定量蛋白质组学研究技术课件.ppt

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1、细胞工程教研室第九章第九章 定量蛋白质组学研究技术定量蛋白质组学研究技术 石晓卫石晓卫E-mailE-mail：细胞工程教研室定量蛋白质组学定量蛋白质组学定量蛋白质组学是指把一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂的混合体系中的目标蛋白质进行精确定量和鉴定。这一概念的提出标志着蛋白质组技术的不断改进和完善。蛋白质组学研究已从对蛋白质简单的定性向精确的定量方向发展。细胞工程教研室细胞工程教研室主要内容主要内容 定量技术体系与分类定量技术体系与分类 荧光染料分析法荧光染料分析法 同位素标记技术同位素标记技术 针对性亲和标签技术针对性亲和标签技术 同位素标记技术的应用同位素标记技术的应用细胞工程教研室一

2、一 定量技术体系和分类定量技术体系和分类 技术体系技术体系双向电泳双向电泳-质谱技术体系质谱技术体系蛋白质芯片分析体系蛋白质芯片分析体系基于同位素标记的质谱分析技术体系基于同位素标记的质谱分析技术体系细胞工程教研室2-DE-MS技术体系技术体系无标记的蛋白质双向电泳无标记的蛋白质双向电泳荧光差异凝胶电泳荧光差异凝胶电泳基于同位素标签和自动化的串联质谱基于同位素标签和自动化的串联质谱细胞工程教研室定量分析方法定量分析方法定性差异分析和定量差异分析定性差异分析和定量差异分析绝对定量和相对定量绝对定量和相对定量凝胶差异分析和非凝胶差异分析凝胶差异分析和非凝胶差异分析标记定量法和无标记定量法标记定量法

3、和无标记定量法细胞工程教研室二二 荧光染料分析法荧光染料分析法 双向电泳（双向电泳（2-DE）凝胶染料显示）凝胶染料显示考马斯亮蓝考马斯亮蓝银染银染荧光染色荧光染色荧光标记荧光标记细胞工程教研室 荧光双向差异凝胶电泳（荧光双向差异凝胶电泳（2D-DIGE2D-DIGE）目目目目前前前前，在在在在传传传传统统统统2-DE2-DE2-DE2-DE技技技技术术术术的的的的基基基基础础础础上上上上发发发发展展展展出出出出的的的的2D-2D-2D-2D-DIGEDIGEDIGEDIGE，采采采采 用用用用 专专专专 有有有有 的的的的 荧荧荧荧 光光光光 染染染染 料料料料（Cy2Cy2Cy2Cy2、C

4、y3Cy3Cy3Cy3、Cy5Cy5Cy5Cy5）与与与与多多多多重重重重样样样样本本本本和和和和图图图图象象象象分分分分析析析析的的的的方方方方法法法法，在在在在同同同同一一一一块块块块胶胶胶胶上上上上可可可可同同同同时时时时分分分分离离离离多多多多个个个个由由由由不不不不同同同同荧荧荧荧光光光光标标标标记记记记的的的的样样样样品品品品，并并并并以以以以荧荧荧荧光光光光标标标标记记记记的的的的样样样样品品品品混混混混合合合合物物物物为为为为内内内内标标标标，对对对对每每每每个个个个蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质点点点点和和和和每每每每个个个个差差差差异异异异都都都都可可可可以以以以进进进进行行行行

5、统统统统计计计计学学学学可可可可信信信信度度度度分分分分析，从而具有析，从而具有析，从而具有析，从而具有良好的重复性和较高的准确率良好的重复性和较高的准确率良好的重复性和较高的准确率良好的重复性和较高的准确率。另另另另外外外外，由由由由于于于于荧荧荧荧光光光光染染染染料料料料的的的的使使使使用用用用，使使使使得得得得2D-DIGE2D-DIGE2D-DIGE2D-DIGE具具具具有有有有高高高高灵灵灵灵敏敏敏敏度度度度的的的的特特特特性性性性，能能能能够够够够满满满满足足足足高高高高通通通通量量量量定定定定量量量量蛋蛋蛋蛋白白白白质组学研究分析的要求。质组学研究分析的要求。质组学研究分析的要求

6、。质组学研究分析的要求。细胞工程教研室细胞工程教研室荧光扫描仪荧光扫描仪细胞工程教研室细胞工程教研室三三 同位素标记技术同位素标记技术 原理原理 多肽和蛋白质的质谱响应值受许多难以控制的多肽和蛋白质的质谱响应值受许多难以控制的多肽和蛋白质的质谱响应值受许多难以控制的多肽和蛋白质的质谱响应值受许多难以控制的因素的影响，特别是其因素的影响，特别是其因素的影响，特别是其因素的影响，特别是其离子化效率离子化效率离子化效率离子化效率受其他物质受其他物质受其他物质受其他物质和条件的影响很大，具有很强的体系依赖性，和条件的影响很大，具有很强的体系依赖性，和条件的影响很大，具有很强的体系依赖性，和条件的影响很

7、大，具有很强的体系依赖性，因而不能对来自相同肽段两次质谱检测得到的因而不能对来自相同肽段两次质谱检测得到的因而不能对来自相同肽段两次质谱检测得到的因而不能对来自相同肽段两次质谱检测得到的信号强度像色谱定量中那样进行比较定量。信号强度像色谱定量中那样进行比较定量。信号强度像色谱定量中那样进行比较定量。信号强度像色谱定量中那样进行比较定量。细胞工程教研室u一一一一个个个个肽肽肽肽的的的的惟惟惟惟一一一一适适适适合合合合的的的的内内内内标标标标准准准准是是是是标标标标记记记记有有有有稳稳稳稳定定定定同同同同位位位位素素素素的的的的同同同同一一一一个个个个肽肽肽肽。所所所所以以以以，在在在在完完完完整

8、整整整蛋蛋蛋蛋白白白白或或或或消消消消化化化化后后后后的的的的多多多多肽肽肽肽中中中中引引引引进进进进稳稳稳稳定定定定同同同同位位位位素素素素（如如如如2 2 2 2H H H H、13131313C C C C、15151515N N N N、18181818O O O O）标标标标记记记记的的的的小小小小分分分分子子子子，用用用用来来来来识识识识别别别别不不不不同同同同样样样样品品品品来来来来源源源源的的的的肽肽肽肽段段段段，经经经经“轻轻轻轻”质质质质和和和和“重重重重”质质质质同同同同位位位位素素素素标标标标记记记记的的的的不不不不同同同同多多多多肽肽肽肽互互互互相相相相作作作作为为为

9、为内内内内标标标标，化化化化学学学学性性性性质质质质基基基基本本本本上上上上是是是是一一一一样样样样的的的的，这这这这样样样样就就就就可可可可以以以以确确确确保保保保同同同同一一一一次次次次质质质质谱谱谱谱扫扫扫扫描描描描中中中中两两两两者者者者的的的的离离离离子子子子化化化化效效效效果果果果是是是是相相相相同同同同的的的的，此此此此时时时时肽肽肽肽质质质质谱谱谱谱峰峰峰峰信信信信号号号号成成成成对对对对出出出出现现现现，质质质质谱谱谱谱峰峰峰峰的的的的信信信信号号号号强强强强度度度度就就就就可可可可以以以以作作作作为为为为定定定定量量量量的的的的依依依依据据据据。它它它它们们们们的的的的相相

10、相相对对对对强强强强度度度度就就就就精精精精确确确确地地地地反反反反映映映映了了了了原原原原样样样样品品品品中中中中多多多多肽肽肽肽的的的的比例（也就是蛋白的比例）。比例（也就是蛋白的比例）。比例（也就是蛋白的比例）。比例（也就是蛋白的比例）。细胞工程教研室 分类分类同位素标签引入方法同位素标签引入方法生物代谢方式生物代谢方式生物代谢方式生物代谢方式化学方式化学方式化学方式化学方式酶解过程引入酶解过程引入酶解过程引入酶解过程引入同位素标记引入法同位素标记引入法体内标记体内标记体内标记体内标记【代谢标记法（代谢标记法（代谢标记法（代谢标记法（SILACSILAC）】体外标记体外标记体外标记体外标

11、记【化学标记法（化学标记法（化学标记法（化学标记法（ICATICAT）】细胞工程教研室 生物代谢方式引入标记原理原理 将一定量的将一定量的相同种类但表达水平不同相同种类但表达水平不同的的两个（细胞）样品分别置于两个（细胞）样品分别置于正常培养介正常培养介质和富含某重质同位素质和富含某重质同位素（如：（如：1515N N）的相）的相同介质中培养，一定时间后将两者混合同介质中培养，一定时间后将两者混合酶解，然后选择性亲和分离、色谱分离，酶解，然后选择性亲和分离、色谱分离，并进行质谱分析。并进行质谱分析。细胞工程教研室方法方法1515N/N/1414N N蛋白质标记技术蛋白质标记技术 分分别别用用富

12、富含含1515N/N/1414N N的的细细胞胞培培养养基基培培养养要要比比较较的的细细胞胞或或者者简简单单生生物物体体，通通过过生生物物代代谢谢的的方方式式以以1515N N替替代代氨氨基基酸酸组组成成中中的的1414N N，进进而而把把1515N N标标记记引引入入蛋蛋白白质质组组成成中中。由由于于氨氨基基酸酸组组成成的的不不固固定定（从从甘甘氨氨酸酸的的1 1个个到到精精氨氨酸酸的的4 4个个），因因此此还还没没有有把把此此标记用在细胞培养上的报道。标记用在细胞培养上的报道。细胞工程教研室细胞培养条件下稳定同位素标签技术细胞培养条件下稳定同位素标签技术（SILACSILAC）通过细胞的正

13、常代谢，把稳定同位素标通过细胞的正常代谢，把稳定同位素标记的氨基酸引入到蛋白质组成中，大大记的氨基酸引入到蛋白质组成中，大大简化质谱定量分析前人工处理的复杂度。简化质谱定量分析前人工处理的复杂度。可用在细胞培养条件下的稳定同位素有：可用在细胞培养条件下的稳定同位素有：2 2H H、1313C C和和1515N N等。等。细胞工程教研室细胞工程教研室 酶解过程引入标记1818O/1616O水 在两个要比较的蛋白质样品的在两个要比较的蛋白质样品的酶解过程中酶解过程中分别分别加入加入18181818O O和和16161616O O水，这样可特异性地对酶解肽段的水，这样可特异性地对酶解肽段的C C末端

14、末端进行标记，等量混合后进行质谱分析样进行标记，等量混合后进行质谱分析样品间蛋白质组的差异。品间蛋白质组的差异。混合样品须快速鉴定混合样品须快速鉴定。酶解标记H21818O 在在H H2 21818O O的溶液中进行蛋白质酶解，可在其的溶液中进行蛋白质酶解，可在其C C端端稳定结合稳定结合1 1或或2 2个个1818O O原子。原子。细胞工程教研室整体内标技术（GIST）通通过过用用N-acetoxy-N-acetoxy-2 2H H3 3-succinimide/-succinimide/N-acetoxy-succinimide(NAS)N-acetoxy-succinimide(NAS)

15、乙乙酰酰化化处处理理酶酶解解肽肽段段，把把同同位位素素标标签签引引入入样样本本分分析析体体系系中中。NASNAS可可标标记记必必需需氨氨基基酸酸亲亲和和肽肽段段的的N N末末端端。由由于于肽肽段段的的乙乙酰酰化化位位点点不不一一，被被标标记记的的重重链链和和轻轻链链质质量量差差也也不不固定，给自动化分析带来了一定困难。固定，给自动化分析带来了一定困难。细胞工程教研室亲和标签法引入标记原理原理 同同同同位位位位素素素素标标标标记记记记亲亲亲亲和和和和标标标标签签签签技技技技术术术术（ICATICAT）由由由由GygiGygi等等等等于于于于19991999年年年年发发发发明明明明。此此此此技技技

16、技术术术术是是是是利利利利用用用用同同同同位位位位素素素素亲亲亲亲和和和和标标标标签签签签试试试试剂剂剂剂，预预预预先先先先选选选选择择择择性性性性地地地地标标标标记记记记某某某某一一一一类类类类蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质，分分分分离离离离纯纯纯纯化化化化之之之之后后后后进进进进行行行行MSMS鉴鉴鉴鉴定定定定。根根根根据据据据MSMS图图图图上上上上不不不不同同同同同同同同位位位位素素素素标标标标记记记记亲亲亲亲和和和和标标标标签签签签试试试试剂剂剂剂标标标标记记记记的的的的一一一一对对对对肽肽肽肽段段段段离离离离子子子子的的的的强强强强度比值度比值度比值度比值定量分析样品的定量分析样品的定量

17、分析样品的定量分析样品的相对丰度相对丰度相对丰度相对丰度。细胞工程教研室ICATICAT试剂组成：试剂组成：反应基团反应基团（特异（特异性结合肽链中半性结合肽链中半胱氨酸残基的巯胱氨酸残基的巯基）基）连接子连接子（结合稳（结合稳定同位素）定同位素）亲和标签亲和标签生物生物素（可与卵白素素（可与卵白素结合，选择性分结合，选择性分离标记的多肽）离标记的多肽）细胞工程教研室操作流程操作流程同位素标记亲和同位素标记亲和标签轻试剂标记标签轻试剂标记的细胞蛋白质的细胞蛋白质1 1同位素标记亲和同位素标记亲和标签重试剂标记标签重试剂标记的细胞蛋白质的细胞蛋白质2 2混合，混合，胰酶水解胰酶水解阳离子交换阳离

18、子交换卵白素卵白素亲和层析亲和层析LCLC分离，分离，MSMS分析，分析，数据库检索数据库检索细胞工程教研室优点优点兼容任何生长条件下的组织中的蛋白质样品；兼容任何生长条件下的组织中的蛋白质样品；兼容任何生长条件下的组织中的蛋白质样品；兼容任何生长条件下的组织中的蛋白质样品；烷基化反应高度特异；烷基化反应高度特异；烷基化反应高度特异；烷基化反应高度特异；只分离含有半胱氨酸残基的肽段，降低了体只分离含有半胱氨酸残基的肽段，降低了体只分离含有半胱氨酸残基的肽段，降低了体只分离含有半胱氨酸残基的肽段，降低了体系的复杂性；系的复杂性；系的复杂性；系的复杂性；可对膜蛋白进行鉴定和定量可对膜蛋白进行鉴定和

19、定量可对膜蛋白进行鉴定和定量可对膜蛋白进行鉴定和定量；建立在色谱技术的基础上，任何促进蛋白质建立在色谱技术的基础上，任何促进蛋白质建立在色谱技术的基础上，任何促进蛋白质建立在色谱技术的基础上，任何促进蛋白质溶解的试剂都可使用；溶解的试剂都可使用；溶解的试剂都可使用；溶解的试剂都可使用；能直接鉴定和测量低丰度的蛋白质能直接鉴定和测量低丰度的蛋白质能直接鉴定和测量低丰度的蛋白质能直接鉴定和测量低丰度的蛋白质。细胞工程教研室缺点缺点无法分析不含半胱氨酸的蛋白质无法分析不含半胱氨酸的蛋白质无法分析不含半胱氨酸的蛋白质无法分析不含半胱氨酸的蛋白质；同同同同位位位位素素素素标标标标签签签签的的的的存存存存

20、在在在在影影影影响响响响肽肽肽肽段段段段检检检检测测测测和和和和增增增增加加加加数数数数据据据据库搜索的复杂性；库搜索的复杂性；库搜索的复杂性；库搜索的复杂性；被被被被标标标标记记记记的的的的含含含含有有有有两两两两个个个个半半半半胱胱胱胱氨氨氨氨酸酸酸酸的的的的多多多多肽肽肽肽质质质质量量量量相相相相差差差差16u16u时与氧化作用很难区分；时与氧化作用很难区分；时与氧化作用很难区分；时与氧化作用很难区分；样品成分复杂时，定量误差会增大样品成分复杂时，定量误差会增大样品成分复杂时，定量误差会增大样品成分复杂时，定量误差会增大标记效率具有时间依赖性，很难达到标记效率具有时间依赖性，很难达到标记

21、效率具有时间依赖性，很难达到标记效率具有时间依赖性，很难达到80%80%。细胞工程教研室应用应用测定和定量膜蛋白测定和定量膜蛋白鉴定和定量低丰度蛋白质鉴定和定量低丰度蛋白质细胞工程教研室 ICAT技术改进用用1313C/C/1212C C代替代替2 2H/H/1 1H H，消除，消除LCLC的同位的同位素效应素效应固相同位素标记亲和标签固相同位素标记亲和标签可剪切同位素标记亲和标签（酸切可剪切同位素标记亲和标签（酸切 割或光切割）割或光切割）可裂解同位素标记亲和标签（可裂解同位素标记亲和标签（cICATcICAT）可视同位素标记亲和标签（可视同位素标记亲和标签（VICATVICAT）细胞工程教

22、研室 固相同位素标记亲和标签固相同位素标记亲和标签固相同位素标记亲和标签固相同位素标记亲和标签其是将其是将其是将其是将ICATICATICATICAT试剂与玻璃珠结合，使之试剂与玻璃珠结合，使之试剂与玻璃珠结合，使之试剂与玻璃珠结合，使之固相化固相化固相化固相化，通过固相捕捉和释放等化学反应过程，通过固相捕捉和释放等化学反应过程，通过固相捕捉和释放等化学反应过程，通过固相捕捉和释放等化学反应过程，LCLCLCLCMS-MSMS-MSMS-MSMS-MS分析蛋白质的肽段。分析蛋白质的肽段。分析蛋白质的肽段。分析蛋白质的肽段。该方法与传统的该方法与传统的该方法与传统的该方法与传统的ICATICAT

23、ICATICAT方法相比，方法相比，方法相比，方法相比，更简单，更灵更简单，更灵更简单，更灵更简单，更灵敏，更有效敏，更有效敏，更有效敏，更有效。而最大不同是固相。而最大不同是固相。而最大不同是固相。而最大不同是固相ICATICATICATICAT试剂标记试剂标记试剂标记试剂标记蛋白质是在蛋白质是在蛋白质是在蛋白质是在酶解后酶解后酶解后酶解后进行，而进行，而进行，而进行，而ICATICATICATICAT试剂标记蛋白试剂标记蛋白试剂标记蛋白试剂标记蛋白质要求在质要求在质要求在质要求在酶解前酶解前酶解前酶解前。固相同位素标签试剂由固相同位素标签试剂由固相同位素标签试剂由固相同位素标签试剂由4 4

24、 4 4部分组成，部分组成，部分组成，部分组成，氨丙基包氨丙基包氨丙基包氨丙基包被的玻璃珠被的玻璃珠被的玻璃珠被的玻璃珠、含有、含有、含有、含有O-O-O-O-硝基苯的硝基苯的硝基苯的硝基苯的光裂解连接子光裂解连接子光裂解连接子光裂解连接子、连接连接连接连接7 7 7 7个氢或个氢或个氢或个氢或7 7 7 7个氘的个氘的个氘的个氘的亮氨酸同位素标签亮氨酸同位素标签亮氨酸同位素标签亮氨酸同位素标签和巯基和巯基和巯基和巯基特异反应的特异反应的特异反应的特异反应的碘乙酰胺基团碘乙酰胺基团碘乙酰胺基团碘乙酰胺基团。细胞工程教研室 可裂解同位素标记亲和标签可裂解同位素标记亲和标签用用用用13131313

25、C/C/C/C/12121212C C C C代替了代替了代替了代替了2 2 2 2H/H/H/H/1 1 1 1H H H H使用了酸裂解连接子使用了酸裂解连接子使用了酸裂解连接子使用了酸裂解连接子不同肽段质量相差不同肽段质量相差不同肽段质量相差不同肽段质量相差9u9u9u9u或或或或9u9u9u9u的倍数的倍数的倍数的倍数亲和标签试剂由亲和标签试剂由亲和标签试剂由亲和标签试剂由3 3 3 3部分组成部分组成部分组成部分组成 半胱氨酸特异性反应基团半胱氨酸特异性反应基团半胱氨酸特异性反应基团半胱氨酸特异性反应基团 含含含含9 9 9 9个同位素个同位素个同位素个同位素13131313C C

26、C C或或或或12121212C C C C标签的可裂解连接子标签的可裂解连接子标签的可裂解连接子标签的可裂解连接子 亲和纯化生物素亲和纯化生物素亲和纯化生物素亲和纯化生物素细胞工程教研室 可视同位素标记亲和标签可视同位素标记亲和标签是在是在是在是在cICATcICATcICATcICAT技术的基础上实现绝对定量的改技术的基础上实现绝对定量的改技术的基础上实现绝对定量的改技术的基础上实现绝对定量的改进方法。进方法。进方法。进方法。亲和标签试剂由亲和标签试剂由亲和标签试剂由亲和标签试剂由3 3 3 3种不同的同位素标签组成。种不同的同位素标签组成。种不同的同位素标签组成。种不同的同位素标签组成。

27、用来标记样品的巯基标记标签（用来标记样品的巯基标记标签（用来标记样品的巯基标记标签（用来标记样品的巯基标记标签（VICATVICATVICATVICAT）标记内标多肽标签（标记内标多肽标签（标记内标多肽标签（标记内标多肽标签（14141414C-VICAT+6C-VICAT+6C-VICAT+6C-VICAT+6）等电聚焦标记标签（等电聚焦标记标签（等电聚焦标记标签（等电聚焦标记标签（14141414C-VICAT-28C-VICAT-28C-VICAT-28C-VICAT-28）细胞工程教研室细胞工程教研室 同位素标记相对定量和绝对定量同位素标记相对定量和绝对定量ICATICAT技术每次实验

28、技术每次实验技术每次实验技术每次实验只能对两个样品进行相只能对两个样品进行相只能对两个样品进行相只能对两个样品进行相对定量对定量对定量对定量。新近出现的多重元素标记的同位素标记相对新近出现的多重元素标记的同位素标记相对新近出现的多重元素标记的同位素标记相对新近出现的多重元素标记的同位素标记相对和绝对定量技术（和绝对定量技术（和绝对定量技术（和绝对定量技术（iTRAQiTRAQ）在一定程度上解）在一定程度上解）在一定程度上解）在一定程度上解决了这一问题。它是决了这一问题。它是决了这一问题。它是决了这一问题。它是20042004年由年由年由年由ABIABI公司推出公司推出公司推出公司推出的一种可以

29、同时对的一种可以同时对的一种可以同时对的一种可以同时对四组样品四组样品四组样品四组样品进行定量分析的进行定量分析的进行定量分析的进行定量分析的方法，对于实验设计比较方法，对于实验设计比较方法，对于实验设计比较方法，对于实验设计比较多组样品多组样品多组样品多组样品给予了有给予了有给予了有给予了有力的支持。力的支持。力的支持。力的支持。细胞工程教研室iTRAQiTRAQ试剂是试剂是非多聚体的等质量标记非多聚体的等质量标记试剂，试剂，是由四种试剂组成的一组试剂，这四种是由四种试剂组成的一组试剂，这四种试剂的试剂的分子量相同分子量相同。每一种试剂都包括三部分：一个每一种试剂都包括三部分：一个报告基报告

30、基团团（分子量分别为（分子量分别为114u114u、115u115u、116u116u和和117u117u）、一个）、一个平衡基团平衡基团（分子量分别为（分子量分别为31u31u、30u30u、29u29u和和28u28u）和一个）和一个与肽段反与肽段反应的基团应的基团。当我们需要同时比较四组不同样品时，当我们需要同时比较四组不同样品时，样品分别跟四种样品分别跟四种iTRAQiTRAQ试剂结合，然后混试剂结合，然后混合在一起做质谱鉴定。合在一起做质谱鉴定。细胞工程教研室细胞工程教研室与与ICATICAT试试剂剂相相比比优优点点是是通通量量大大。iTRAQiTRAQ试试剂剂对对氨氨基基的的标标记

31、记是是一一种种普普遍遍标标记记的的模模式式，它的几乎所有的肽段都能被标记。它的几乎所有的肽段都能被标记。但但是是，如如果果用用这这种种普普遍遍标标记记的的方方法法来来大大规规模模的的鉴鉴定定和和定定量量蛋蛋白白质质(理理论论上上说说，每每个个蛋蛋白白质质只只要要有有一一条条肽肽段段就就可可以以对对其其进进行行鉴鉴定定和和定定量量)，则则是是一一件件费费时时费费力力的的事事情。情。另另外外，在在iTRAQiTRAQ试试剂剂标标记记需需要要反反应应体体系系的的有有机机相相体体积积高高达达6060以以上上，蛋蛋白白质质样样品品很很容容易易发发生生沉沉淀淀而而损损失失，这这也也是是该该试试剂剂的一个弱

32、点。的一个弱点。细胞工程教研室四 针对性亲和标签技术F 磷酸化蛋白质同位素标记亲和标签PHIATPHIATPHIATPHIAT技技技技术术术术是是是是建建建建立立立立在在在在ICATICATICATICAT技技技技术术术术基基基基础础础础上上上上的的的的研研研研究究究究和和和和鉴鉴鉴鉴定定定定磷磷磷磷酸酸酸酸化化化化蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质磷磷磷磷酸酸酸酸化化化化位位位位点点点点的的的的新新新新方方方方法法法法，且对低丰度蛋白质的鉴定有效。且对低丰度蛋白质的鉴定有效。且对低丰度蛋白质的鉴定有效。且对低丰度蛋白质的鉴定有效。PHIATPHIATPHIATPHIAT试试试试剂剂剂剂含含含含有有有有

33、亲亲亲亲核核核核的的的的巯巯巯巯基基基基和和和和同同同同位位位位素素素素标标标标签签签签及及及及其共价结合的其共价结合的其共价结合的其共价结合的生物素基团。生物素基团。生物素基团。生物素基团。利利利利用用用用此此此此方方方方法法法法已已已已成成成成功功功功鉴鉴鉴鉴定定定定了了了了酪酪酪酪蛋蛋蛋蛋白白白白和和和和酵酵酵酵母母母母提提提提取取取取物的磷酸化位点。物的磷酸化位点。物的磷酸化位点。物的磷酸化位点。细胞工程教研室F选择性标记特异性氨基酸选择性标记特异性氨基酸同位素的化学探针标记同位素的化学探针标记半胱氨酸标记半胱氨酸标记色氨酸标记色氨酸标记氨基酸氨基酸N N末端标记末端标记羧基标记羧基标

34、记细胞工程教研室非同位素的化学探针标记非同位素的化学探针标记 （Label-free LC MS/MS）赖氨酸标记赖氨酸标记 质量丰度编码标签（质量丰度编码标签（质量丰度编码标签（质量丰度编码标签（MCATMCATMCATMCAT）是一种色谱标记）是一种色谱标记）是一种色谱标记）是一种色谱标记定量法。定量法。定量法。定量法。组氨酸标记组氨酸标记 利用了固相金属亲和色谱可富集含有组氨酸利用了固相金属亲和色谱可富集含有组氨酸利用了固相金属亲和色谱可富集含有组氨酸利用了固相金属亲和色谱可富集含有组氨酸的肽段的特性。的肽段的特性。的肽段的特性。的肽段的特性。甲硫氨酸标记甲硫氨酸标记细胞工程教研室五五

35、同位素标记技术应用同位素标记技术应用补充双向电泳的不足补充双向电泳的不足解决大分子复合物及相互作用问题解决大分子复合物及相互作用问题诱导发现细胞新通路机制诱导发现细胞新通路机制翻译后修饰翻译后修饰信号分子分析信号分子分析疾病分析与药物筛选疾病分析与药物筛选细胞工程教研室思考题思考题定量蛋白质组学的含义。定量蛋白质组学的含义。简述同位素标记技术的原理和方法。简述同位素标记技术的原理和方法。简述同位素标记亲和标签技术的原理。简述同位素标记亲和标签技术的原理。同位素标记亲和标签技术有哪些改进。同位素标记亲和标签技术有哪些改进。为什么同位素标记技术能够得到应用和为什么同位素标记技术能够得到应用和不断发展？不断发展？细胞工程教研室