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1、培养基的配制 灭菌1第1页，本讲稿共10页果蝇培养基成分果蝇培养基成分水1000ml玉米粉105g红糖75g琼脂7.5-10g苯甲酸0.75g酵母粉5-10g酒精10ml2第2页，本讲稿共10页配制方法 1.1.称取药品：按照配方依次称取琼脂条、红糖、玉米粉、苯甲称取药品：按照配方依次称取琼脂条、红糖、玉米粉、苯甲酸。酸。2.2.加热促溶：将加热促溶：将1L1L水分成两份：一份用于加热溶解琼脂和糖，另一水分成两份：一份用于加热溶解琼脂和糖，另一份煮玉米粉，玉米粉要先用冷水搅拌，再缓慢加到煮沸琼脂红糖溶液中，份煮玉米粉，玉米粉要先用冷水搅拌，再缓慢加到煮沸琼脂红糖溶液中，边倒边搅拌，注意防止烧焦
2、。继续煮边倒边搅拌，注意防止烧焦。继续煮15-2015-20分钟，关掉火后再加入苯甲酸分钟，关掉火后再加入苯甲酸(用少量酒精促溶用少量酒精促溶)，继续搅拌。，继续搅拌。3.3.分装：将培养基分装到试管或三角瓶，试管内培养基厚度为分装：将培养基分装到试管或三角瓶，试管内培养基厚度为1-2cm1-2cm，三角瓶培养基厚度为，三角瓶培养基厚度为2-3cm2-3cm，用纸把瓶口擦干净，加上棉塞，外围用牛，用纸把瓶口擦干净，加上棉塞，外围用牛皮纸和棉线包扎。皮纸和棉线包扎。3第3页，本讲稿共10页 4.4.灭菌：置灭菌：置121121高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌1515分钟。分钟。5.5.培养酵母菌：待培养
3、基冷却后，在培养基的表面滴加培养酵母菌：待培养基冷却后，在培养基的表面滴加1-21-2滴新鲜酵母液，放置滴新鲜酵母液，放置1d1d待培养基表面干燥后再接种果蝇。待培养基表面干燥后再接种果蝇。6.6.接种果蝇：拔出接种瓶、亲本瓶的棉塞，夹在指缝中接种果蝇：拔出接种瓶、亲本瓶的棉塞，夹在指缝中间，迅速将亲本瓶口倒扣在接种瓶上方，轻拍亲本瓶让果蝇间，迅速将亲本瓶口倒扣在接种瓶上方，轻拍亲本瓶让果蝇落入接种瓶中，此法仅适用于原种继代培养。如要挑取处女落入接种瓶中，此法仅适用于原种继代培养。如要挑取处女蝇、不同品种杂交、子代性状检查，需要先做麻醉处理，有蝇、不同品种杂交、子代性状检查，需要先做麻醉处理，
4、有选择性转入接种瓶。选择性转入接种瓶。4第4页，本讲稿共10页高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法 是将物品放在高压蒸汽灭菌锅内0.1MPa，121保持1530分钟进行灭菌。时间的长短可根据灭菌物品种类和数量的不同而有所变化，以达到彻底灭菌为准。这种灭菌适用于培养基、工作服、橡皮物品等的灭菌，也可以用于玻璃器皿的灭菌。高压蒸汽灭菌的基本原理：将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100的
5、温度。最终导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。5第5页，本讲稿共10页 一般培养基用0.1MPa(相当于15Ib/in2或1.05kg/cm2)，121.5，1530min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。6第6页，本讲稿共10页手提式高压蒸汽灭菌锅的操作步骤手提式高压蒸汽灭菌锅的操作步骤 1)首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相
6、平为宜。2)放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。3)加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。7第7页，本讲稿共10页 4)用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。5)灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。8第8页，本讲稿共10页 6)将取出的灭菌培养基放入37温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。注意事项：1)每次使用前一定要检查水位，添加适量水。2)锅内冷空气必须排干净，否则影响灭菌温度。9第9页，本讲稿共10页10第10页，本讲稿共10页