《ELISA实验原理,方法,仪器,流程图和注意事项分析.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《ELISA实验原理,方法,仪器,流程图和注意事项分析.ppt（12页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、酶联免疫吸附实验(ELISA)目的和要求目的和要求v掌握ELISA的原理、操作过程及注意事项v了解ELISA实验结果的读取和分析实验原理实验原理v借助酶标记抗体（或抗原）在体外与抗原（或抗体）结合，通过相应底物被酶解后出现显色反应。反应颜色深浅与抗原（或抗体）量的多少有关。v特点：灵敏、特异v类型：双抗体夹心法、竞争法、间接法等 双抗夹心法双抗夹心法ELISA 竞争法竞争法 ELISAELISA实验材料实验材料vBSA包被的测定板v酶标抗鼠IgG抗体v待检血清，阳性血清，阴性血清v洗涤液：PBS吐温-20v底物液：邻苯二胺（OPD）v终止液：10%H2S04实验步骤实验步骤加入加入稀释稀释好的
2、待测血清每孔好的待测血清每孔100100ul，3737孵育孵育40min40min加入加入100ul100ul酶标抗体酶标抗体,37,37孵育孵育30min30min洗板洗板3 3次次,每次每次1min1min洗板洗板3 3次次,每次每次1min1min实验步骤实验步骤加入加入100ulTMB100ulTMB底物液避光室底物液避光室温孵育温孵育15min15min终止反应终止反应:每孔加每孔加1 1滴滴1010硫酸硫酸结果观察结果观察注意事项注意事项u加样加样：应将所加物加在：应将所加物加在ELISAELISA板孔的底部，并板孔的底部，并注意不可溅出，不可产生气泡。注意不可溅出，不可产生气泡。u洗板洗板：每次洗液加入后，应静置：每次洗液加入后，应静置1 1分钟使清洗分钟使清洗更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。u液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动轻晃动3030秒，秒，混匀混匀液体。液体。u底物有底物有毒性毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避免接触。免接触。