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1、.1 western 转膜条件 蛋白来源：RAW264.7 总蛋白 蛋白名称可：一些转录因子 蛋白分子量：4070 KD WB 用膜类型、孔径：0.45 NC 转膜方式恒压、恒流：湿转 恒流 400 mA 转膜时间：6090 min PS.其实吧，以我的经历来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是则重要，曾经因为失误，转了 15 min 就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。蛋白来源：皮细胞 总蛋白 蛋白名称可：occludin&AKT 蛋白分子量：65 KD&56 KD WB 用膜类型、孔径：0.45 PVDF 转膜方式恒压、恒流：湿转 恒压 100
2、V 转膜时间：6070 min 设备名字是“Bio-Rad mini。蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织 总蛋白和核蛋白 蛋白名称可：蛋白分子量：65 KD&55 KD WB 用膜类型、孔径：PVDF预先用甲醇处理 转膜方式恒压、恒流：半干转 恒压 12 V 转膜时间：30-40 min 设备：“Bio-Rad mini 建议：最开场做过湿转过夜的那种，太费事费时，效果也不如半干转。蛋白来源：293T 细胞 蛋白名称可：蛋白分子量：95 KD&35 KD WB 用膜类型、孔径：PVDF 转膜方式恒压、恒流：湿转 恒压 90 V-110 V，控制电流不要超过 300 mA。转膜时间：70 m
3、in 蛋白来源：肿瘤手术标本 蛋白名称可：转录因子 蛋白分子量：33 KDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 转膜方式恒压、恒流：350 mA 恒流 转膜时间：150 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 说明：一样条件曾用于数个 30-70 KDa 的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。蛋白来源：成纤维细胞.1 蛋白名称可：smad3 蛋白分子量：54 KDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 转膜方式恒压、恒流：350 mA 恒流 转膜时间：150 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：
4、胰腺癌细胞 蛋白名称可：蛋白分子量：16 KDa and 42 KDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 转膜方式恒压、恒流：120 V 恒压 转膜时间：90 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞 蛋白名称可：蛋白分子量：72 KD，42 KD 和 22 KD WB 用膜类型、孔径：一般的 PVDF 膜 转膜方式恒压、恒流：湿转，恒流一膜 0.26 A，两膜 0.3 A。转膜时间：90 min 设备：“Bio-Rad mini 建议：转膜缓冲液最多用 3 次，最好现用现配，我们用的没有加 SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转
5、的时候一定要把治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。蛋白来源：大鼠 PBMC 蛋白名称可：蛋白分子量：55 KD WB 用膜类型、孔径：0.22 的 PVDF 膜 转膜方式恒流：湿转 转膜时间：60-90 min 设备：“Bio-Rad mini 建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了 其它按照常规就好了 其实 0.22 的膜一般不怕转过头 以我们的经历，转膜时间、电压其实也有很大围的调整，并不是非要固定于哪一个最适宜，曾经做过 一膜转，17 KD 的和 170 KD 的，按照 170 KD 的条件，17 KD的转膜也很好的。蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系 蛋白名
6、称可：蛋白分子量：大于 250 kD WB 用膜类型、孔径：millipore PVDF 膜 0.45 um 转膜方式恒压、恒流：湿转，恒流 0.3A。转膜时间：180min 设备：“Bio-Rad 建议：电转保持电压在 70 V 以上，保持低温，如果电压低过 70 就需要换缓冲液了。蛋白来源：白血病细胞.1 蛋白名称可：蛋白分子量：28 KD WB 用膜类型、孔径：0.45 的 NC 膜 转膜方式恒流：湿转，90 min，0.25 A 设备：“Bio-Rad 建议：海绵厚度要适宜，一次转磨用的海绵太薄，导致治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将
7、胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。蛋白来源：肿瘤细胞 蛋白名称可：磷酸化蛋白 蛋白分子量：10-200 KDa WB 用膜类型、孔径：millipore PVDF 膜 0.45 um 转膜方式恒压、恒流：120 v 恒压 转膜时间：120 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 建议：转膜缓冲液只用 2 次，根本都转上，5%BSA 封闭，减少背景。蛋白来源：胰腺 细胞 蛋白名称可：*蛋白分子量：90-130 KDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 转膜方式恒压、恒流：250 mA 恒流 转膜时间：150 min 转膜设备：湿转 蛋白来源：原核表达 蛋白名称可：蛋白分子量：38 K
8、D WB 用膜类型、孔径：0.45 NC 转膜方式恒压、恒流：湿转 恒压：100 V 转膜时间：120 min 蛋白来源：心脏 蛋白名称可：蛋白分子量：220 kDa，130 kDa，70 kDa，41kDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 转膜方式恒压、恒流：恒压 转膜时间：70 v120 min，180 min，5-6 h 转膜设备：伯乐湿转 建议改进方向可选：40 kDa 一下，70 v，60-90 min 足够，40-70 kDa 90-120 min即可。70-120 kDa，70 v，120-180 min 足够，120-180 kDa，180-240 min，180 kDa以上建
9、议 6 h。蛋白来源：卵巢癌细胞膜蛋白 蛋白名称可：蛋白分子量：53 KD.1 WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 0.45 um 转膜方式恒压、恒流：恒压 转膜时间：80 V 100 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：人宫颈癌 HELA 细胞总蛋白 蛋白名称可：-actin 蛋白分子量：42 WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 0.45 um 转膜方式恒压、恒流：恒压 转膜时间：50 4 h 转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：脑组织 蛋白名称可：蛋白分子量：16 KD、27 KD、32 KD、42 KD WB 用膜类型、孔径：PVDF 0.22 um 转膜方式恒压、恒
10、流：半干转 恒流 1 mA/cm2或 2 mA/cm2 转膜时间：不定 转膜设备：六一仪器 建议：我共做了六个蛋白，所以总在想节约时间的方式。在 预试时我会观察电压数与转膜效率的关系，所以我不会按时间来定何时转完，而是按电压来定。通过染胶来确定电压数与转移蛋白分子量上限的关系。这样有的 5 分 钟就转完了，不用多浪费时间。并且六一的半干转膜仪随着使用次数的增多，效率也会下降，所以时间和转膜效率尤其是使用后期的关系并不稳定，单纯依靠时 间有时会有问题。蛋白来源：CHO cell 蛋白名称可：酶原 蛋白分子量：40 KD WB 用膜类型、孔径：0.22 的 PVDF 膜Biorad 转膜方式恒压：
11、100 V，湿转，转膜时间：60 min。设备：Tanon天能 建议：1.转膜液现用现配，用完倒掉。2.转膜时间，电压可以适当调整。分子量大或者小一些的蛋白，采用此条件一样转膜效率很高。蛋白来源：Hepg2 蛋白名称可：EGFR 蛋白分子量：170kd WB 用膜类型、孔径：pvdf 0.45 转膜方式恒压、恒流：24V 转膜时间：2 个半小时 转膜设备：伯乐半干转 蛋白来源：肝癌细胞 蛋白名称：HIF-1 蛋白分子量：120 kD WB 用膜类型、孔径：NC 膜.1 转膜方式恒压：80 伏，湿转 转膜时间：150 分钟 设备：“Bio-Rad mini 建 议：湿转，转膜液特别重要，否则会导
12、致电压或者电流不稳影响转膜条带。转膜均现配先用，不重复利用。转膜时间一般是 150 分钟，80 伏恒压。经春红染 色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。该湿转条件自己做过的蛋白分子量围：170-36 kD。蛋白来源：心肌细胞总和膜 蛋白名称可：蛋白分子量：128 KD，100，60，55，43 KD WB 用膜类型、孔径：NC 膜 0.2 um 转膜方式恒压、恒流：恒压 转膜时间：70 V 200 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 建 议：转膜液最好现配现现用，或配成母液，最好不重复使用，70 V 电压下，电流约 154 mA。甲醇可以加到 150 ml。
13、对大分子量如 200 KD 转膜时间延长 6-8 h。蛋白来源：肺脏 蛋白名称可：ICAM-1 蛋白分子量：85110 KD WB 用膜类型、孔径：0.22NC 转膜方式恒压、恒流：湿转 恒流 300 mA 转膜时间：120 min 设备名字 Bio-Rad mini 一抗用的 santa cruz 1 mL 包装的。比例调整到 1：800 做出很好的条带。效价会一直降低的。去年做的这个指标，今年夏天做就不行了。蛋白来源：成纤维细胞 蛋白名称可：蛋白分子量：16 KDa WB 用膜类型、孔径：0.2 um PVDF 膜 转膜方式恒压、恒流：0.2 A 恒流 转膜时间：65 min 转膜设备：湿
14、转 Bio-Rad 蛋白来源：成纤维细胞 蛋白名称可：蛋白分子量：28 KDa WB 用膜类型、孔径：0.2 umPVDF 膜 转膜方式恒压、恒流：0.25 A 恒流 转膜时间：60 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：人肿瘤细胞 蛋白名称可：蛋白分子量：80 KD WB 用膜类型、孔径：0.45 um PVDF 膜.1 转膜方式恒压、恒流：半干转移系统恒流，勿超过 0.85 mA/cm2，同时转多膜电流需累加串联 转膜时间：60-90 min 设备：Bio-Rad 其实有些东西并不是非常严格的，要转移的目的蛋白分子量小，则转移的时间就短一些，反之，则长一点；蛋白量充足，可以多转
15、一会，蛋白量较少，则要少转一下，免得蛋白穿膜而过到了滤纸上而前功尽弃。蛋白来源：人和鼠肝癌细胞总蛋白、胞浆、胞核蛋白 蛋白名称可：*蛋白分子量：17-116 kd WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 0.45 um 转膜方式恒压、恒流：恒流 200 mA 转膜时间：3 h 转膜设备：湿转 六一 24D mini 蛋白来源：CO COS7 293T 蛋白名称可：蛋白分子量：80 72 56 52 48 25 18KD WB 用膜类型、孔径：0.45 um PVDF 膜 转膜方式恒压、恒流：湿转 90 V 电流约为 230-280 mA 之间。两膜串联叠加。转膜时间：40 min 设备：Bio-R
16、ad 法码西亚 蛋白来源：人肿瘤细胞 蛋白名称可：磷酸化蛋白 蛋白分子量：30-60 KDa WB 用膜类型、孔径：pall NC 膜 0.45 um 转膜方式恒压、恒流：恒流 0.85-1 mA/平方厘米膜 转膜时间：60-90 min 转膜设备:六一 半干转 建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成 2 倍的母液，转膜液的多少会影响电转的效率，一般将吸水纸润湿即可，不要和膜一起浸泡，这样效果很好。蛋白来源：人肝癌肿瘤细胞 蛋白名称可：notch 蛋白分子量：60-120 KDa WB 用膜类型、孔径：pall NC 膜 0.45 um 转膜方式恒压、恒流：恒流 0.3 A 转膜时间：-20
17、度冰柜 120 min 转膜设备:湿转 Bio-Rad 建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成 10 倍或 5 倍的母液，保持低温是转膜效果的一个保证，这样效果很好。蛋白来源：胶质瘤细胞总蛋白和核蛋白 蛋白名称可：蛋白分子量：18 KDa、36 KDa、55 KDa、98 KDa WB 用膜类型、孔径：NC 膜 PALL 转膜方式恒压、恒流：0.35 恒流.1 转膜时间：60 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad mini 转缓液的配制有点讲究。如果蛋白大于一百多，一般参加 SDS，时间延长结果会更好些。由于，目前试验的蛋白就都不大，所以，我们都采用不加 SDS 的转缓液，跑出来的条带也很整
18、齐、干净。蛋白来源大肠癌 205 蛋白名称可：蛋白分子量：92 kd，43 kd WB 用膜类型、孔径：0.45pvdf 转膜方式恒压、恒流：恒压 转膜时间：90 min 转膜设备：湿转，天能。蛋白来源：大鼠脑组织 蛋白名称可：BDNF28 KDa、Bactin42 KDa、LaminB72 KDa，以及磷酸化蛋白 43 KDa WB 用膜类型、孔径：PVDF0.45膜 转膜方式恒压、恒流：300 mA 恒流 转膜时间：60 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad Mini 转膜缓冲液：25甲醛 觉得这个浓度的甲醛可以有效降低电转的热量，而且使膜对蛋白的吸附效果较好，Marker 转到膜上很鲜
19、艳。用立春红染色效果也很好。蛋白来源：表达产物 蛋白名称可：蛋白分子量：29 KDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 转膜方式恒压、恒流：0.3 A 恒流 转膜时间：80 min 转膜设备:湿转 Bio-Rad 蛋白来源：cell lysate,culture medium 蛋白名称可：蛋白分子量：15-50 kD WB 用膜类型、孔径：NC，PVDF，0.45 um 转膜方式恒压、恒流：恒压，semi-dry 转膜时间：about 2h is ok if the protein is small and the voltage can keep 100 V，if not increase t
20、o 3-4 h。转膜设备：Bio-Rad 蛋白来源：肺脏、肝脏等。蛋白名称可：actin 蛋白分子量：43 kD WB 用膜类型、孔径：NC 膜 PALL 0.22 um 转膜方式恒压、恒流：湿转 恒流 200 mA 转膜时间：4560 min 设备名字 Bio-Rad mini.1 用的 santa cruz 分装和整装的都可以。效价一般 1：1000-1：3000 左右，可稳定较长一段时间。蛋白来源肺脏 蛋白名称可：蛋白分子量：19 kd,35 kd WB 用膜类型、孔径：0.2pvdf 转膜方式恒压、恒流：恒流 250 转膜时间：150 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad mini
21、蛋白来源：大鼠血管 蛋白名称可：蛋白分子量：140 kd WB 用膜类型、孔径：0.45pvdf 转膜方式恒压、恒流：恒流，200 mA 转膜时间：210 min 转膜设备:湿转,六一 蛋白来源：心肌 蛋白名称可：蛋白分子量：90 kDa，70 kDa,12.6 kDa WB 用膜类型、孔径：NC 转膜方式恒压、恒流：恒压 转膜时间：70 v 240 min，120 min，60 min 转膜设备：伯乐湿转 蛋白来源：脑 蛋白名称可：蛋白分子量：16 KD 60 KD WB 用膜类型、孔径：16 的用 0.22 的 PVDF，60 的用 0.45 的 NC 转膜方式恒压、恒流：20 V 转膜时
22、间：16 的 30 min，60 的 90 min 转膜设备：Bio-Rad 半干 蛋白来源：子宫膜癌组织 蛋白名称可：蛋白分子量：156.8 WB 用膜类型、孔径：NC 膜 转膜方式恒压、恒流：恒流 400mA 转膜时间：90 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：真核表达 蛋白名称可：多种，30 个以上 蛋白分子量：40-200 kD WB 用膜类型、孔径：PVDF 转膜方式恒压、恒流：恒压 100 V电流在 280 mA 至 350 mA 之间 转膜时间：60 minM100kD,60-100min(100kDM200kD).1 转膜设备：湿转 蛋白来源：大鼠肾脏 蛋白名称可
23、：蛋白分子量：130 kD WB 用膜类型、孔径：0.45NC 膜 PALL 转膜方式恒压、恒流：湿转 恒流 350 mA 转膜时间：120min 设备名字 Bio-Rad mini 一抗用的 sigma 羊抗大鼠，0.2 mL 包装的，打折后价格 3000 多，有些贵哦。比例调整到 1：1500 左右条带可，用 BSA 封闭。但是背景稍高。蛋白来源：脑组织 蛋白名称可：蛋白分子量：38 KDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜，转膜方式恒压、恒流：80 v 恒压 转膜时间：180 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad mini 蛋白来源：真核表达 蛋白名称可：蛋白分子量：约 35 kD双
24、亚基 WB 用膜类型、孔径：0.22 um PVDF 转膜方式恒压、恒流：恒流 200 mA 转膜时间：60 min 转膜设备：湿转 Bio-rad,天能，六一 转膜时间其实不需要则长的，转膜没转上一般原因不在这里，可能是转膜液的原因：有些蛋白 SDS 可能影响其与膜的结合，复原型电泳因巯基乙醇的原因也可能导致后面的抗体不结合这是我最近的经历教训，还有一抗的选择很重要，一定要选识别线性表位的抗体，才能用于做 WB。蛋白来源：细菌蛋白 蛋白名称可：全部的可溶性蛋白 蛋白分子量：11-170 KD WB 用膜类型、孔径：0.45 NC 转膜方式恒压、恒流：湿转 恒流 300 mA 转膜时间：80
25、min 蛋白来源：骨肉瘤细胞 蛋白名称可：蛋白分子量：72 kDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜(0.45 um)转膜方式恒压、恒流：半干转 恒流 200 mA 转膜时间：20-30 min 转膜设备：Bio-Rad 型号忘了，就是有 4 个插孔的电泳仪。建议改进方向：低温很重要，新鲜的电转液也很重要。蛋白来源：骨肉瘤 CELL LINE 蛋白名称可：Beta actin.1 蛋白分子量：42 kDa WB 用膜类型、孔径：Nitrocellulose Membrane 0.2 um Pore Size(Invitrogen)转膜方式恒压、恒流：湿转，恒压 22 v 转膜时间：90 mi
26、n 转膜设备：*-cell Sure Lock Mini-cell(Invitrogen)建议改进方向：转膜过程冰水浴，保持低温，Transfer Buffer 重复使用。蛋白来源：肾瘤细胞 蛋白分子量：39 kDa WB 用膜类型、孔径：Nitrocellulose Membrane 0.2 um Pore Size(Invitrogen)转膜方式恒压、恒流：湿转 恒压 100 v 转膜时间：50 min 蛋白来源：MCF7 蛋白名称可：蛋白分子量：70 kDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜GE 转膜方式恒压、恒流：湿转 100 伏 转膜时间：60 min 转膜设备：伯乐小转膜仪 蛋白
27、来源：pichia 分泌表达 蛋白名称可：细胞因子等 蛋白分子量：17 到 30 kDa WB 用膜类型、孔径：millipore PVDF 0.45 um 转膜方式恒压、恒流：湿转 恒压：100 V 转膜时间：60 min 这个条件除了 100 KDa 的预染 maker 转的不好，剩下的条带都非常清晰。正向前面 ycwzq说的，感觉时间不是很重要，只要蛋白别太小或太大，在一个比较宽的时间和电压围都能转上。当然这些还有一个重要的影响因素就是所用的蛋白转印缓冲液。所以建议把自己用的转印缓冲液的配方也贴上，便于分析交流。我先说我的吧，是大师兄师姐的配方，我用了感觉还不错，但是 100 KDa 以
28、上的转的不好。蛋白转印缓冲液 pH8.2:Tris 碱 1.93 g，甘氨酸 9 g，甲醇 200 ml，加水定容至 1000 ml。蛋白来源：大鼠坐骨神经 蛋白名称可：蛋白分子量：30 kDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜(0.2 um)转膜方式恒压、恒流：湿转 恒流 300 mA 转膜时间：45 min 转膜设备:Bio-Rad 蛋白来源：小鼠胚胎成纤维 蛋白名称可：蛋白分子量：36 KDa、55 KDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 0.45 转膜方式恒压、恒流：0.3 A 恒流 转膜时间：60 min 转膜设备:湿转 Bio-Rad mini.1 垫子变薄时，可用三层纤维垫
29、，也没问题。蛋白来源：小鼠前列腺癌细胞 蛋白名称可：P53 P21 RAD51 GAPDH 蛋白分子量：53 KDa、21 KDa、37 KDa、36 KDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 0.45 转膜方式恒压、恒流：恒压 110 v 转膜时间：60 min 转膜设备:湿转 Bio-Rad mini 蛋白来源：HEK293 总蛋白 蛋白名称可：*蛋白分子量：200KD WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 0.2 um(用甲醇预先处理)转膜方式恒压、恒流：恒压 25 V 转膜时间：过夜(16-20 hours)转膜设备:biorad mini 蛋白来源：人前列腺癌细胞 蛋白名称可：*蛋白
30、分子量：40 KD WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 0.45 um(用甲醇预先处理)转膜方式恒压、恒流：恒压 20 V，限制最高电流 0.3 A。转膜时间：过夜(16-20hours)转膜设备：biorad semi-dry 蛋白来源：组织 蛋白名称可 蛋白分子量：42 KDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜0.22 转膜方式恒压、恒流：350 mA 恒流 转膜时间：60-90 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：E.Coli BL21 蛋白名称可：蛋白分子量：4 kd WB 用膜类型、孔径：PVDF 0.22 um 转膜方式恒压、恒流：恒压 15 v 转膜时间：O/N
31、转膜设备:Bio-Rad Mini 湿转 转膜液的配制：for 1 L transfer buffer，200 ml Methanol，14.4 g Glycine，3.03 g Trizma-base。用了 Trcine-gel SDS Page，效果不错 蛋白来源：肾脏 蛋白名称可：蛋白分子量：23 kd WB 用膜类型、孔径：PVDF 0.45 um 转膜方式恒压、恒流：恒压 20 v.1 转膜时间：35 mins 转膜设备:Bio-Rad 半干 蛋白来源：来自 MDCK 增殖的流感病毒裂解物 蛋白名称可：PB1 蛋白分子量：96 kd 注意，10%SDS-PAGE，冰上电泳。用预染 m
32、arker 观察 100kd的条带跑到胶的正中间位置时，才开场转膜，否则转膜效率降低 WB 用膜类型、孔径：NC 膜，0.45 转膜方式恒压、恒流：恒压，100V 转膜时间：2 hours 转膜设备:BIO-rad 转膜设备。其间，准备一个冰盒，将电泳槽半埋到冰里。转膜液的配制：如甲醇的比例和是否加 SDS 以及多大质量浓度等：2.9 g 甘氨酸，5.8 g tris，0.37 g SDS，200 ml 甲醇。蛋白来源：肾脏 蛋白名称可：蛋白分子量：9 kd WB 用膜类型、孔径：PVDF 0.22 um 转膜方式恒压、恒流：恒压 20 v 转膜时间：30 min 转膜设备:Bio-Rad 半
33、干 蛋白来源：软骨细胞 蛋白名称可：b-actin 蛋白分子量：43 kd WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜，0.45 转膜方式恒压、恒流：湿转，恒流，350 mA 转膜时间：85 min 转膜设备:BIO-rad 转膜设备。其间，准备一个冰盒，将电泳槽半埋到冰里。转膜液的配制：2.92 g 甘氨酸，5.8 g tris，0.375 g SDS，200 ml 甲醇，用双蒸水定容到 1 L 蛋白来源：宫颈癌细胞 蛋白名称：蛋白分子量：60 kD WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 0.45 uM 转膜方式恒压、恒流：恒流，按膜的面积来算电流，标准大小的膜-60 mA/8.2 cm*6.0 cm
34、)转膜时间：2 h 转膜设备：Biorad semi-dry 转膜液的配制：Boston Bioproduct Transfer buffer+10-20%甲醇 建议改进方向：做半干转的时候，治上面再压一滤纸，可以保证压紧，转膜效率稳定。用这个条件做过不少不同分子量的蛋白，最小从 15 kD，到最大 235 kD，都可以得到稳定结果。转膜液只用一次，不重复使用。蛋白来源：家牛肝细胞 蛋白名称可：蛋白分子量：30 kDa.1 WB 用膜类型、孔径：NC，6*8 cm，0.45 um 转膜设备：Invitrogen 湿转，外层冰水浴冷却。转膜方式恒压、恒流：恒流 170 mA 转膜时间：根据胶的厚
35、度而定，每 0.5 mm 转 30 min，1.5 mm 的超厚预制胶转 1.5-2 h。转膜液的配制：10 mM 碳酸氢钠，3 mM 碳酸钠，20%甲醇。建议改进方向：已考染的胶脱色后可以用此法转膜，条带稍淡但不影响结果。蛋白来源：组织 蛋白名称可 蛋白分子量：170 KDa WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜0.45 转膜方式恒压、恒流：300 mA 恒流 转膜时间：170 min 转膜设备:湿转 Bio-Rad 蛋白来源：HepG2 细胞 蛋白名称可：Akt 及 P-Akt 蛋白分子量：55KDa/56KD WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 0.45 孔径 转膜方式恒压、恒流：100V
36、 恒压 转膜时间：75 min 转膜设备:湿转 Bio-Rad 蛋白来源：大鼠 蛋白名称可：Bactin42 KDa WB 用膜类型、孔径：PVDF0.45膜 转膜方式恒压、恒流：湿转 恒流 150 mA 转膜时间：100 min 转膜设备:六一 蛋白来源：大鼠大脑皮质 蛋白名称可：b-actin 蛋白分子量：43 kd WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜，0.45 转膜方式恒压、恒流：半干转，恒流，2 mA/cm2 转膜时间：8-55 min 转膜设备:BIO-rad 转膜设备。转膜液的配制：2.92 g 甘氨酸，5.8 g tris，0.375 gSDS，200 ml 甲醇，用双蒸水定容到 1 L