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1、细菌的分离培养与接种技术细菌的分离培养与接种技术同济医院检验科细菌实验室 进行细菌学实验的场所，标本的接种、培养、分进行细菌学实验的场所，标本的接种、培养、分离、鉴定、药敏等工作在此完成。离、鉴定、药敏等工作在此完成。细菌室要防止外界污染，还要避免细菌播散。细菌室要防止外界污染，还要避免细菌播散。配备紫外灯、消毒剂等。注意定期消毒。配备紫外灯、消毒剂等。注意定期消毒。对无菌物品和标本应明显分开放于指定位置，同对无菌物品和标本应明显分开放于指定位置，同时要对用过的物品及时进行灭菌处理。时要对用过的物品及时进行灭菌处理。保证细菌室的温度。保证细菌室的温度。无菌实验室是细菌实验室内用于无菌操作的小室
2、，要求更严格。是细菌实验室内用于无菌操作的小室，要求更严格。完全封闭，应有缓冲区。完全封闭，应有缓冲区。用前要用紫外灯消毒用前要用紫外灯消毒30min,30min,定期用甲醛熏蒸消毒。定期用甲醛熏蒸消毒。仅限于分装培养基及传染性强的细菌接种。仅限于分装培养基及传染性强的细菌接种。要保证本室的无菌状态。要保证本室的无菌状态。保证本室的温度。保证本室的温度。无菌实验室可用超净工作台代替。无菌实验室可用超净工作台代替。培养基常用玻璃器材的准备培养基的成分和作用培养基的种类培养基的制备培养基的成分和作用培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。合营
3、养基质。(1)(1)营养物质：蛋白胨营养物质：蛋白胨(氮源氮源)、肉浸液、肉浸液（氮源和碳源）（氮源和碳源）、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类因子、无机盐类(2)(2)水水(3)(3)凝固剂：琼脂、明胶凝固剂：琼脂、明胶(4)(4)抑制剂：抑制剂：非生长必需，而是选择、鉴定及判断结果的需要非生长必需，而是选择、鉴定及判断结果的需要(5)(5)指示剂：指示剂：便于观察细菌便于观察细菌培养基的种类（按用途分类按用途分类）基础培养基基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通：培养营养要求不高的细菌，如普通平板平板营养培养基营养培养基：
4、能满足营养需求较高细菌的生长，：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板如血平板鉴别培养基鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（菌，如克氏双糖培养基（KIAKIA）选择培养基选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如的培养目的菌，如SSSS平板平板增菌培养基增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。较少的标本，如葡萄糖肉汤。厌氧培养基厌氧培养基：用于培养厌氧菌：用于培养厌氧菌培养基的种类（按物理性状分类按物理性状分类）液体培养基：不含
5、凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。半固体培养基：含0.30.5琼脂，用于观察细菌的动力。固体培养基：含22.5琼脂，多用于细菌的分离培养。培养基的制备培养基的制备玻璃器皿的消毒灭菌玻璃器皿的消毒灭菌制备的程序制备的程序调配调配调配调配 溶化溶化溶化溶化 矫正矫正矫正矫正pH pH 过滤澄清过滤澄清过滤澄清过滤澄清 分装分装分装分装灭菌灭菌灭菌灭菌鉴定鉴定鉴定鉴定保存保存保存保存细菌接种的基本程序灭菌接种环灭菌接种环沾取标本沾取标本接种接种灭菌接种环灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境细菌
6、接种法平板划线接种法：目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。方法：分区划线法：适用于含菌量较多的标本连续划线法：适用于含菌量较少的标本液体培养基接种法穿刺接种法:用于观察细菌动力斜面接种法 倾注培养法:用于细菌计数分区划线法第一区划线第一区划线灭菌接种环灭菌接种环第二区划线第二区划线灭菌接种环灭菌接种环第三区划线第三区划线灭菌接种环灭菌接种环连续划线法细菌培养法一般培养（需氧培养）：培养温度：35（采用恒温培养箱）培养时间：1824h二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等细菌在固体培养基中的生长现象菌落菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性明度、湿润度、黏度、溶血性菌落类型：光滑型（菌落类型：光滑型（S S）、粗糙型（）、粗糙型（R R）、黏液型）、黏液型（MM）菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌菌 落落菌落与菌苔