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1、动物细胞工程动物细胞工程常用的技术手段动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞核移植、动物细胞融合、动物细胞融合、单克隆抗体单克隆抗体动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。是其他动物细胞工程技术的基础。提问：提问：v植物细胞工程常用的技术手段有哪些植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养植物组织培养,植物体细胞杂交植物体细胞杂交阅读思考：为什么要进行动物细胞培养？为什么要进行动物细胞培养？什么是动物细胞培养？什么是动物细胞培养？一一 动物细胞培养动物细胞培养动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的动物细胞培养就是从动物机体内取
2、出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。思考：思考：动物细胞培养的过程是怎样动物细胞培养的过程是怎样的呢？的呢？阅读思考：阅读思考：1为什么细胞培养要分散成单个细胞培养？为什么细胞培养要分散成单个细胞培养？2 怎样分散？怎样分散？2用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要3 成分是什么？用胃蛋白酶行吗？成分是什么？用胃蛋白酶行吗？3 什么是细胞贴壁和细胞接触抑制？什么是细胞贴壁和细胞接触抑制？4什么是原代培养和传代培养？传代培养的细胞什么是
3、原代培养和传代培养？传代培养的细胞5 具有具有 什么特点？什么特点？为什么细胞培养要分散成单个细胞培养？怎样分散？为什么细胞培养要分散成单个细胞培养？怎样分散？1.成块的组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了细胞的生成块的组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了细胞的生长和增值。长和增值。2.从健康动物体内取出组织块，剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋从健康动物体内取出组织块，剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理白酶处理用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要成分用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要成分是什么？用胃蛋白酶行吗？是什么？用胃蛋白酶行吗？1.在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞在进行
4、动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。间的物质主要是蛋白质。2.动物细胞培养适宜的动物细胞培养适宜的PH为为7.27.4，此环境下胃蛋白酶，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。的活性较高。动物细胞生长特性：动物细胞生长特性：细胞贴壁：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。为细胞贴壁。要求：要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。附。细胞的接触抑制细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，
5、细胞当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。制。什么是原代培养和传代培养？什么是原代培养和传代培养？传代培养的细胞具有什么特点？传代培养的细胞具有什么特点？原代培养：将动物组织用胰蛋白酶处理成单个细胞，配原代培养：将动物组织用胰蛋白酶处理成单个细胞，配制成一定浓度的悬浮液，放入培养瓶中在培养箱中培养制成一定浓度的悬浮液，放入培养瓶中在培养箱中培养的过程的过程传代培养：培养瓶中的细胞越来越多，用胰蛋白酶处理传代培养：培养瓶中的细胞越来越多，用胰蛋白酶处理使细胞从瓶壁上脱离下来，配制成悬浮液，分瓶培养的使细胞从
6、瓶壁上脱离下来，配制成悬浮液，分瓶培养的过程过程动物细胞培养的过程动物细胞培养的过程：动物动物胚胎胚胎或或幼龄幼龄动物的组织、器动物的组织、器官官 剪碎组织剪碎组织分散成单个分散成单个细胞细胞细胞悬液细胞悬液10代细胞代细胞50代细胞代细胞原代培养原代培养传代培养传代培养无限传代无限传代培养液培养液胰蛋白酶胰蛋白酶增值减慢增值减慢 讨论：多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境知识，思考并中，根据你所学的内环境知识，思考并讨论以下问题：讨论以下问题：1.体外培养细胞时需要提供哪些物资？体外培养细胞时需要提供哪些物资？2.体外培养的细胞需要什
7、么样的环境件？体外培养的细胞需要什么样的环境件？充足的营养充足的营养 气体气体无菌、无毒的环境无菌、无毒的环境 适宜的温度和适宜的温度和PH动物细胞培养条件：动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养、营养（葡萄糖葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清动物血清等。等。）3、温度和、温度和PH 36.5+（-）0.5度4、气体环境：、气体环境：O2和和CO2（95%空气和空气和5%CO2）保证细胞顺利的保证细胞顺利的生长增殖生长增殖动物细胞培养液的主要成分动物细胞培养液的主
8、要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。与植物培养基相比其特点是：与植物培养基相比其特点是：（1 1）液体培养基液体培养基（2 2）含有动物血清含有动物血清动物体细胞大都生活动物体细胞大都生活在在液体液体的环境的环境动物细胞培养应用动物细胞培养应用大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）单克隆抗体）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性种物质的毒性为治疗和预防癌症
9、及其他疾病提供理论依据为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据1 1、在动物细胞培养过程中，下列哪种现象是不可能的（、在动物细胞培养过程中，下列哪种现象是不可能的（）A A细胞一直在细胞悬液中分裂生长细胞一直在细胞悬液中分裂生长B B有少部分细胞可能在培养条件下无限地传代下去有少部分细胞可能在培养条件下无限地传代下去C C有部分细胞核型会发生变化有部分细胞核型会发生变化 D.D.个别细胞会发生基因突变个别细胞会发生基因突变2 2、下列过程与细胞培养无关的是、下列过程与细胞培养无关的是-（）A.A.检测有毒物质检测有毒物质 B.B.生产单克隆抗体生产单克隆抗体 C.C.筛选抗癌药物筛选抗癌药物 D
10、.D.杂交育种杂交育种AD练习：练习：我们能否用植物组织培养的方法使动物细我们能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？胞发育成动物个体？根据动物细胞核仍具有全能性的特点根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎怎样将动物细胞的全能性表达；把两种动物样将动物细胞的全能性表达；把两种动物的优良性状集合在一块儿的优良性状集合在一块儿?思考思考：二二 动物体细胞核移植技术动物体细胞核移植技术 和克隆动物和克隆动物动物体细胞核移植技术动物体细胞核移植技术:将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉 细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新细胞核的卵母细胞中
11、，使其重组并发育成一个新 的胚胎，的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为用核移植的方法得到的动物称为克隆动物克隆动物核移植核移植胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植体细胞核移植（难度高难度高）过程过程供体细胞（供核）供体细胞（供核）细胞培养细胞培养体细胞体细胞卵母细胞（减中期：供质）卵母细胞（减中期：供质）去核去核无核卵母细胞无核卵母细胞注入注入电刺激电刺激重重组组细细胞胞重组胚胎重组胚胎胚胎移植胚胎移植代孕母体代孕母体新个体新个体(与母体相与母体相同的个体同的个体)应用前景应用前景1、加快家畜遗传改良进程、加快家畜遗传改良进程
12、2、保护频危物种、保护频危物种3、器官移植供体、器官移植供体4、利用生物反应器生产生物蛋、利用生物反应器生产生物蛋白白前景前景应用前景应用前景1、加快家畜遗传改良进程、加快家畜遗传改良进程2、保护频危物种、保护频危物种3、器官移植供体、器官移植供体4、利用生物反应器生产生物蛋、利用生物反应器生产生物蛋白白存在问题存在问题成功率低成功率低存在健康问题存在健康问题克隆动物食品的安全问题克隆动物食品的安全问题许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。免疫失调等。中国自主完成的首批
13、成年体细胞克隆牛在山东曹县陆续降生。克隆牛有3个母亲,A牛提供细胞核即供体细胞,B牛提供去除细胞核的卵细胞即受体细胞,两种细胞在电脉冲的刺激下融合之后,通过细胞分裂形成早期胚胎,再将这个胚胎植入C牛子宫内。请回答下列问题:(1)培育出的克隆牛几乎就是 牛复制品,这是因为控制牛性状遗传的物质主要存在于_中。(2)克隆牛的培育成功说明了_。A(供核牛供核牛)细胞核细胞核 体细胞的细胞核几乎具有发育为新个体的全部遗传信息体细胞的细胞核几乎具有发育为新个体的全部遗传信息 练习练习小结：动物体动物体细胞核细胞核移植技术移植技术 和克隆动物和克隆动物过程过程应用应用前景前景存在存在问题问题 动物细胞工程动物细胞工程动物细动物细胞培养胞培养培养培养过程过程培养培养条件条件应用应用