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1、梅毒实验检测检验科第1页，本讲稿共32页梅毒概况梅毒概况梅梅毒毒是是由由梅梅毒毒螺螺旋旋体体引引起起的的一一种种慢慢性性、系系统统性性性性传传播播疾疾病病。人人体体受受感感染染后后，螺螺旋旋体体很很快快播播散散到到全全身身，几几乎乎可可侵侵犯犯全全身身各各组组织织与与器器官官，临临床床表表现现多多种种多多样样，且且时时显时隐，病程较长显时隐，病程较长中中华华人人民民共共和和国国传传染染病病防防治治法法规规定定要要管管理理的的性性病病是是艾艾滋滋病病、淋淋病病和和梅梅毒毒，应应加加以以重重点点防防治治。卫卫生生部部性性病病防防治治管管理理办办法法则则规规定定除除上上述述3 3种种病病以以外外，还
2、还有有生生殖殖器器疱疱疹疹、尖尖锐锐湿湿疣疣、软软下下疳疳、非非淋淋菌菌性性尿尿道道炎炎（NGU）、性性病病淋淋巴巴肉芽肿均为监测性疾病肉芽肿均为监测性疾病梅梅毒毒早早期期主主要要侵侵犯犯皮皮肤肤及及粘粘膜膜，晚晚期期除除侵侵犯犯皮皮肤肤、粘粘膜膜外外，还还可可侵侵犯犯心心脏脏血血管管系系统统及及中中枢枢神神经经系系统统等等全全身身各各个个系系统统；另另一一方方面，梅毒又可多年无症状而呈潜伏状态面，梅毒又可多年无症状而呈潜伏状态第2页，本讲稿共32页梅毒的分期梅毒的分期一一期期梅梅毒毒：主主要要表表现现为为单单个个、无无痛痛性性的的硬硬下下疳疳，通通常常在在感感染梅毒螺旋体后染梅毒螺旋体后34
3、周出现周出现二二期期梅梅毒毒：一一期期梅梅毒毒不不经经治治疗疗，梅梅毒毒螺螺旋旋体体在在几几周周至至几几个个月月后后会会播播散散至至血血液液中中，引引起起二二期期梅梅毒毒。二二期期梅梅毒毒的的临临床床表表现现多多种种多多样样，常常见见的的有有发发热热、淋淋巴巴结结病病、弥弥漫漫性性皮皮疹疹、生生殖殖道道或或会会阴阴湿湿疣疣等等。一、二期梅毒统称为早期梅毒一、二期梅毒统称为早期梅毒三三期期或或晚晚期期梅梅毒毒：一一般般在在最最初初感感染染的的数数年年至至十十数数年年后后发发生生，可可累累及任何器官，常见的有梅毒瘤性梅毒、心血管梅毒及神经梅毒及任何器官，常见的有梅毒瘤性梅毒、心血管梅毒及神经梅毒隐
4、隐性性梅梅毒毒：无无症症状状但但梅梅毒毒血血清清学学试试验验呈呈阳阳性性。分分为为早早期期隐隐性性梅梅毒毒（病程一年以内）和晚期隐性梅毒（病程一年以上）（病程一年以内）和晚期隐性梅毒（病程一年以上）第3页，本讲稿共32页生物学特性生物学特性n梅毒螺旋体即苍白密螺旋体的苍白亚种，人是其唯一宿主。直径梅毒螺旋体即苍白密螺旋体的苍白亚种，人是其唯一宿主。直径0.10.15m，全长，全长7-8m。在电镜下可见有细胞壁和细胞膜。新鲜。在电镜下可见有细胞壁和细胞膜。新鲜标本在暗视野显微镜下可观察其形态和活泼的运动方式。标本在暗视野显微镜下可观察其形态和活泼的运动方式。n梅毒螺旋体主要有两种抗原：梅毒螺旋体
5、主要有两种抗原：1、密螺旋体抗原即梅毒螺旋体表面的特异、密螺旋体抗原即梅毒螺旋体表面的特异抗原，与雅司、地方性梅毒、品他病等抗原，与雅司、地方性梅毒、品他病等3种密螺旋体有共同抗原，可交叉反应。种密螺旋体有共同抗原，可交叉反应。2、非螺旋体抗原即磷脂类抗原，可刺激机体产生反应素，其与牛心、非螺旋体抗原即磷脂类抗原，可刺激机体产生反应素，其与牛心肌的心脂质抗原发生反应，此法敏感性高，但有假阳性。肌的心脂质抗原发生反应，此法敏感性高，但有假阳性。n梅毒螺旋体对外界的抵抗力极弱，离体后梅毒螺旋体对外界的抵抗力极弱，离体后12小时即死亡，对热和干燥特别小时即死亡，对热和干燥特别敏感，在体外干燥环境下敏
6、感，在体外干燥环境下12小时或加小时或加1.5经经1小即死亡。血液中小即死亡。血液中4放放置置3天可死亡，因此天可死亡，因此4血库存放血库存放3天以上的血液无传染梅毒的危险。对肥天以上的血液无传染梅毒的危险。对肥皂水和常用化学消毒剂亦敏感，皂水和常用化学消毒剂亦敏感，1%-2%石炭酸内数分钟就死亡。石炭酸内数分钟就死亡。n梅毒的免疫属感染性免疫，有梅毒螺旋体感染时才有免疫力，一旦螺旋体被梅毒的免疫属感染性免疫，有梅毒螺旋体感染时才有免疫力，一旦螺旋体被杀灭，其免疫力随之消失。机体对梅毒螺旋体感染可产生细胞免疫和体液免杀灭，其免疫力随之消失。机体对梅毒螺旋体感染可产生细胞免疫和体液免疫反应，体液
7、免疫中有两种抗体：一种是梅毒特异性抗体，主要是疫反应，体液免疫中有两种抗体：一种是梅毒特异性抗体，主要是IgG、IgM，对螺旋体有制动作用，当有补体存在时，可将其杀死和溶解，对机体的，对螺旋体有制动作用，当有补体存在时，可将其杀死和溶解，对机体的再感染有保护作用。另一种是抗脂质抗体的反应素，为再感染有保护作用。另一种是抗脂质抗体的反应素，为IgG和和IgM的混合物，的混合物，对机体无保护作用。对机体无保护作用。第4页，本讲稿共32页期梅毒病人取硬下疳渗出液，期梅毒病人取硬下疳渗出液，期梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴抽出液。期梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴抽出液。对对期梅毒末期以后（大约感染期梅毒末
8、期以后（大约感染34周以后）的病人可分离血清检查有无梅周以后）的病人可分离血清检查有无梅毒螺旋体抗体和反应素。毒螺旋体抗体和反应素。检验方法：检验方法：1、显微镜镜检显微镜镜检渗出液涂片后可直接用暗视野显微镜检。直接镜检适合渗出液涂片后可直接用暗视野显微镜检。直接镜检适合期梅毒的检查。（现已经不常用）期梅毒的检查。（现已经不常用）2、血清学试验血清学试验包括非螺旋体抗体和密螺旋体抗体两类包括非螺旋体抗体和密螺旋体抗体两类1）非螺旋体抗体试验（非螺旋体抗体试验（NtrAT）用正常牛心肌脂质作为抗原，测定病人血清用正常牛心肌脂质作为抗原，测定病人血清中的反应素。均为初筛试验。中的反应素。均为初筛试
9、验。2）密螺旋体抗体试验（密螺旋体抗体试验（TrAT）采用采用Nichols株梅毒螺旋体作为抗原，测定血清株梅毒螺旋体作为抗原，测定血清中梅毒螺旋体特异抗体，特异性强，可用作梅毒证实试验。中梅毒螺旋体特异抗体，特异性强，可用作梅毒证实试验。送检标本和检验方法送检标本和检验方法第5页，本讲稿共32页梅毒的治疗梅毒的治疗非口服途径的青霉素可用于各期梅毒的治疗非口服途径的青霉素可用于各期梅毒的治疗早早期期梅梅毒毒的的治治疗疗首首选选240240万万单单位位苄苄星星青青霉霉素素G G单单次次肌肌肉肉注注射射。对对青青霉霉素素过过敏敏者者，替替代代治治疗疗方方案案有有强强力力霉霉素素（口口服服，100m
10、g一一次次，每每日日2次次，持持续续2周周）或或四四环环素素（口服，（口服，500mg一次，每日一次，每日4次，持续次，持续2周）周）早早期期隐隐性性梅梅毒毒的的治治疗疗方方案案与与早早期期梅梅毒毒相相同同。晚晚期期隐隐性性梅梅毒毒的的首首选选治治疗疗方方案案为为每每周周一一次次肌肌肉肉注注射射240万万单单位位苄苄星星青青霉霉素素G，持持续续3周周；对对青青霉霉素素过过敏敏者者，替替代代治治疗疗方方案案有有强强力力霉霉素素（口口服服，100mg一一次次，每每日日2次次，持持续续4周周）或或四四环环素素（口口服服，500mg一一次，每日次，每日4次，持续次，持续4周）周）合并合并HIV感染者的
11、治疗方案同晚期隐性梅毒感染者的治疗方案同晚期隐性梅毒梅梅毒毒瘤瘤性性梅梅毒毒和和心心血血管管梅梅毒毒的的治治疗疗方方案案与与晚晚期期隐隐性性梅梅毒毒相相同同。神神经经梅梅毒毒的的治治疗疗只只能能采采用用青青霉霉素素，具具体体方方案案为为静静脉脉注注射射水水溶溶性性青青霉霉素素G（每每4小小时时300万万400万万单单位位，持持续续1014天天）或或肌肌肉肉注注射射普普鲁鲁卡卡因因青青霉霉素素G（240万万单单位位一一天天，持持续续1014天天）同同时口服丙磺舒（时口服丙磺舒（500mg一次，每日一次，每日4次，持续次，持续1014天）天）孕妇的治疗只能采用青霉素，青霉素过敏者需经脱敏后再进行治
12、疗孕妇的治疗只能采用青霉素，青霉素过敏者需经脱敏后再进行治疗第6页，本讲稿共32页暗视野显微镜检查法暗视野显微镜检查法：主要的梅毒病原学诊断方法。是最特异的一期梅：主要的梅毒病原学诊断方法。是最特异的一期梅毒检测方法。取材部位以硬下疳为主，亦可从宫颈、阴道、淋巴结等毒检测方法。取材部位以硬下疳为主，亦可从宫颈、阴道、淋巴结等处取材。阳性可确诊，阴性不能排除梅毒（须在处取材。阳性可确诊，阴性不能排除梅毒（须在3周内不同的周内不同的3天采样天采样检测，才能得出阴性结果）。暗视野显微镜法诊断的准确性受操作检测，才能得出阴性结果）。暗视野显微镜法诊断的准确性受操作者的经验、病灶中活螺旋体的数量及口腔、
13、肛门破损处存在的非致者的经验、病灶中活螺旋体的数量及口腔、肛门破损处存在的非致病性螺旋体等因素影响病性螺旋体等因素影响镀银染色法镀银染色法：与暗视野检查法的临床意义基本相同。利用梅毒螺旋体具有：与暗视野检查法的临床意义基本相同。利用梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染成棕黑色，再通过普通高倍显微镜进行观察亲银性，可被银溶液染成棕黑色，再通过普通高倍显微镜进行观察直接免疫荧光法（直接免疫荧光法（DFA)：是目前国外采用较多的方法，其特异性及是目前国外采用较多的方法，其特异性及敏感性均优于暗视野检查法。将特异性的抗梅毒螺旋体单克隆抗体敏感性均优于暗视野检查法。将特异性的抗梅毒螺旋体单克隆抗体用荧光素
14、标记，如标本中存在梅毒螺旋体，则通过抗原抗体特异性用荧光素标记，如标本中存在梅毒螺旋体，则通过抗原抗体特异性结合，在荧光显微镜下可见到发苹果绿色的梅毒螺旋体。此法可区结合，在荧光显微镜下可见到发苹果绿色的梅毒螺旋体。此法可区分梅毒螺旋体和其他非致病性或条件致病性螺旋体分梅毒螺旋体和其他非致病性或条件致病性螺旋体梅毒的病原学检测（一）梅毒的病原学检测（一）第7页，本讲稿共32页聚合酶链反应（聚合酶链反应（PCR）：PCR能对生殖器溃疡进行早期的鉴别诊断，区能对生殖器溃疡进行早期的鉴别诊断，区分梅毒、生殖器疱疹和软下疳。它又可分为分梅毒、生殖器疱疹和软下疳。它又可分为PCR和和RT-PCR。PCR
15、的设的设计主要针对编码梅毒螺旋特异性抗原和计主要针对编码梅毒螺旋特异性抗原和TpN47的的DNA开放编码区，常开放编码区，常见的引物有见的引物有K03A、K04、47-1、47-2、47-3、47-4等。由于在等。由于在PCR中中会偶然出现非特异的会偶然出现非特异的PCR产物而干扰结果，这就必须用特异性的产物而干扰结果，这就必须用特异性的DNA探针进行探针进行DNA-DNA杂交来提高杂交来提高PCR的特异性及敏感性。此外，的特异性及敏感性。此外，由于由于TpN47的保守性，雅司螺旋体可产生类似的的保守性，雅司螺旋体可产生类似的PCR产物，所以这产物，所以这种设计的种设计的PCR不能区分梅毒和雅
16、司；但可以区分梅毒螺旋体和引博不能区分梅毒和雅司；但可以区分梅毒螺旋体和引博氏疏螺旋体，这就可以解决梅毒与莱姆病之间血清诊断中的免疫交氏疏螺旋体，这就可以解决梅毒与莱姆病之间血清诊断中的免疫交叉问题。另一种是叉问题。另一种是RT-PCR，常见的设计是针对梅毒螺旋体的，常见的设计是针对梅毒螺旋体的16s rRNA 366bp片段，这种方法污染少，特异性敏感性高，但价格稍高。片段，这种方法污染少，特异性敏感性高，但价格稍高。PCR在梅毒持续感染中的诊断价值目前尚无一致意见，理论上在梅毒持续感染中的诊断价值目前尚无一致意见，理论上PCR可查出死亡的可查出死亡的TP，所以治疗后，所以治疗后PCR阳性并
17、不意味着治疗失败，阳性并不意味着治疗失败，但死亡的但死亡的TP从机体内清除较快（从机体内清除较快（1530天），而存活的天），而存活的TP从机体从机体内清除至少需内清除至少需120天，所以治疗数周后天，所以治疗数周后PCR阳性意味着持续感染的阳性意味着持续感染的可能可能。此外，也有将。此外，也有将PCR用于产前诊断和神经梅毒诊断的报道用于产前诊断和神经梅毒诊断的报道 梅毒的病原学检测（二）梅毒的病原学检测（二）第8页，本讲稿共32页人人类类对对梅梅毒毒无无先先天天免免疫疫性性，尚尚无无疫疫苗苗接接种种进进行行人人工工免免疫疫，仅仅能能在在受受感感染染后后产产生生感感染染性性免免疫疫。已已完完全
18、全治治愈愈的的早早期期梅梅毒毒患患者者仍仍可可以再感染以再感染感感染染梅梅毒毒后后，首首先先产产生生IgM型型抗抗梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗体体，感感染染2周周后后即即可可测测出出，早早期期梅梅毒毒抗抗梅梅治治疗疗39个个月月后后或或晚晚期期梅梅毒毒治治疗疗2年年后后，大大部部分分病病人人IgM可可转转阴阴性性，再再感感染染时时又又出出现现阳阳性性，故故IgM型抗体的存在是活动性梅毒的表现型抗体的存在是活动性梅毒的表现感感染染梅梅毒毒4周周左左右右产产生生IgG型型抗抗梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗体体，即即使使经经足足量量抗抗梅梅治治疗疗，梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗原原消消失失后后很很长长时时间间，I
19、gG抗抗体体仍仍可可通通过过记记忆忆细细胞胞的的作作用用继继续续产产生生，甚甚至至终终生生在在血血清清中中可测出可测出梅毒的免疫性（一）梅毒的免疫性（一）第9页，本讲稿共32页梅毒的免疫性（二）梅毒的免疫性（二）另另一一种种具具有有抗抗体体性性质质的的物物质质叫叫反反应应素素（reagin），是是梅梅毒毒螺螺旋旋体体破破坏坏人人体体组组织织过过程程中中释释放放出出的的一一种种抗抗原原性性心心磷磷脂脂刺刺激激机机体体所所产产生生的的抗抗体体。反反应应素素一一般般在在感感染染后后57周周（或或下下疳疳出出现现后后23周周）产产生生。经经正正规规治治疗疗后后可可逐逐渐渐消失消失胎胎儿儿在在宫宫内内感
20、感染染梅梅毒毒螺螺旋旋体体后后，胚胚胎胎晚晚期期（69个个月月）已已能能合合成成IgM型型抗抗体体，出出生生后后第第3个个月月开开始始形形成成IgG型型抗抗体体；IgM抗抗体体不不能能通通过过胎胎盘盘，而而IgG抗抗体体能能通通过过胎胎盘盘，如如在在患患儿儿血血清清中中检检侧侧出出IgM抗抗梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗体体是是诊诊断断先先天天性梅毒的有力证据（但性梅毒的有力证据（但IgM阴性并不能排除先天性梅毒）阴性并不能排除先天性梅毒）第10页，本讲稿共32页NTrAT非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验：是以心磷脂、卵磷脂及胆固：是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的反应素
21、，用于初筛试验及疗效观察。可醇作为抗原检查血清中的反应素，用于初筛试验及疗效观察。可以分为以下四种以分为以下四种试验试验，原理基本相同，原理基本相同 1、性病研究实验室玻片试验（、性病研究实验室玻片试验（VDRL)：试剂需现配现用，：试剂需现配现用，且要在显微镜下观察结果，故国内实验室很少采用。但且要在显微镜下观察结果，故国内实验室很少采用。但VDRL是诊断神经性梅毒最特异的血清学方法是诊断神经性梅毒最特异的血清学方法 2、不加热血清反应素试验（、不加热血清反应素试验（USR)：试剂无需现配现用，但仍：试剂无需现配现用，但仍要在显微镜下观察结果，现已很少使用要在显微镜下观察结果，现已很少使用
22、3、快速血浆反应素环状卡片试验、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)：在特制的纸片上进行，：在特制的纸片上进行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗体出现凝集，用肉眼可观加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗体出现凝集，用肉眼可观察结果察结果 4、甲苯胺红不加热试验（、甲苯胺红不加热试验（TRUST)：在试剂中以红色的甲苯胺红颗：在试剂中以红色的甲苯胺红颗粒代替黑色的炭粉颗粒，使结果更易于观察粒代替黑色的炭粉颗粒，使结果更易于观察 非特异性梅毒血清学试验（一）非特异性梅毒血清学试验（一）第11页，本讲稿共32页非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验的缺陷的缺陷 1、特异性：在多种疾病，如急性病
23、毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织、特异性：在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织病、肿瘤、静脉吸毒者、老年人以及怀孕妇女中均可出现反应素，所以病、肿瘤、静脉吸毒者、老年人以及怀孕妇女中均可出现反应素，所以此类试验有时会出现假阳性反应此类试验有时会出现假阳性反应 2、敏感性：感染梅毒后反应素的出现时间晚于特异性梅毒螺旋体抗体，因此非、敏感性：感染梅毒后反应素的出现时间晚于特异性梅毒螺旋体抗体，因此非梅毒螺旋体抗原血清试验对一期梅毒的漏检率较高。梅毒螺旋体抗原血清试验对一期梅毒的漏检率较高。RPR或或TRUST有时有时出现弱阳性或阴性结果，而临床上又像二期梅毒，此时应将此血清稀释
24、出现弱阳性或阴性结果，而临床上又像二期梅毒，此时应将此血清稀释后做定量试验，如出现阳性结果，则为抗体过量引起的后做定量试验，如出现阳性结果，则为抗体过量引起的“钩状效应钩状效应”，12的二期梅毒病人可出现此现象而发生假阴性反应。此外，晚期梅毒反的二期梅毒病人可出现此现象而发生假阴性反应。此外，晚期梅毒反应素转阴率高，再加上这类试验对隐性梅毒也不太敏感，因此用此类试验应素转阴率高，再加上这类试验对隐性梅毒也不太敏感，因此用此类试验进行梅毒筛查时，存在着相当数量的漏检进行梅毒筛查时，存在着相当数量的漏检非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验的的优点优点 1、非梅毒螺旋体抗原血清试验阳性的
25、患者往往是梅毒现症感染者，临床上非梅毒螺旋体抗原血清试验阳性的患者往往是梅毒现症感染者，临床上即可开展治疗即可开展治疗 2、非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随成功的治疗而逐渐下降，非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随成功的治疗而逐渐下降，故可以作为疗效观察的指标故可以作为疗效观察的指标 3、此类方法价格低廉、此类方法价格低廉非特异性梅毒血清学试验（二）非特异性梅毒血清学试验（二）第12页，本讲稿共32页测定非梅毒螺旋体抗原血清试验的滴度测定非梅毒螺旋体抗原血清试验的滴度进行疗效观察进行疗效观察 1、治疗成功：治疗成功：早期梅毒患者在治疗后早期梅毒患者在治疗后6个月内症状消失且非梅毒螺旋体个月
26、内症状消失且非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度有至少抗原血清试验滴度有至少4倍的下降。晚期梅毒或隐性梅毒患者倍的下降。晚期梅毒或隐性梅毒患者在治疗后在治疗后1224个月内非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度有至少个月内非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度有至少4倍倍的下降的下降 2、治疗失败：治疗失败：治疗后症状持续或重新出现；治疗后非梅毒螺旋体抗原治疗后症状持续或重新出现；治疗后非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度反而上升了血清试验滴度反而上升了4倍或以上；非梅毒螺旋体抗原血清倍或以上；非梅毒螺旋体抗原血清试验初始滴度较高（试验初始滴度较高（1:32或以上）但在六个月内没有达到或以上）但在六个月内没有达到4倍的倍的下降。
27、抗梅毒治疗失败的病人应考虑合并下降。抗梅毒治疗失败的病人应考虑合并HIV感染及神经梅毒感染及神经梅毒的可能性的可能性 3、血清固定：血清固定：经正规治疗后，梅毒患者经正规治疗后，梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验一非梅毒螺旋体抗原血清试验一般都会转为阴性，但有般都会转为阴性，但有13%的的病人即使经足量抗梅治疗，非梅毒病人即使经足量抗梅治疗，非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度仍持续呈低滴度阳性，这种现象称为血清螺旋体抗原血清试验滴度仍持续呈低滴度阳性，这种现象称为血清固定，其原因尚不明了。血清固定患者的滴度重又上升则提示再次固定，其原因尚不明了。血清固定患者的滴度重又上升则提示再次感染梅毒感染梅毒非特
28、异性梅毒血清学试验（三）非特异性梅毒血清学试验（三）第13页，本讲稿共32页TrAT梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体原检测血清中的抗螺旋体IgM和和/或或IgG抗体，其敏感性抗体，其敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试验，但不能用和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试验，但不能用作疗效观察的指标。常用的有以下五种方法：作疗效观察的指标。常用的有以下五种方法：1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS)2、梅毒螺旋体血球凝集试验（、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）3、梅毒螺旋体明胶凝集
29、试验（、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA)4、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）5、梅毒螺旋体化学发光免疫测定（、梅毒螺旋体化学发光免疫测定（TP-CLIA)6、梅毒螺旋体快速诊断试验（、梅毒螺旋体快速诊断试验（TP-RT）特异性梅毒血清学试验（一）特异性梅毒血清学试验（一）第14页，本讲稿共32页荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS)FTA-ABS是所有螺旋体试验中最敏感的方法，特异性也很高，被是所有螺旋体试验中最敏感的方法，特异性也很高，被认为是检测梅毒的认为是检测梅毒的“金标准金标准”。且该试验可分开检测。且该试
30、验可分开检测IgM和和IgG 但是，该方法在技术操作上也是最困难的，试验的操作以及结但是，该方法在技术操作上也是最困难的，试验的操作以及结果的判读都必须加以核实。试验可靠性的关键是标准化的结果果的判读都必须加以核实。试验可靠性的关键是标准化的结果判断、高质量的荧光标记抗体以及适当的稀释度。由于实验室判断、高质量的荧光标记抗体以及适当的稀释度。由于实验室操作繁琐以及主观判读经常产生错误结果，因此增加标记荧光操作繁琐以及主观判读经常产生错误结果，因此增加标记荧光标记染料的复染可以减低标准化过程中的错误并增加其可读性标记染料的复染可以减低标准化过程中的错误并增加其可读性及重复性及重复性 由于该试验需
31、有优质的荧光显微镜和技术熟练的操作人员才能由于该试验需有优质的荧光显微镜和技术熟练的操作人员才能得到准确的结果，故常不被临床实验室作为常规方法开展得到准确的结果，故常不被临床实验室作为常规方法开展 特异性梅毒血清学试验（二）特异性梅毒血清学试验（二）第15页，本讲稿共32页 梅毒螺旋体血球凝集试验（梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）原理：原理：用超声裂解的梅毒螺旋体为抗原，致敏经醛化、用超声裂解的梅毒螺旋体为抗原，致敏经醛化、鞣化的羊或禽类红细胞，此致敏红细胞与人血清鞣化的羊或禽类红细胞，此致敏红细胞与人血清 或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可观或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可观
32、 察的凝集反应察的凝集反应优点：该方法比优点：该方法比FTA-ABS易操作且稳定性好，它的敏感易操作且稳定性好，它的敏感 性除早期梅毒外与性除早期梅毒外与FTA-ABS相似，对大样本进行相似，对大样本进行 批量检测时，批量检测时，TPHA也比也比FTA-ABS易操作易操作不足：由于红细胞具有生物活性，可能产生非特异性凝不足：由于红细胞具有生物活性，可能产生非特异性凝 集，且保存时间较短，批间差较大，故实际使用中集，且保存时间较短，批间差较大，故实际使用中 也存在一些问题也存在一些问题特异性梅毒血清学试验（三）特异性梅毒血清学试验（三）第16页，本讲稿共32页 梅毒螺旋体明胶凝集试验（梅毒螺旋体
33、明胶凝集试验（TPPA）原理：原理：TPPA的原理与的原理与TPHA基本相同，但它以人工合基本相同，但它以人工合 成的惰性明胶颗粒代替成的惰性明胶颗粒代替TPHA中的红细胞作为载中的红细胞作为载 体，是体，是TPHA的升级产品的升级产品 优点：优点：1、试剂稳定，批间差小试剂稳定，批间差小 2、结果判读更为清晰明确结果判读更为清晰明确 3、敏感性和特异性较敏感性和特异性较TPHA进一步提高进一步提高 不足：较难实现自动化，结果判定主观不足：较难实现自动化，结果判定主观特异性梅毒血清学试验（四）特异性梅毒血清学试验（四）第17页，本讲稿共32页梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（梅毒螺旋体酶联免疫吸附试
34、验（TP-ELISA）原理：以梅毒螺旋体抗原包被聚丙乙烯板，再加入待检原理：以梅毒螺旋体抗原包被聚丙乙烯板，再加入待检 血清以及酶标记抗原，形成双抗原夹心，同时检血清以及酶标记抗原，形成双抗原夹心，同时检 测测 IgG和和IgM抗体。少数试剂采用间接法，使用抗体。少数试剂采用间接法，使用 酶标记抗人酶标记抗人IgG或或IgM，分开检测，分开检测IgG或或IgM 优点：优点：1、敏感性和特异性较高、敏感性和特异性较高 2、价格较低，适合于对大量样品的筛查、价格较低，适合于对大量样品的筛查 3、可实现操作的自动化、客观化、可实现操作的自动化、客观化 不足：不足：ELISA试剂盒品牌众多，各家采用的
35、抗原和工艺试剂盒品牌众多，各家采用的抗原和工艺 不同，使敏感性和特异性产生较大的差异，临床不同，使敏感性和特异性产生较大的差异，临床 实验室在选用实验室在选用ELISA试剂前应认真进行评估试剂前应认真进行评估 特异性梅毒血清学试验（五）特异性梅毒血清学试验（五）第18页，本讲稿共32页酶联免疫吸附试验检测梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验检测梅毒螺旋体IgM抗体抗体 原理：原理：ELISA间接法或捕获法，以捕获法的敏感性和特间接法或捕获法，以捕获法的敏感性和特 异性为佳。由于血液中异性为佳。由于血液中 IgG 的量大大高于的量大大高于 IgM，为避免交叉反应所引起的假阳性，一般须对样本为避免交叉反应所
36、引起的假阳性，一般须对样本 进行预处理，先去除其中的进行预处理，先去除其中的 IgG 然后再进行然后再进行IgM 测定。分离去除测定。分离去除 IgG 的常用方法为柱层析法或免的常用方法为柱层析法或免 疫沉淀法（沉淀剂为抗人疫沉淀法（沉淀剂为抗人IgG等）等）用途：用途：1、先天性梅毒的诊断、先天性梅毒的诊断 2、活动性梅毒（新近感染）的诊断及疗效观察、活动性梅毒（新近感染）的诊断及疗效观察 3、梅毒再感染的诊断、梅毒再感染的诊断 结果解释：结果解释：IgM阳性是先天性梅毒或活动性梅毒的重要证阳性是先天性梅毒或活动性梅毒的重要证 据，但阴性结果并不能排除感染的可能性据，但阴性结果并不能排除感染
37、的可能性 特异性梅毒血清学试验（六）特异性梅毒血清学试验（六）第19页，本讲稿共32页梅毒螺旋体化学发光免疫测定（梅毒螺旋体化学发光免疫测定（TP-CLIA）原理：目前以微孔板式的化学发光免疫测定最为常见，其原理与原理：目前以微孔板式的化学发光免疫测定最为常见，其原理与ELISA方法基本相同，只是以化学发光底物取代了发色底物，方法基本相同，只是以化学发光底物取代了发色底物，检测的信号则由光密度（检测的信号则由光密度（A值）变为光子数值）变为光子数 优点：较之优点：较之ELISA方法，其分析方法，其分析敏感性更低，可报告范围更宽敏感性更低，可报告范围更宽 不足：与不足：与ELISA试剂盒的不足基
38、本相同试剂盒的不足基本相同特异性梅毒血清学试验（七）特异性梅毒血清学试验（七）第20页，本讲稿共32页梅毒螺旋体快速检测试验梅毒螺旋体快速检测试验（TP-RT）原理：双抗原夹心免疫层析试验或间接法免疫渗滤试验，原理：双抗原夹心免疫层析试验或间接法免疫渗滤试验，多采用胶体金进行标记，同时检测多采用胶体金进行标记，同时检测IgG、IgM抗体抗体 （双抗原夹心法）或单测（双抗原夹心法）或单测IgG抗体（间接法）抗体（间接法）优点：优点：1、简便、快速，不需要特殊的仪器、简便、快速，不需要特殊的仪器 2、适合于单人份操作，可用于较紧急和实验室条、适合于单人份操作，可用于较紧急和实验室条 件差的场合件差
39、的场合 不足：不足：1、临床评估资料不多，敏感性、特异性尚有待进、临床评估资料不多，敏感性、特异性尚有待进 一步考查一步考查 2、无法实现自动化，结果判断主观、无法实现自动化，结果判断主观 3、测定结果受温度和时间的影响较大、测定结果受温度和时间的影响较大 4、价格较高、价格较高特异性梅毒血清学试验（八）特异性梅毒血清学试验（八）第21页，本讲稿共32页免疫印迹试验免疫印迹试验梅毒的免疫印迹试验（梅毒的免疫印迹试验（Western blot）与作为）与作为HIV抗体确认抗体确认的免疫印迹试验采用相同的原理和技术的免疫印迹试验采用相同的原理和技术既可检测既可检测IgG抗体，也可检测抗体，也可检测
40、IgM抗体抗体目前已有商品化的试剂盒供应，但价格高昂目前已有商品化的试剂盒供应，但价格高昂检测特异性的梅毒抗体条带，其分子量分别为检测特异性的梅毒抗体条带，其分子量分别为15.5、17、45.5和和47kd梅毒梅毒IgG免疫印迹试验的敏感性和特异性均可达到甚至超过免疫印迹试验的敏感性和特异性均可达到甚至超过FTA-ABS的水平的水平有文献报道，梅毒有文献报道，梅毒IgM免疫印迹试验对先天性梅毒的诊断可免疫印迹试验对先天性梅毒的诊断可能很有意义，其特异性至少达到能很有意义，其特异性至少达到90%，而敏感性达，而敏感性达83%以以上，高于上，高于FTA-ABS 19S IgM 73%的水平的水平第
41、22页，本讲稿共32页方法学比较方法学比较n1.非螺旋体抗体试验（非螺旋体抗体试验（NtrAT）这类方法敏感性高，其抗体滴度与病变活动性这类方法敏感性高，其抗体滴度与病变活动性有关，病灶出现后有关，病灶出现后1-2周就可测出反应素，周就可测出反应素，期梅毒阳性率约为期梅毒阳性率约为70%，期梅毒阳性期梅毒阳性率可达率可达100%，期梅毒阳性率较低，先天性梅毒阳性率可达期梅毒阳性率较低，先天性梅毒阳性率可达80%-100%，但此类试验，但此类试验特异性不高，常有假阳性反应。因此，在分析结果时应结合病史和临床症状，并做密螺旋体抗特异性不高，常有假阳性反应。因此，在分析结果时应结合病史和临床症状，并
42、做密螺旋体抗原试验加以确诊。原试验加以确诊。n2.密螺旋体抗体试验（密螺旋体抗体试验（TrAT）n1）TPHA（梅毒螺旋体血凝试验）（梅毒螺旋体血凝试验）是一种间接血凝试验，以是一种间接血凝试验，以SRBC为载体，将梅毒螺旋为载体，将梅毒螺旋体体Nichols株，经纯化后超声击碎成密螺旋体抗原，致敏株，经纯化后超声击碎成密螺旋体抗原，致敏SRBC，加入待检病人，加入待检病人血清作间接血凝试验，具有敏感性高，快速，简便，易于观察等特点。血清作间接血凝试验，具有敏感性高，快速，简便，易于观察等特点。n2）TPPA（梅毒螺旋体明胶凝集试验）与（梅毒螺旋体明胶凝集试验）与TPHA基本相同。基本相同。n
43、3）WB（免疫印迹试验）（免疫印迹试验）是分子水平的试验，本法综合了是分子水平的试验，本法综合了SDS-PAGE的高分的高分辩力和辩力和ELISA的高特异性和敏感性，对梅毒的确诊，尤其对早期梅毒的确诊具有特的高特异性和敏感性，对梅毒的确诊，尤其对早期梅毒的确诊具有特殊的价值，对二期，三期梅毒的诊断率很高。殊的价值，对二期，三期梅毒的诊断率很高。n4）FTA-ABS（荧光密螺旋体抗体吸收试验）为间接荧光抗体检测法。本法敏感性和特（荧光密螺旋体抗体吸收试验）为间接荧光抗体检测法。本法敏感性和特异性均高，是异性均高，是期，期，期梅毒首先出现阳性反应的血清学试验，且病人经药物治期梅毒首先出现阳性反应的
44、血清学试验，且病人经药物治疗后，反应仍不转阴，可用于确诊但不能用作疗效评价。疗后，反应仍不转阴，可用于确诊但不能用作疗效评价。n密螺旋体抗原试验的特异性虽强，但仍不能区分雅司、地方性梅毒、品他病，也可密螺旋体抗原试验的特异性虽强，但仍不能区分雅司、地方性梅毒、品他病，也可有有1%生物学假阳性存在。因此，这些试验的结果的判定，仍需结合临床资料来分生物学假阳性存在。因此，这些试验的结果的判定，仍需结合临床资料来分析。析。第23页，本讲稿共32页梅毒血清学试验假阳性的原因原因原因非密螺旋体非密螺旋体抗体试验抗体试验(NTrAT)密螺旋体密螺旋体抗体试验抗体试验(TrAT)自身免疫病自身免疫病疟疾疟疾
45、新近免疫接种新近免疫接种皮肤病皮肤病心血管病心血管病结核结核麻风麻风静脉注射毒品静脉注射毒品病毒感染病毒感染热性病热性病妊娠妊娠HIV感染感染其他性传播病其他性传播病老年人老年人多次输血多次输血莱娒病莱娒病地方性密螺旋体病地方性密螺旋体病原因不明原因不明技术误差技术误差第24页，本讲稿共32页非梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂评估结果非梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂评估结果试剂名称试剂名称生产厂家生产厂家生产批号生产批号敏感性敏感性特异性特异性RPR上海科华2007062097.2%93.4%TRUST上海荣盛2007050195.4%95.1%TRUST兰州生物所2007020192.2%96.2
46、%TRUST厦门英科新创200806760297.2%93.4%TRUST郑州安图绿科2007050987.1%94.4%TRUST北京万泰MZ007030184.3%92.0%参比试剂：参比试剂：美国美国BD公司生公司生产产的的RPR试剂试剂盒（批号盒（批号8095883）第25页，本讲稿共32页梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂(ELISA)评评估估结结果果试剂名称试剂名称生产厂家生产厂家生产批号生产批号敏感性敏感性特异性特异性ELISA-TP珠海丽珠试剂2008061899.6%99.6%ELISA-TP厦门英科新创200807750699.6%98.3%ELISA
47、-TP北京华大吉比爱2008091299.6%97.1%ELISA-TP北京万泰N2008060699.2%99.6%ELISA-TP北京现代高达20080600398.9%99.6%ELISA-TP北京金豪20080707698.9%98.3%ELISA-TP上海科华2008071497.7%93.8%参比试剂：参比试剂：日本富士日本富士公司生公司生产产的的TPPA试剂试剂盒（批号盒（批号VN80807）+免疫印迹法（批号免疫印迹法（批号D081009A1）第26页，本讲稿共32页梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂(快速法快速法)评评估估结结果果试剂名称试剂名称生产厂家
48、生产厂家生产批号生产批号敏感性敏感性特异性特异性快速(胶体金)北京万泰02008080398.1%96.3%快速(胶体金)厦门英科新创02712270295.8%93.8%快速(胶体金)韩国SD02503591.6%99.2%快速(胶体金)杭州艾康20081021687.8%100%参比试剂：参比试剂：日本富士日本富士公司生公司生产产的的TPPA试剂试剂盒（批号盒（批号VN80807）+免疫印迹法（批号免疫印迹法（批号D081009A1）第27页，本讲稿共32页关于梅毒血清学试验程序的探讨（一）关于梅毒血清学试验程序的探讨（一）先以非梅毒螺旋体抗原血清试验（先以非梅毒螺旋体抗原血清试验（RPR
49、、TRUST等）进行等）进行初筛，再以梅毒螺旋体抗原血清试验（初筛，再以梅毒螺旋体抗原血清试验（TPPA、TPHA、ELISA等）进行确认等）进行确认 优点：非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉，使梅优点：非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉，使梅 毒检测的成本可以保持在低水平毒检测的成本可以保持在低水平 缺点：非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性较差，缺点：非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性较差，导致临床上易出现漏检的情况导致临床上易出现漏检的情况同时进行梅毒螺旋体抗原血清试验和非梅毒螺旋体抗原血同时进行梅毒螺旋体抗原血清试验和非梅毒螺旋体抗原血清试验清试验 优点：这是从技术上而言的最佳方案优点：这是从技
50、术上而言的最佳方案 缺点：人力和试剂成本较高缺点：人力和试剂成本较高先进行梅毒螺旋体抗原血清试验，阳性时再进行非梅毒先进行梅毒螺旋体抗原血清试验，阳性时再进行非梅毒螺旋体抗原血清试验螺旋体抗原血清试验第28页，本讲稿共32页关于梅毒血清学试验程序的探讨（二）关于梅毒血清学试验程序的探讨（二）TrAT梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒螺旋体抗原血清试验（TPPA等）等）（-）阴性报告（+）NtrAT非梅毒螺旋体抗原血清试验（RPR等）（+）现症梅毒抗梅治疗，疗效观察（-）询问梅毒既往感染和治疗史（有）既往感染（无）随访或抗梅治疗第29页，本讲稿共32页关于梅毒血清学试验程序的探讨（三）关于梅毒血清学试