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1、溶血性链球菌第1页，本讲稿共51页 溶血性链球菌又称沙培林溶血性链球菌又称沙培林对对热热和和化学清毒剂化学清毒剂均敏感均敏感,常引常引起扁桃体、咽部、中耳等感染。起扁桃体、咽部、中耳等感染。亦为肾盂肾炎、产褥热、猩红热亦为肾盂肾炎、产褥热、猩红热的病原体。的病原体。第2页，本讲稿共51页一、一、生物学特性生物学特性二、流行病学二、流行病学三、三、致病性致病性五、五、检验和控制检验和控制四、四、抵抗力抵抗力第3页，本讲稿共51页1、形态与染色、形态与染色链球菌呈链球菌呈球形球形或或椭圆形椭圆形，直径，直径0.6-1.0m，呈，呈链状排列，链状排列，长短不一长短不一，从，从4-8个至个至20-30
2、个菌细胞组成不等，链的长个菌细胞组成不等，链的长短与细菌的种类及生长环境有关。短与细菌的种类及生长环境有关。在液体培养基中易呈在液体培养基中易呈长链长链，固体培养基中常呈短链固体培养基中常呈短链，由于链球菌能产生，由于链球菌能产生脱脱链酶链酶，所以正常情况下链球菌的链，所以正常情况下链球菌的链不能无限制的延长不能无限制的延长。多数菌株在多数菌株在血清肉汤中血清肉汤中培养培养2-4h易易形成透明质酸的荚膜，继续培养形成透明质酸的荚膜，继续培养后消失。该菌不形成后消失。该菌不形成芽胞，无鞭毛，芽胞，无鞭毛，易被普通的碱性染料着色，革兰氏易被普通的碱性染料着色，革兰氏阳性阳性，老龄培养或被中性粒细胞
3、，老龄培养或被中性粒细胞吞噬后，转为革兰氏阴性。吞噬后，转为革兰氏阴性。第4页，本讲稿共51页2、培养特征、培养特征需氧需氧或或兼性厌氧菌兼性厌氧菌，营养要求较高营养要求较高，普通培养基普通培养基上生长不良，上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大多数菌株需补充血清、血液、腹水，大多数菌株需核黄素、维生素需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。最适生长温度、烟酸等生长因子。最适生长温度为为37，在，在20-42能生长能生长，最适，最适pH为为7.4-7.6。在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉淀在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉淀生长。生长。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边
4、缘整在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落，不同菌株溶血不一。的细小菌落，不同菌株溶血不一。第5页，本讲稿共51页3、生化反应、生化反应分解葡萄糖，产酸不产气，对分解葡萄糖，产酸不产气，对乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨醇、乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨醇、棉子糖、蕈糖、七叶苷的分解能力棉子糖、蕈糖、七叶苷的分解能力因不同菌株而异。一般不分解菊糖，因不同菌株而异。一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，触酶阴性。不被胆汁溶解，触酶阴性。第6页，本讲稿共51页4、抗原结构、抗原结构链球菌的抗原构造较复杂，主要有三种：链球菌的抗原构造较复杂，主要有三种：（1）核蛋
5、白抗原核蛋白抗原或称或称P抗原，无特异性，各种抗原，无特异性，各种链球菌均相同。链球菌均相同。（2）多糖抗原多糖抗原或称或称C抗原，系群特异性抗原，抗原，系群特异性抗原，是细胞壁的多糖组分，可用稀盐酸等提取。是细胞壁的多糖组分，可用稀盐酸等提取。（3）蛋白质抗原蛋白质抗原或称表面抗原，具有型特异或称表面抗原，具有型特异性，位于性，位于C抗原外层，其中可分为抗原外层，其中可分为M、T、R、S四种不同性质的抗原成分，与致病性有关的是四种不同性质的抗原成分，与致病性有关的是M抗抗原。原。第7页，本讲稿共51页5、分类、分类根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血及其根据链球菌在血液培养基上生长繁殖
6、后是否溶血及其溶血性质分为三类。溶血性质分为三类。（1）-溶血性链球菌溶血性链球菌：菌落周围有：菌落周围有1-2mm宽的宽的草绿色溶草绿色溶血环血环，也称甲型溶血，这类链球菌多为，也称甲型溶血，这类链球菌多为条件致病菌。条件致病菌。（2）-溶血性链球菌溶血性链球菌：菌落周围形成一个：菌落周围形成一个2-4mm宽、界宽、界限分明、完全透明的限分明、完全透明的无色溶血环无色溶血环，也称乙型溶血，因而这，也称乙型溶血，因而这类菌亦称为溶血性链球菌，该菌的类菌亦称为溶血性链球菌，该菌的致病力强致病力强，常引起人类和，常引起人类和动物的多种疾病。动物的多种疾病。（3）-链球菌链球菌：不产生溶血素不产生溶
7、血素，菌落周围无溶血环，也，菌落周围无溶血环，也称为丙型或不溶血性链球菌，该菌称为丙型或不溶血性链球菌，该菌无致病性无致病性，常存在于乳，常存在于乳类和粪便中，偶尔也引起感染类和粪便中，偶尔也引起感染。第8页，本讲稿共51页溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、奶、肉、蛋及其制品蛋及其制品也会对人类进行感
8、染。上呼吸道感染患者、人畜化也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。一般来说，溶血性链脓性感染部位常成为食品污染的污染源。一般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品：球菌常通过以下途径污染食品：1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食品的污染；品的污染；2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染；其奶和肉尸某些部位污染；3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。、熟食制品因
9、包装不善而使食品受到污染。流行病学流行病学第9页，本讲稿共51页溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热、行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热、肾小球肾炎。肾小球肾炎。溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵袭溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵袭性酶有关，主要有以下几种：性酶有关，主要有以下几种：1、链球菌溶血素链球菌溶血素：溶血素有：溶血素有O和和S两种，两种，O为为含有含有-SH的蛋白质，具有抗原性，的蛋白质，具有抗原
10、性，S为小分子多肽，为小分子多肽，分子量较小，故无抗原性。分子量较小，故无抗原性。2、致热外毒素致热外毒素：曾称红疹毒素或猩红热毒素，：曾称红疹毒素或猩红热毒素，是人类猩红热的主要毒性物质，会引起局部或全是人类猩红热的主要毒性物质，会引起局部或全身红疹、发热、疼痛、恶心、呕吐、周身不适。身红疹、发热、疼痛、恶心、呕吐、周身不适。致致病病性性第10页，本讲稿共51页3、透明质酸酶透明质酸酶：又称扩散因子，能分解细：又称扩散因子，能分解细胞间质的透明质酸，故能增加细菌的侵袭胞间质的透明质酸，故能增加细菌的侵袭力，使病菌易在组织中扩散。力，使病菌易在组织中扩散。4、链激酶链激酶：又称链球菌纤维蛋白溶
11、酶，能使：又称链球菌纤维蛋白溶酶，能使血液中纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，具有增血液中纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，具有增强细菌在组织中的扩散作用，该酶耐热，强细菌在组织中的扩散作用，该酶耐热，10050分钟仍可保持活性。分钟仍可保持活性。5、链道酶链道酶：又称链球菌：又称链球菌DNA酶，能使脓液酶，能使脓液稀薄，促进病菌扩散。稀薄，促进病菌扩散。6、杀白细胞素杀白细胞素：能使白细胞失去动力，变：能使白细胞失去动力，变成球形，最后膨胀破裂。成球形，最后膨胀破裂。第11页，本讲稿共51页抵抗力抵抗力该菌该菌抵抗力一般不强抵抗力一般不强，6030min即被即被杀死，对常用杀死，对常用消毒剂敏感消毒剂敏
12、感，在干燥尘埃中，在干燥尘埃中生存数月。乙型链球菌对青霉素、红霉素、生存数月。乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺均敏感。氯霉素、四环素、磺胺均敏感。青霉素青霉素是是链球菌感染的首选药物，很少有耐药性。链球菌感染的首选药物，很少有耐药性。第12页，本讲稿共51页第13页，本讲稿共51页设备和材料设备和材料1冰箱：冰箱：O4。2恒温培养箱：恒温培养箱：36士士1。3恒温恒温水浴水浴锅：锅：36土土1。4显微镜：显微镜：10*l00*。5均质器均质器或灭菌乳钵。或灭菌乳钵。6离心机离心机：4000r/min。7架盘药物天平：架盘药物天平：0g5009，精确至，精确至0.5g。8灭菌灭菌
13、试管试管：10mm*100mm、l6mm*160mm。9灭菌灭菌吸管吸管：1mL（具（具0.01mL刻度）、刻度）、5mL、10mL（具（具1mL刻度）。刻度）。10灭菌锥形瓶：灭菌锥形瓶：100mL。11灭菌培养皿：直径灭菌培养皿：直径90mm。12灭菌棉签、镊子等。灭菌棉签、镊子等。第14页，本讲稿共51页培养基和试剂培养基和试剂1葡萄糖肉浸液肉汤：按葡萄糖肉浸液肉汤：按GB/T4789.28一一2003中中4.1规定。规定。在肉浸液肉汤内加人在肉浸液肉汤内加人1葡萄糖。葡萄糖。2肉浸液肉汤肉浸液肉汤：按：按GB/T4789.28一一2003中中4.1规定。规定。3匹克氏肉汤匹克氏肉汤：按
14、：按GB/T4789.28一一2003中中4.62规定。规定。4血血琼脂琼脂平板：按平板：按GB/T4789.28一一2003中中4.6规定。规定。5人血浆。人血浆。60.25%氯化钙。氯化钙。70.85灭菌生理盐水。灭菌生理盐水。8杆菌肤药敏纸片（含杆菌肤药敏纸片（含0.04单位）。单位）。第15页，本讲稿共51页第16页，本讲稿共51页第17页，本讲稿共51页匹克氏肉汤匹克氏肉汤含含1%胰蛋白胨的牛心浸液胰蛋白胨的牛心浸液200mL1：25000结晶紫盐水溶液结晶紫盐水溶液10mL1：800三氮化钠溶液三氮化钠溶液10mL脱纤维兔血脱纤维兔血(或羊血或羊血)10mL制法制法：将上述已灭菌的
15、各种成分，用无菌手将上述已灭菌的各种成分，用无菌手续依次混合，分装于无菌试管内，每管约续依次混合，分装于无菌试管内，每管约2mL，保存于冰箱内备用，保存于冰箱内备用第18页，本讲稿共51页血平板：菌落为灰白色，半透明或不透明，表血平板：菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约面光滑，有乳光，直径约0.50.75mm，为，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血性链球菌周围圆形突起的细小菌落，乙型溶血性链球菌周围有有24mm界限分明、无色透明的溶血圈。界限分明、无色透明的溶血圈。第19页，本讲稿共51页制法：取制法：取营养琼脂营养琼脂（PH76），加热使其溶），加热使其溶解待冷至解待冷至45
16、-50，以灭菌操作于每，以灭菌操作于每100毫升毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。成斜面备用。配方：配方：pH7.4-7.6豆粉琼脂豆粉琼脂100ml脱纤维羊血脱纤维羊血510ml血琼脂平板（血琼脂平板（BA）亦可用其它营养丰富的基础培养基配制血琼脂。亦可用其它营养丰富的基础培养基配制血琼脂。第20页，本讲稿共51页1、样品处理样品处理：取：取25g固体（或固体（或25mL液体）检样液体）检样加入加入225mL灭菌生理盐水，制成混悬液。灭菌生理盐水，制成混悬液
17、。2、吸取、吸取5mL混悬液接种至混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸液肉葡萄糖肉浸液肉汤，或直接划线于血平板（如检样污染严重，汤，或直接划线于血平板（如检样污染严重，可同时接种可同时接种5mL至匹克氏肉汤），至匹克氏肉汤），36培养培养24h，接种血平板，接种血平板，36培养培养24h,挑起乙型溶血圆形挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，观察在液体突起的细小菌落，在血平板上分纯，观察在液体和固体中的培养特征、溶血情况及革兰氏染色、和固体中的培养特征、溶血情况及革兰氏染色、形态，并进行链激酶试验和杆菌肽敏感试验。形态，并进行链激酶试验和杆菌肽敏感试验。（一）检验（一）检验第21页，本讲稿
18、共51页葡萄糖肉浸液肉汤葡萄糖肉浸液肉汤原原理：理：蛋白胨、牛肉浸出粉提供氮源、蛋白胨、牛肉浸出粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钾为缓冲剂；衡的渗透压；磷酸氢二钾为缓冲剂；葡萄糖提供碳源葡萄糖提供碳源。配方（每升）：配方（每升）：牛肉(提取浸出粉)500g氯化钠 5g蛋白胨 10g磷酸氢二钾 2g葡萄糖10g最终最终pH 7.50.2 将绞碎之去筋膜无油脂牛肉将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒夜，除去液面之浮油，隔水煮
19、沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正和磷酸盐，溶解后校正pH7.47.6煮沸并过滤，分装烧瓶，煮沸并过滤，分装烧瓶，121高高压灭菌压灭菌30min。第22页，本讲稿共51页4、杆菌肽敏感试验杆菌肽敏感试验：取典型菌落的菌液涂布于血：取典型菌落的菌液涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌单位的杆菌肽纸片置于上述平板上，肽纸片置于上述平板上，36培养培养18-24h，如有，如有抑菌圈出现即为阳性。用已知的阳性菌株
20、做对照。抑菌圈出现即为阳性。用已知的阳性菌株做对照。第23页，本讲稿共51页3、链激酶试验链激酶试验：吸取草酸钾血浆：吸取草酸钾血浆0.2mL，加，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌18-24h36肉浸液肉汤培养物肉浸液肉汤培养物0.5mL及及0.25%氯化钙氯化钙0.25mL，混匀，置于，混匀，置于36水浴水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用
21、已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。第24页，本讲稿共51页第26页，本讲稿共51页第27页，本讲稿共51页第28页，本讲稿共51页第29页，本讲稿共51页报告第30页，本讲稿共51页第31页，本讲稿共51页第32页，本讲稿共51页第33页，本讲稿共51页第34页，本讲稿共51页第35页，本讲稿共51页第36页，本讲稿共51页第37页，本讲稿共51页第38页，本讲稿共51页第39页，本讲稿共51页第40页，本讲稿共51页第41页，本讲稿共51页第42页，本讲稿共51页第43页，本讲稿共51页第44页，本讲稿共51页第45页，本讲稿共51页第46页，本讲稿共51页第47页，本讲稿共51页第48页，本讲稿共51页第49页，本讲稿共51页第50页，本讲稿共51页第51页，本讲稿共51页