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1、通脉颗粒多少钱一盒 益心通脉胶囊对糖尿病性冠心病大鼠缺血心肌肝细胞生长因子的影响通脉颗粒多少钱一盒 益心通脉胶囊对糖尿病性冠心病大鼠缺血心肌肝细胞生长因子的影响 关键词 益心通脉胶囊 糖尿病性冠心病 缺血心肌肝细胞生长因子 实验研究 糖尿病冠心病是糖尿病慢性大血管并发症之一，也是糖尿病致死的最主要原因，其病死率在2型糖尿病中达50，在1型糖尿病中高达75，比非糖尿病者高24倍1。我们根据多年的临床经验选用玄参、黄芪等组成了益心通脉胶囊，用于气阴两虚夹痰瘀型糖尿病性冠心病。为探讨益心通脉胶囊对糖尿病性冠心病大鼠心肌组织肝细胞生长因子（HGF）阳性表达的影响，我们进行了如下动物实验研究。 1 材料
2、与方法 11 实验动物：Wistar大鼠，体重200250g，黑龙江中医药大学动物实验中心提供，动物合格证号为：黑动字第P00xxxx号。 12 药剂与试剂：益心通脉胶囊（由玄参、黄芪、丹参等中药组成），由黑龙江中医药大学中药制剂室提供。复方丹参滴丸，天津天士力集团生产，批号：xxxx；格列吡嗪，珠海联邦制药有限公司分厂生产，批号：000419；垂体后叶素，上海生物药厂生产，批号：xxxx，规格为10U/ml10支；四氧嘧啶，美国Sigma公司；HGF原位杂交检测试剂盒，武汉博士德生物工程公司。 13 实验方法：分如下几步进行。 131 造模及分组：Wistar大鼠，体重200250g，共60
3、只，一次腹腔注射四氧嘧啶200mg/kg，3天后大鼠空腹禁食（不禁水）8h测血糖999mol/L为造模成功。取20只正常Wistar大鼠，10只作为正常空白组，10只作为丹参滴丸组。将造模成功的大鼠随机分为5组：分别为模型组、美吡达组、益心通脉胶囊高剂量组、益心通脉胶囊中剂量组、益心通脉胶囊低剂量组。每组各10只。 132 给药剂量及方法：灌胃法给药，每日1次，连续4周，给药剂量根据人临床剂量按动物体表面积换算。益心通脉胶囊高剂量组1296g/kgd，益心通脉胶囊中剂量组0648g/kgd，益心通脉胶囊低剂量组0324g/kgd；美吡达036g/kgd；丹参滴丸135g/kgd，正常组和模型组
4、每日灌胃等容量蒸馏水。 133 取材方法：于实验结束时，禁食不禁水12小时后，取出心脏，立即投入固定液中固定。固定液为4多聚甲醛/01M PBS（pH70pH76），含有1/1000DEPC。固定1小时。 134 检测方法：HGF原位杂交检测，严格按试剂盒说明操作，具体步骤如下：常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度68m。玻片的处理：采用多聚赖氨酸（POLY-L-LYSINE）裱于处理过的载玻片上，置60烤箱中烤8小时。石蜡切片经常规脱蜡至水。3H2O2室温处理10分钟以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗3次。暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶室温消化30分钟。胃蛋白酶的消化对原
5、位杂交的结果是至关重要的。充分的消化可以使mRNA得到暴露，从而加强杂交信号，而过度的消化又使切片明显减薄乃至消失，从而失去杂交信号。在实验中，通过反复比较，我们认为30分钟是最佳消化时间。05M PBS洗3次5分钟。蒸馏水洗1次。后固定：切片入1多聚甲醛/01M PBS（pH72pH76）含有1/1000DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗3次。湿盒的准备：干的杂交盒底部加20甘油20ml以保持湿度。按每张切片20l加预杂交液，恒温箱384小时，吸取多余液体，不洗。杂交：按每张切片201HGF寡核苷酸探针杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38杂交过夜。
6、杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37水温的2SSC洗涤5分钟2次；37水温的05SSC洗涤15分钟1次；37水温的2SSC洗涤15分钟2次。滴加封闭液：3730分钟。甩去多余液体，不洗。11滴加生物素化鼠抗地高辛：室温120分钟。05M PBS洗5分钟4次。12滴加SABC：3720分钟。05M PBS洗5分钟3次。13滴加生物素化过氧化物酶：室温20分钟。05M PBS洗5分钟4次。14 DAB显色：显色2030分钟。显微镜下控制显色，充分水洗。15苏木素复染，充分水洗。16酒精脱水，二甲苯透明，封片。 135 统计分析：采用半定量法进行判定，以半定量计分：1、2、3、4分别对应-、+、+、+。每张
7、切片至少观察3个视野。 2 结果 将原位杂交结果进行定量分析，结果表明正常对照组和模型组的阳性率分别为20和857，两组间差异非常显著（P 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 2Bussolino F，Direnzo MF，Ziche M，et al.Hepatocyte growth factor is a potent angiogenic factor which stimulates endothelial cell molitility and growthJ.J Cell Biol，1992，119（3）：629-641. 3Morishita R，Hig
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