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1、实验一实验一 毛细血管采血毛细血管采血 白细胞计数白细胞计数临床检验基础实验临床检验基础实验王王 梅梅江苏大学基础医学与医学技术学院江苏大学基础医学与医学技术学院临床检验与输血教研室临床检验与输血教研室第一部分第一部分 毛细血管采血毛细血管采血 毛细血管采血毛细血管采血即皮肤采血法，主要用于需血量微小的检查项即皮肤采血法，主要用于需血量微小的检查项目。所获得的末稍血不单纯是毛细血管血，实际是是微动脉、微目。所获得的末稍血不单纯是毛细血管血，实际是是微动脉、微静脉和毛细血管的混合血，并依采血时挤压的力度不同含有少量静脉和毛细血管的混合血，并依采血时挤压的力度不同含有少量细胞间质和细胞内液。细胞间
2、质和细胞内液。毛细血管采血器具毛细血管采血器具采血笔采血笔采血笔结构示意图采血笔结构示意图采血笔的使用采血笔的使用拧下采血笔前端笔帽拧下采血笔前端笔帽安装采血针安装采血针采血采血采采血血针针1 1、准备材料、准备材料2 2、选择采血部位、选择采血部位3 3、按摩皮肤、按摩皮肤4 4、消毒皮肤、消毒皮肤用用75%75%乙醇脱脂棉球擦拭采血部位的皮肤，乙醇脱脂棉球擦拭采血部位的皮肤，待干。待干。5 5、针刺皮肤、针刺皮肤用左手拇指和示指固定绷紧皮肤，右手持采血针自指尖腹内侧迅速刺入用左手拇指和示指固定绷紧皮肤，右手持采血针自指尖腹内侧迅速刺入6 6、拭去第一滴血、拭去第一滴血7 7、吸血、吸血血液
3、自然流出时，用微量吸管吸血至刻度血液自然流出时，用微量吸管吸血至刻度8 8、止血、止血毛细血管采血操作步骤毛细血管采血操作步骤1 1、采血前准备、采血前准备患者、器材患者、器材2 2、选择采血部位、选择采血部位皮肤完整处采血皮肤完整处采血 3 3、消毒皮肤、消毒皮肤无菌操作、一人一针一管、皮肤消毒应待乙醇或碘酊挥发后采血无菌操作、一人一针一管、皮肤消毒应待乙醇或碘酊挥发后采血 4 4、针刺皮肤、针刺皮肤迅速，伤口深度迅速，伤口深度 5 5、拭去第、拭去第1 1滴血滴血6 6、吸血与检测、吸血与检测微量吸管校准、血液充入管内的速度、应及时测定微量吸管校准、血液充入管内的速度、应及时测定毛细血管采
4、血注意事项毛细血管采血注意事项第二部分第二部分 白细胞计数白细胞计数 原理：原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血 细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换 算成每升血液中白细胞数。算成每升血液中白细胞数。试剂：试剂：白细胞稀释液：冰乙酸白细胞稀释液：冰乙酸 2.0ml2.0ml 10g/L 10g/L亚甲蓝亚甲蓝3 3滴滴 加蒸馏水加蒸馏水 至至100ml100ml器材：器材：微量吸管、带孔吸头、微量吸管、带孔吸头、改良牛鲍血细胞计数板改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片及专用盖片1ml1ml刻度移液管
5、、小试管、洁净软纱布、刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜干棉球、光学显微镜 微量吸管的使用微量吸管的使用1 1、将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；、将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；2 2、拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指、拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；轻微挤压排出适量空气；3 3、将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会、将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能
6、有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；吸管呈水平略下垂，松开示指；4 4、用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻触、用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；5 5、将微量、将微量吸管插入小试管底部，吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出三指轻微用力慢慢排出血液，血液，用上清液冲洗管内用上清液冲洗管内余血余血2-32-3次，轻摇次，轻摇试管试管混匀；混匀；6 6、拔出微量吸管弃入污物桶。、拔出微量吸管弃入污物桶。改良牛鲍血细胞计数板结构改良牛鲍血细胞计数板结构计数板上下各一个
7、计数池计数板上下各一个计数池血细胞计数池的方格血细胞计数池的方格计数区域分为计数区域分为9 9个个大方格大方格四角的大方格各划分为四角的大方格各划分为1616个个中方格中方格中央大方格划分为中央大方格划分为2525个中方格个中方格四角的大方格为白细胞计数区四角的大方格为白细胞计数区中央大方格四角和正中中央大方格四角和正中5 5个中方格为红细个中方格为红细胞计数区胞计数区白细胞数白细胞数/L=N/4 10 10/L=N/4 10 106 6 稀释倍数稀释倍数每个大方格的每个大方格的容积容积=面积面积高度高度=1mm=1mm2 2 0.1mm=0.1mm 0.1mm=0.1mm3 3(l)(l)每
8、个大方格的每个大方格的面积面积=1mm1mm=1mm=1mm1mm=1mm2 2 （N N：4 4个大方格细胞总数）个大方格细胞总数）细胞计数原则细胞计数原则大方格四边压线细大方格四边压线细胞数左不数右，数胞数左不数右，数上不数下，上不数下，弓形移动弓形移动（1 1）加稀释液）加稀释液 用移液管向小试管内加入用移液管向小试管内加入0.38ml0.38ml白细胞稀释液。白细胞稀释液。（2 2）采血、稀释）采血、稀释用微量吸管采血用微量吸管采血20ul20ul，拭去管外余血，释放于小试，拭去管外余血，释放于小试 管管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇轻摇试管混
9、匀，静置等其溶血。试管混匀，静置等其溶血。（3 3）清洁计数板及盖片）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。持堤上。（4 4）充计数池）充计数池将将小试管轻微振荡小试管轻微振荡2min2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。后的白细胞悬液，充入计数池内。静置静置2-3min2-3min，使细胞沉于计数池底，使细胞沉于计数池底面。面。（5 5）调试显微镜）调试显微镜 将计数板放置载物台上，转至低倍镜（将计数板放置载物台上，转至低倍镜（1010），），调节调节聚光器使
10、光线较暗，调节旋钮找到方格线，调节光亮。聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，调节光亮。（6 6）计数）计数 低倍镜下计数低倍镜下计数四角四角4 4个大方格内白细胞总数个大方格内白细胞总数，压线细胞，压线细胞数上不数上不数下，数左不数右数下，数左不数右。白细胞计数操作步骤白细胞计数操作步骤(1)(1)稀稀释释液液密密封封保保存存，防防止止污污染染，小小试试管管、计计数数板板、盖盖片片均均须须清清洁洁，以以免杂质、微粒等被误认为细胞。免杂质、微粒等被误认为细胞。(2)(2)采采血血时时针针刺刺深深度度必必须须适适当当，不不能能过过度度挤挤压压，防防止止组组织织液液渗渗入入或或采采血血时间太长引起
11、血液凝固。时间太长引起血液凝固。(3)(3)稀稀释释液液和和采采血血量量要要准准确确，充充分分混混匀匀，充充液液适适量量，无无不不足足、外外溢溢和和气气泡，细胞分布均匀。泡，细胞分布均匀。(4)(4)白白细细胞胞总总数数在在参参考考范范围围内内，大大方方格格间间的的细细胞胞数数不不得得相相差差1010个个以以上上，两次重复计数误差不得超过两次重复计数误差不得超过1010。(5)(5)白白细细胞胞数数量量过过高高时时，可可加加大大稀稀释释倍倍数数，白白细细胞胞数数量量过过低低时时，可可计计数数8 8个大方格的白细胞数或取双倍血量。个大方格的白细胞数或取双倍血量。(6)(6)调试显微镜调试显微镜 将血细胞计数板平放于载物台，低倍镜处所充计数池正将血细胞计数板平放于载物台，低倍镜处所充计数池正中盖片略上方，向下微调载物台（防止压碎盖片）至看清计数区域内中盖片略上方，向下微调载物台（防止压碎盖片）至看清计数区域内分隔线条为止。分隔线条为止。白细胞计数操作注意事项白细胞计数操作注意事项实验报告内容实验报告内容原理原理试剂器材试剂器材操作步骤操作步骤实验结果实验结果注意事项注意事项思考题思考题