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1、染色体显带技术 实验目的 实验原理 实验步骤 作业 返回大纲实验目的 n了解几种常用的染色体显带方法，通过实验初步掌握带和带的染色技术。染色体显带技术简介。n染色体显带技术开始于1969年，是一项正处于不断探索与发展中的新技术。它使用特殊的染色方法，使染色体产生明显的染色的暗带与未染色的明带相间的带型，即显现出染色体本身的更细微的结构，形成更鲜明的染色体个体性，从而可以更准确地鉴别每条染色体。显带技术也是为染色体结构与功能的分析研究开辟了一条新的途径。染色体显带技术简介。n目前常用的几种显带方法有：1.荧光显带法（Q带）：用荧光染料喹吖因处理后，在荧光显微镜下显现的带型。2.吉姆萨显带法（C）
2、：经热、碱、胰酶等处理后，进行吉姆萨染色所显的带型。3.反带法（R带）：应用本法显示的带与带及带相反，即G带的暗区在R带中为明区。4.末端显带法（T带）：对染色体末端区的特殊显带法，对分析染色体易位有一定价值。5.G带法：先用酸和碱作变性处理，再用吉姆萨染色，专门显示着丝点区附近的结构异染色质。6.银染色法（Ag带）：用硝酸银染色，专门显示染色体上具有转录活性的核仁组织区域。7.此外，还有N带、高分辨带、复制带等等，并还在不断产生新的显带方法。染色体显带技术简介。n染色体的显带机制，目前尚不清楚，但大量实验表明，带的出现不是随机的，而是染色体结构的真实反映。用相差显微镜观穿未经显带处理也未经染
3、色的染色体标本时，就能直接观察到染色体带，用特殊方法处理后，再用染料染色，只是使带更加清楚。随年显带方法不同，所显带的特点不一样，说明带的出现还与染料的特异结合有关。染色体C带技术（原理）n本实验学习BSG（氢氧化钡/盐/吉姆萨）-显带方法，BSG-显带是显示染色体的结构异染色质，即着丝点和次缢痕区的较稳定的方法。n原理：经BSG程序处理后，然色染色体的臂区丧失大量染色质（包括常染色质和异染色质），而着丝点、部分次缢痕和异染色质区因含有大量的重复DNA顺序及与之相结合的蛋白质却保留下来，经由Giemsa染色形成深染的C带。n本方法可用于人类不同种族和个体之间染色体多态性研究，鉴别染色体上不同的
4、染色质类型；也可以应用于基因定位、产前诊断，以及各种异常细胞双着丝点染色体乃至多着丝点染色体之来源等。染色体C带技术（方法）n染色体标本置0.2Cl中浸泡1小时n蒸馏水漂洗2次，在室温晾至半干。n将标本插入装有预热至50的Ba(OH2)5%饱和溶液的染色缸,保温10分钟n取出染色体标本，立即用自来水冲去Ba(OH2)溶液n趁标本仍潮湿时置入预热至60的2xSSC中性盐溶液中，保温1小时。n蒸馏水洗去盐溶液。nGiemsa染色10min以上，空气干燥，镜检染色体C带技术（注意事项）n5%Ba(OH2)配制后放至4保存，用时吸取上清液。n2xSSC配制时须一种盐溶解后方可加入第二种，即取NaCl1
5、.75g溶于100ml双蒸水中，待完全溶解后加入0.88g枸椽酸盐。n片龄1-5天为最适标本。n从Ba(OH)2溶液中取出染色标本时，要求动作迅速，切忌BaCO3薄膜形成n（Ba(OH2)+CO3BaCO3+H2O)敷贴在染色体标本上，否则影响显带效果。染色体G-带技术（原理）nG带染色技术也称改良的吉姆萨染色法。因用吉姆萨染色，所以称为G带。是目前应用最广泛的染色体分带技术之一。n关于G带的显带机制，有许多说法，目前尚无定论，比较公认的一种看法是：染色体上富含A-T碱基对的区段，与蛋白质结合比较紧密，较耐受胰酶处理，从而被Giemsa深染，而富含G-C碱基对的区段，与蛋白质结合疏松，在经胰酶
6、处理后，蛋白质受到破坏，而不被Giemsa染色，显示为淡染的明区。染色体G-带技术（方法）nG带的预处理方法很多，用热、碱、胰蛋白酶、尿素、-胰凝乳蛋白酶，氯化铯和5-溴脱氧嘧啶等处理，均可获得良好一致的效果。n本实验采用以下方法显示G带：将片龄为3-10天的染色体标本，放入37温箱中预处理3小时。将标本浸入PH为6.8-7.0的0.1%胰蛋白酶和0.02%EDTA-2Na1:1混合液中，室温处理15-20min。此步为关键一步，又是很难掌握的一步，片龄的长短，胰酶的活性，室温的高低，标本上细胞密度的大小等都会影响胰酶的处理强度，总之，处理时间因染色体标本不同相差很大，需反复试验，逐渐摸索。实验中，可将两片标本的处理时间间隔放长一些，其中一片的处理时间长一些，例如一片60秒，一片150秒甚至200秒，以尽快找到最适处理时间。在PH6.8的PBS液中漂洗。Giemsa染色3-5分钟。注意：染色时间不宜过长。染色体G-带技术（结果）n在胰酶处理适当的片子上，染色体呈现出深浅相间的横纹。横纹的数目越多，深浅带纹间反差越强，显带效果越理想。n若整条染色体全部深染，即与未显带标本相似，原因是胰酶处理不够。n胰酶处理过度时，染色体呈空泡状，即只显现染色体的轮廓。处理严重过度时，甚至会看不到染色体及间期核。作业n绘制对显带明显的染色体的形态