到料内，应 及时用 0.2%多菌灵液浸纱布盖住，然后轻轻挖掉已污染的料块，在挖除后的料面喷 0.2%多菌灵或其他杀菌剂，也可涂抹浓石灰乳，再用新鲜料或菌种填平，可控制其发展。对于污染严重的菌袋可深埋处理。
14、11定期检查 严格按照菌种生产的工艺技术流程进行选料、配料、分装、灭菌、冷却、接种、培养和质量检测。接种后 5-7d 检查 1 次。污染杂菌的，要及时拣出处理，应 ib,L,放在盘内，盖严拿出室外深埋或烧掉，并且分析原因，加以控制；搬动培养瓶（袋）要 小心轻放；预防老鼠、蟑螂等为害带入杂菌。及时处理一旦发现杂菌污染，及时搬离培养室，受污染的菌种，无论污染面大 小，一律淘汰，不得保留。总之，食用菌原种污染是食用菌生产中的一项严重灾害，它将直接影响食用菌的产量和质量，造 成严重的经济损失。因此，在原种生产过程中首先选好母种，其次保证原料无霉变，再次是严把操作关保证严格灭菌，最后 环境要清洁无污染源
15、。只有如此。才能生产出优良的食用菌原种。食用菌生产中的注意事项 一、菌种制作 食用菌的菌种一般分为母种、原种和栽培种三级。在各级菌种的制作中，防止杂菌污染都是绝对不能忽 视的，因为如果杂菌污染了菌种，就一定会带来生产栽培中的大面积污染。因此在制作菌种时，一定要严格 按照无菌操作程序进行。基本步骤是：（1）先将接种室清理干净，再将接种中要用到的所有物品放入其中，按每立方米用甲醛 10 毫升和高锰酸钾 7 克的用量，将二者混合熏蒸灭菌。（2）接种人要身穿清洁衣服，最 好戴上灭菌的套袖，并将手用消毒酒精棉球擦干净。（3）接种时要注意无菌操作。（4）接种后的材料要放 在清洁的地方或保温箱中培养。当然，
16、制作菌种的材料必须事先彻底灭菌。如果注意了这些环节，一般可以 防止菌种污染。最容易产生污染的菌种是栽培种，究其原因主要是操作者思想上不重视，往往认为是最后一级菌种了，用不着太严格，因此操作时比较马虎，或者用生料制作菌种。生料制作菌种，有时看起来是可行的，但存在 着潜在污染危险，因为生料中有大量杂菌，即便是用了化学药品杀菌，也不大可能将杂菌全部杀灭。残存的 杂菌伴随着菌种一起生长，虽然暂时显现不出来，但当播种之后，杂菌就可能大量发生，从而造成栽培料上 杂菌滋生甚至蔓延。因此，为防患于未然，最好不要用生料制作菌种，而且要严格按无菌操作进行。一旦发现菌种污染了杂菌，就不要再进行扩种或栽培，要立即将其
17、销毁，以免混在好的菌种中被误用。如果除其之外再也没有菌种了，那就要将其纯化之后再用。菌种污染杂菌的情况，除了操作不严格外，有时发生在接种箱的制作上。有人在制作接种箱时只注意了 密封，而没有注意通气。当接种量大时，酒精灯火焰将箱内氧气消耗尽而熄灭，不能保证无菌操作顺利进行，万一箱内灭菌不彻底，或操作过程中带进杂菌，或甚至有人为了让空气进入箱内而打开箱门，都有可能造成 菌种污染。因此，在制作接种箱时，既要考虑密封，也要考虑留下必要的、能防止杂菌进入的通气孔。通气孔一般设在离操作者较远的箱侧下部，直径 510 厘米，口上固定 4 层纱布，口外设推拉门，箱 内灭菌时将门关上，操作时将推拉门打开，即能使
18、箱内进入空气，又依靠纱布过滤空气中的杂菌。如果箱体 较大，可在不同位置增加通气孔。二、播种栽培 食用菌生产中的播种与一般农作物的播种不同，也必须象菌种制作那样遵循无菌操作的原则，其第一步 就是要将栽培料灭菌。灭菌方法大致有以下几种类型。（1）化学灭菌法 这是一种将能杀灭杂菌的化学药品拌入栽培料的方法。常用的化学药品有灭菌灵、高 锰酸钾、甲隆等，常用量在 1%左右，这要根据培养料的性质和药品的纯度确定，用量太低起不到杀菌作用，用量太高则残毒太重，将可能影响食用菌的生长。用化学药品杀菌时须注意药品的有效期，过期药品药效降 低或消失，应废弃不用。（2）生物灭菌法 这主要指用发酵法杀灭培养料中的杂菌。
19、具体操作是：将培养料各成分拌匀，含水量 50%至 60%，堆成圆堆形，为操作方便，每堆 50 千克左右，间隔打孔，外覆薄膜。堆温达 60 C 后翻堆。如此重复两次后，即可铺开播种。这主要是利用培养料中天然存在的微生物生长，发酵产热，造成高温，杀 死其中的大部分不耐热的微生物和害虫及其卵，或者抑制某些有害菌，以创造有利于食用菌生长的环境条件。以上两种灭菌方法都是生料栽培时所用，可以杀死部分杂菌而不大可能灭菌彻底，因此残存的杂菌可能 伴随食用菌一起生长，在近期表现不出来，而当食用菌长势弱时可能显示出来。因此用生料栽培时一定要创 造适合食用菌生长的条件，用食用菌的生长优势抑制杂菌生长。要取得彻底杀灭
20、培养料中杂菌的效果，最好采用熟料栽培，用足够的温度灭菌，即高温灭菌。高温灭菌 又分为常压灭菌法和高压灭菌法。(3)常压灭菌法 即在常压下保持 100 C杀灭杂菌，具体方法可有很多，基本形式是用油桶改造或用 砖砌成大的锅体，内设支架或筐架装料，用保温材料做锅盖，锅体下置铁锅盛水，加热后使锅内温度上升至 100 C,持续 8小时，并停火后闷一夜。如果锅体建造牢固，密封性好，加热排除冷空气后，可使锅内压力 有所上升，以至使锅内温度高于 100 C,从而可使加热时间缩短。(4)高压灭菌法 是用特制的、能耐高压的锅体进行的，锅内水蒸汽的温度随压力升高而上升，温度可 达 125 C。高压灭菌锅一般有两种：
21、一种是手提式高压蒸汽灭菌锅，可灭菌少量培养料，可用电加热，也可 用炉火加热；一种是卧式高压锅，容量较大，用电加热。灭菌少量培养料时，125 C维持 3040 分钟即可;灭菌大量培养料时，须适当延长灭菌时间，一般用 1.52 小时。这种灭菌方法与常压灭菌法相比，可以大 大缩短灭菌时间，但一次性投资比较高，而且容积有限，不可能象某些自造的常压灭菌锅那样，一次可以灭 菌很多培养料，因此，高压灭菌法虽很方便，但也有一定的局限性。在高温灭菌法中，如果操作不当也可能造成污染。污染主要来自以下几方面：灭菌锅内物品堆积过于拥挤，致使锅内热蒸汽流动不畅，留下灭菌死角。灭菌温度虽然达到了，但是灭菌时间不够长。高压
22、锅在扣加压力阀之前没有充分放出冷空气。灭菌完毕后取出物品时，没有注意检查包装是否完好。如果发现破损，要及时用灭过菌的包装材料在 锅内就地包装；如果不能再包装，则暂时不用，待下次灭菌时另行包装灭菌。三、生产管理 食用菌栽培后的管理从一开始就需注意防污染。栽培场地要清洁，最好经过灭菌处理。既要注意保温保 湿，又要注意通风换气。特别是在高温季节，需采取降温措施，加强通风。如果高温高湿又通风不足，极易 造成杂菌滋生蔓延。清除杂菌时，一定要注意彻底；二是注意不使之污染其它地方，包括栽培场地的周围环 境。有些种菇户栽培场地内非常清洁，但场地外的环境却非常肮脏，尤其是清理出的杂菌袋或杂菌块随地乱 扔，造成环境的严重污染。有的种菇户反映，种菇头一年收成好，第二年较差，第三年更差，三年以后污染 严重，不能再种，即使把菇房多次消毒也不行。这种情况很可能是因为环境中杂菌太多造成的。因此，在生 产管理中，一方面要管好菌袋、菌块、菇床、菇房，另一方面也要同时管好周围的环境。