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1、关于血球计数板计数法第一页，本课件共有18页一、实验目的一、实验目的1、明确显微镜计数的原理。2学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。二、实验材料二、实验材料 酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管、吸水纸等。第二页，本课件共有18页三、实验原理三、实验原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0.13），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌
2、体的总和，故又称为总菌计数法。第三页，本课件共有18页 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。第四页，本课件共有18页第五页，本课件共有18页第六页，本课件共有18页 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，共400小格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，总共也是400小格。所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的。每一
3、个大方格边长为1，则每一大方格的面积为12，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1，所以计数室的容积为0.13。第七页，本课件共有18页推导：推导：1mm1mm方格的计数方格的计数1mm1mm表示计数室的边长，即一个大方格的边长。由于计数室厚度为0.1mm，所以计数室的总体积为0.1mm3。11625型的计数公式：酵母细胞个数酵母细胞个数1mL=100个小方格细胞总数个小方格细胞总数/10040010000稀释倍数稀释倍数22516型的计数公式：酵母细胞个数酵母细胞个数1mL80个小方格细胞总数个小方格细胞总数/8040010000稀释倍数稀释倍数 第八页，本课件共有18页假设：计数室
4、内酵母菌为假设：计数室内酵母菌为a个，稀释倍数为个，稀释倍数为b，则，则10mL培养液中酵母菌总数为：培养液中酵母菌总数为：a105b第九页，本课件共有18页例例4、通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为、通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm1mm0.1mm方格，由方格，由400个小方格组成，如果一个小方个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先格内酵母菌过多，难以计数，应先后再计数。若多次重复后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则个酵母菌，则10mL该培养该培养液中酵母菌总数有液中酵母菌
5、总数有个。个。（参考答案：稀释；（参考答案：稀释；2108）540010000102108。第十页，本课件共有18页例例6、在用血球计数板（在用血球计数板（2mm2mm方格）对某一稀释方格）对某一稀释50倍样倍样品进行计数时，发现在一个计数室内（盖玻片下的培养液品进行计数时，发现在一个计数室内（盖玻片下的培养液厚度为厚度为0.1mm）酵母菌平均数为）酵母菌平均数为16个，据此估算个，据此估算10mL培养液培养液中有酵母菌中有酵母菌 个。个。（参考答案：（参考答案：2107）第十一页，本课件共有18页四、操作过程四、操作过程1稀释将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。2镜检计数室在加
6、样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。第十二页，本课件共有18页3加样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。静置510分钟即可计数。第十三页，本课件共有18页4显微镜计数将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有510个菌体为宜。若选用2516规格的计数板则每个计数室选5个中方格，可选4
7、个角和中央的中格（即80个小格），若选用1625规格的计数板，则数四个角：左上、右上、左下、右下的四个中方格，（即100小格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。第十四页，本课件共有18页第十五页，本课件共有18页5.对每个样品计数三次，取其平均值，计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。各中格中菌数AB二室平均值菌数/ml12345第一室第二室A-五个中方格的总菌数B-稀释倍数第十六页，本课件共有18页6清洗血球计数板 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。第十七页，本课件共有18页感感谢谢大大家家观观看看第十八页，本课件共有18页