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1、生长与繁殖的概念第1页，本讲稿共23页l个体生长个体生长微生物细胞个体吸收营养物质，微生物细胞个体吸收营养物质，进行新陈代谢，原生质与细胞组分的增加进行新陈代谢，原生质与细胞组分的增加为个体生长。为个体生长。l群体生长群体生长群体中个体数目的增加。可以群体中个体数目的增加。可以用重量、体积、密度或浓度来衡量。用重量、体积、密度或浓度来衡量。（由（由于微生物的个体极小，所以常用群体生长于微生物的个体极小，所以常用群体生长来反映个体生长的状况）来反映个体生长的状况）个体生长个体生长个体繁殖个体繁殖 群体生长群体生长群体生长群体生长 =个体生长个体生长 +个体繁殖个体繁殖第2页，本讲稿共23页l纯培
2、养纯培养(pure culture)(pure culture)微生物学中把从微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代而得到的后代,称纯培养称纯培养.一、获得纯培养的方法一、获得纯培养的方法液体稀释法液体稀释法平板划线分离法（平板划线分离法（Streak PlateStreak Plate）倾注平板法（倾注平板法（Pour PlatePour Plate）平板涂布分离法（平板涂布分离法（Spread PlateSpread Plate）选择性培养分离法选择性培养分离法单细胞（单孢子）分离法单细胞（单孢子）分离法膜过滤（膜过滤（Membr
3、ane FilterMembrane Filter）第3页，本讲稿共23页 首先将待分离的样品进行连续稀释首先将待分离的样品进行连续稀释,目的是得到高度稀释目的是得到高度稀释的效果的效果,使一支试管中分配不到一个微生物使一支试管中分配不到一个微生物.如果经过稀释后的如果经过稀释后的大多数试管中没有微生物生长大多数试管中没有微生物生长,那么有微生物生长的试管得到那么有微生物生长的试管得到的培养物可能就是由一个微生物个体繁殖而来的纯培养物的培养物可能就是由一个微生物个体繁殖而来的纯培养物.这种方法适合于细胞较大的微生物这种方法适合于细胞较大的微生物.液体液体稀释法稀释法第4页，本讲稿共23页平板划
4、线分离法（平板划线分离法（Streak PlateStreak Plate）An inoculating loop is used to thin out organisms on the surface of the agar.特点：快速、方便。特点：快速、方便。分区划线（适用于分区划线（适用于浓度较大浓度较大的样品）的样品）连续划线（适用于连续划线（适用于浓度较小浓度较小的样品）的样品）第5页，本讲稿共23页连续划线连续划线划线分离后平板上显示划线分离后平板上显示的菌落照片的菌落照片第6页，本讲稿共23页倾注平板法（倾注平板法（Pour PlatePour Plate）Organisms
5、are serially diluted,then asmall amount is added to an empty sterile petri dish,to which melted agar at 50 C isadded.Then mix to distribute the organisms.1ml1ml9ml1ml9ml第7页，本讲稿共23页平板涂布分离法（平板涂布分离法（Spread PlateSpread Plate）Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile bent glas
6、s rod.简单易行，但易造成机械损伤简单易行，但易造成机械损伤第8页，本讲稿共23页选择性培养分离法选择性培养分离法 为了从混杂的微生物群体中分离出某种微生物，可以根为了从混杂的微生物群体中分离出某种微生物，可以根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用选据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用选择培养的方法进行分离。择培养的方法进行分离。利用选择培养基进行直接分离利用选择培养基进行直接分离富集培养富集培养第9页，本讲稿共23页单细胞（单孢子）分离法单细胞（单孢子）分离法 采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个
7、体进行培养以获得纯培养的方法。该方法要在显微镜下进行。体进行培养以获得纯培养的方法。该方法要在显微镜下进行。毛细管法：毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微生物。用毛细管提取微生物个体，适合于较大微生物。显微操作仪：显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢子以获用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢子以获得纯培养。得纯培养。小液滴法：小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在显微镜将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的分离。下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的分离。第10页，本讲稿共23页Membrane Filter When t
8、here is a small number of organisms in a large amount of liquid,the liquid is filtered through a mem-brane and then the membrane is placed on agarin a petri dish.第11页，本讲稿共23页二、测定生长繁殖的方法二、测定生长繁殖的方法描述不同种类、不同生长状态的微生物生长情况，需描述不同种类、不同生长状态的微生物生长情况，需选用不同的测定指标。选用不同的测定指标。（一）微生物生长量和生理指标测定法（一）微生物生长量和生理指标测定法直接法直
9、接法 (测体积法，干重法测体积法，干重法)间接法间接法（比浊法，碳、氮含量法，其它生理指标）（比浊法，碳、氮含量法，其它生理指标）（二）微生物细胞数目的检测法（二）微生物细胞数目的检测法直接法直接法（血球计数板法）（血球计数板法）间接法间接法（活菌计数法、（活菌计数法、液体稀释法、膜过滤法液体稀释法、膜过滤法）第12页，本讲稿共23页1.干重法干重法 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来出来,然后烘干然后烘干(干燥温度可采用干燥温度可采用105、100或或80)、称重。一般干重为湿重的、称重。一般干重为湿重的10-20%，而一，而一个细菌细胞一般
10、重约个细菌细胞一般重约10-12-10-13g。该法适合菌浓度较高的样品。该法适合菌浓度较高的样品。第13页，本讲稿共23页2.比浊法比浊法 原理是在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度原理是在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌数越多，光密度越大。因成正比，即与光密度成正比，菌数越多，光密度越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下（此，借助于分光光度计，在一定波长下（450650nm）测定菌测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。特点：快速、简便；但易受干扰。特点：快速、简便；但易受干扰。第14页，本讲稿共23页3.生理
11、指标法生理指标法测含氮量测含氮量 蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成分，通过测含氮量就可推知微生物的浓度。分，通过测含氮量就可推知微生物的浓度。一般一般细菌含氮量为干重的细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为，酵母菌为7.5%，霉菌为，霉菌为6.0%，根据一定体积培养液中的含氮量再乘以，根据一定体积培养液中的含氮量再乘以6.25，就可测得粗，就可测得粗蛋白的含量蛋白的含量。其他方法其他方法 含碳、磷、含碳、磷、DNADNA、RNARNA、耗氧量、消耗底物量、产二氧化碳、耗氧量、消耗底物量、产二氧化碳、产酸、产热、粘度等，
12、都可用于生长量的测定。产酸、产热、粘度等，都可用于生长量的测定。第15页，本讲稿共23页4.4.血球计数板法血球计数板法第16页，本讲稿共23页（1 1）16251625规格的计数板规格的计数板计数方法：计数方法：（2 2）25162516规格的计数板规格的计数板第17页，本讲稿共23页原理：将1mm20.1mm的薄层空间划分为400小格，从中均匀分布地选取80或100小格，计数其中的细胞数目，换算成单位体积中的细胞数。适用范围：个体较大细胞或颗粒，如霉菌孢子、酵母菌等，不适用于细菌等个体较小的细胞。特点：快速，准确，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。缺点：测
13、定结果为细菌总数，不能区分活菌和死菌。第18页，本讲稿共23页5.5.涂片染色法涂片染色法应用：可同时计数不同微生物的菌数，适于土壤、牛奶中细菌计数。方法：用镜台测微尺计算出视野面积；取 0.1ml菌液涂于1cm2面积上，计数后代 入公式：每ml原菌液含菌数=视野中平均菌数 涂布面积/视野面积100 稀释倍数第19页，本讲稿共23页第20页，本讲稿共23页6.平板菌落计数法平板菌落计数法技术要求：样品充分混匀，操作熟练快速（技术要求：样品充分混匀，操作熟练快速（1520min完成操完成操作），严格无菌操作；作），严格无菌操作；注意事项：每一支吸管只能用于一个稀释度，样品混匀处理，倾注意事项：每
14、一支吸管只能用于一个稀释度，样品混匀处理，倾注平板时的培养基温度；注平板时的培养基温度；适用范围：中温、好氧和兼性厌氧、能在营养琼脂上生长的微生适用范围：中温、好氧和兼性厌氧、能在营养琼脂上生长的微生物，物，误差：多次稀释造成的误差是主要来源，其次还有由于样品内误差：多次稀释造成的误差是主要来源，其次还有由于样品内菌体分布不均匀、以及不当操作菌体分布不均匀、以及不当操作第21页，本讲稿共23页Colony-Forming UnitWhen we observe colonies,we cannot assume each arose from just one cell originally
15、plan-ted on the medium,however.A pair,chain or cluster of ce-lls which land on the medium in close proximity to each o-ther can multiply and prod-uce a single colony.Thus,we use the term colony-forming unit when we consider the common origin for the cells of any colony.This term is us-ually abbreviated CFU.第22页，本讲稿共23页请 提 宝 贵 意 见谢 谢第23页，本讲稿共23页