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1、胶体金的制备及其应用 本讲稿第一页，共十六页主要内容主要内容概述免疫胶体金技术的基本原理胶体金的特性胶体金的制备方法胶体金的鉴定免疫胶体金制备免疫胶体金应用本讲稿第二页，共十六页概述概述胶体金溶液胶体金溶液：胶体金溶液是指分散相粒子直径在l150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系，颜色呈桔红色到紫红色。1971年胶体金作为标记物开始用于免疫组织化学,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合；1974年Romano等将胶体金标记在第二抗体（马抗人IgG）上，建立了间接免疫胶体金染色法；1978年geoghega发现了胶体金标记物在光镜水平的
2、应用。本讲稿第三页，共十六页概述概述胶体金在免疫化学中的这种应用，又被称为免疫金免疫金，许多学者进一步证实胶体金能稳定又迅速地吸附蛋白质稳定又迅速地吸附蛋白质，而蛋白质的生物活性无明显改变它可以作为探针进行细胞表面和细胞内多糖、蛋白质、多肤、抗原、激素、核酸等生物大分子的精确定位,也可以用于日常的免疫诊断，进行免疫组织化学定位，因而在临床诊断及药物检测等方面的应用已受到广泛的重视。目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力工具本讲稿第四页，共十六页免疫胶体金技术的基本原理免疫胶体金技术的基本原理 氯金
3、酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子(AuCl2-)，外层离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。较小的胶体金颗粒基本是圆形的，较大(粒径在30nm以上)的呈椭圆刑本讲稿第五页，共十六页免疫胶体金技术的基本原理免疫胶体金技术的基本原理胶体金标记胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附
4、而形成牢固结合。免疫金标记技术免疫金标记技术(Immunogold labelling techique)(Immunogold labelling techique)主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。本讲稿第六页，共十六页胶体金的特性胶体金的特性1、胶体性质胶体金颗粒大小多在1100nm，微小金颗粒稳定地、均匀地、呈单一分散状态悬浮在液体中，成为胶体金溶液；2、呈色性微小颗粒胶体呈红
5、色，但不同大小的胶体呈色有一定的差别。最小的胶体金（25nm）是橙黄色的，中等大小的胶体金（1020nm）是酒红色的，较大颗粒的胶体金（3080nm）则是紫红色的；3、胶体金具有很高的动力学稳定性，在稳定因素不受破坏时自身凝聚极慢，可放置数年不发生凝聚。影响稳定的因素主要有电解质、溶胶浓度、温度、非电解质等。本讲稿第七页，共十六页胶体金的制备方法胶体金的制备方法 胶体金的制备胶体金的制备一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。本讲稿第八页，共十六页胶体金的制备方法胶体金的制备方法方法一：柠檬酸三钠还原法制备金溶胶方法一：柠檬酸三钠还原法制备金溶胶本讲稿第九页，
6、共十六页胶体金的制备方法胶体金的制备方法方法二：柠檬酸三钠鞣酸混合还原剂方法二：柠檬酸三钠鞣酸混合还原剂本讲稿第十页，共十六页胶体金的制备方法胶体金的制备方法方法三：白磷还原法制备金溶胶方法三：白磷还原法制备金溶胶本讲稿第十一页，共十六页胶体金的鉴定胶体金的鉴定 本讲稿第十二页，共十六页免疫胶体金制备 本讲稿第十三页，共十六页免疫胶体金的应用、胶体金在电镜水平的应用、胶体金在电镜水平的应用 本讲稿第十四页，共十六页胶体金在免疫层析快速诊断技术中的应用 免疫层析法免疫层析法(immunochromatography)(immunochromatography)原理原理是将特异的抗体先固定于硝 酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品（尿液或血清）后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。本讲稿第十五页，共十六页谢谢 谢！谢！本讲稿第十六页，共十六页