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1、体内药物分析课程作业 一、问答题 第 X 章 题目 要求 1 什么是体内药物分析？与常规药物分析相比，体内药物分析有哪些特点？答：体内药物分析旨在通过各种分析手段，了解药物在体内的数量与质量变化。获得药物代谢动力学的各种参数和信息，从药品生产、临床医疗、实验研究等方面对所研究药物作出估计和评价。与常规药物分析相比，体内药物分析具有干扰杂质多、样品量少且浓度变化大，不能再度获得完全相同的样品、有时要求较快提供结果、要有一定的仪器设备、工作量大等特点。必做 影响血药浓度的因素有哪些？答：包括机体因素：生理（年龄、性别、妊娠）、病理、遗传；药物因素：剂型因素、手性药物对映体相互作用；环境因素：化学物
2、质、合并用药；人体昼夜节律、营养和精神状态。必做 为什么要进行体内药物分析？体内药物分析的主要任务是什么？答：为开展临床药学和临床药理学研究服务，以指导临床安全、合理、有效用药和正确评价新药。体内药分的主要任务：分析方法学的研究、治疗药物监测、药代动力学研究、人群代谢分型研究、体内内源性物质的测定及其它方面（药物滥用、吸毒、兴奋剂检测、法医毒物分析等）的应用。必做 2 药物进入体内后一般需经历哪些物理、化学变化？这些变化与药理作用的关系如何？答：物理变化系指药物与生物大分子如血浆蛋白的结合反应。化学变化系指药物的代谢反应，包括一相代谢（氧化、还原、水解反应）和二相代谢反应（各种结合反应）由于药
3、物的作用强度与血液中游离药物的浓度密切相关，同时药物经代谢后活性发生了变化，故药物的物理、化学变化与药理作用密切有关。必做 药物在体内的代谢反应有哪些类型？必做 3 常用生物样本有哪些？如何采集、储存。答：常用生物样本有：血样（血浆、血清和全血）、尿样、唾液。采集与储存：血浆全血加抗凝剂，离心，取上清液；血清全血离心，取上清液。采血后必须尽快离心分离出血浆或血清，置20以下冷冻保存。尿样收集服药后一定时间内尿样，记录体积，混合均匀后取一定量,测定尿中药物浓度，计算一定时间内尿中药物的累积量。唾液漱口 15 分钟后收集口内自然流出或经舌在口内搅动后流出的混合唾液，离心后取上清液。样本采集后不能及
4、时测定，可置4冷藏，若放置时间较长，则需-20-80冷冻保存。必做 生物样品测定前为什么要除去蛋白质？除去蛋白质的常用方法有哪些？答：除蛋白质的意义：使结合型药物释放出来，以测定总浓度。得到较“干净”的提取液，减少乳化。消除对测定的干扰。常用去蛋白质方法：蛋白质沉淀法生成不溶性盐或盐析和脱水作用。包括：加酸类、必做 重金属盐、中性盐和能与水混溶的有机溶剂等，如：三氯乙酸、高氯酸、Cu2+、硫酸铵、甲醇、乙腈等。组织酶消化法蛋白水解酶，如胰蛋白酶、胃蛋白酶等。影响液-液提取和液-固提取效率的因素分别有哪些？必做 影响液-液提取的因素有:水相 pH 提取溶剂 离子强度 影响液-固提取的主要因素有:
5、固定相 洗脱液流速 样品装载量 4 评价分析方法的效能指标包括哪些项目？如何求算？必做 试述体内药物分析方法设定的一般步骤。答：首先进行文献查阅，设计方案，然后通过实验加以验证。一般实验步骤如下：以纯品进行测定选择最佳测定条件（线性，灵敏度、pH、检测波长等）。空白样品测定按设定的方法进行前处理和测定，考察空白值的大小和干扰程度。以水代替空白样品，添加标准品后测定，以获得提取回收率的大致情况，从而对前处理中各步操作条件进行选择。空白样品中添加标准后测定求样品回收率，建立标准曲线等。体内实样测定根据实样测定结果来判断设定的方法是否合理、可行。以上步骤需要反复试验以获得最佳实验条件。必做 阐述定量
6、限与检测限的定义、区别及表示方法。答：定量限即定量下限（LLOQ），表示药物可定量测定的最低量，须符合一定精密度和准确度要求，常以标准曲线最低浓度点来确定，或以 S/N=510 确定。检测限（LOD）表示药物的最低可测度，不必定量，通常以信噪比（S/N）=23 时被测药物的绝对量表示；两者的区别主要在于是否有定量要求：LOD 没有定量要求，而 LLOQ 则有定量要求。必做 体内药物分析方法有哪些？各有何优缺点？答：体内药物分析方法可分为三大类：光谱法包括比色法、紫外法和荧光法。方法优点是操作简便、快速，所需设备简单。其缺点是不具备分离功能，选择性较差，对前处理要求高；比色法和紫外法灵敏度较低。
7、免疫法包括放射免疫、酶免疫、荧光免疫等。方法优点是灵敏、专属，操作简便、快速，对样品预处理要求不高。其缺点是精密度较差，需要试剂盒和专属仪器。色谱分析法包括 HPLC,GC,LC/MS,GC/MS 等。方法优点是具有分离分析功能，是评价其它方法的参比方法。必做 5 紫外法消除干扰的方法有哪些？说明原理和应用条件。P82 必做 1.差示分光光度法（1）利用最大吸收波长进行测定 （2）利用最小吸收波长处的增色效应进行测定 （3）利用最大吸收与最小吸收之差（即振幅）进行测定 2.双波长测定法 如何进行激发光谱和荧光光谱的测定？P91 页 必做 荧光物质吸收紫外光后被激发出荧光，如果将激发荧光的光源用
8、单色器使其分光后，测定在每一波长的激发光照射下，物质所发射的荧光，以荧光强度对激光光波长作图，得到荧光物质的激光光谱，实际上，激发光谱就是荧光物质的吸收光谱。激发光谱中最高峰的波长，能使荧光 物质发出最强烈的荧光。如果使激发光的波长和强度保持不变，而让物质所发生的荧光通过单色器色散，依次将不同波长的荧光照射于接收器上，并依次测其荧光强度，然后以荧光强度对相应的荧光波长作图，得到该物质的荧光发射光谱，简称荧光光谱。6 免疫分析的基本原理、基本条件是什么？答：基本原理：即抗原-抗体结合反应。在反应体系中，当抗体（Ab）量一定时，抗原（Ag）与标记抗原（Ag*）就与抗体发生竞争性结合反应，生成的Ag
9、*-Ab与Ag的量呈负相关，这种特异的竞争性抑制的数量关系是免疫分析的定量基础。基本条件是：特异性抗体、标记抗原、未标记抗原（即标准品）。必做 常用免疫分析有哪几种？相互间区别在哪些方面？答：常用免疫分析有放射免疫法、酶免疫法、荧光免疫法、化学发光免疫法等，它们的主要区别在于标记物不同，由此采用的测定方法也不同。必做 在 RIA 中，结合物与游离标记物的分离方法有哪些？必做 7 气相色谱仪最常用检测器是什么？有何特点？适用范围？必做 GC 法定量方法与内标选择原则？答：对内标物的要求：内标物必须是样品中不含有的组分，其保留时间应与待测物 tR 值相近，但 R1.5，并具有足够的纯度。内标物选择
10、原则：内标与被测物相差一个化学元素；或内标与被测物为同系物；或内标与被测物结构相似，或内标与被测物理化性质相似。必做 什么是正相色谱？什么是反相色谱？必做 说明 RP-HPLC 法的常用固定相、流动相、适用范围，及流动相中甲醇等有机溶剂浓度变化对被测组分保留时间的影响。答：常用固定相ODS（C18）柱；流动相甲醇-水、乙腈-水、四氢呋喃-水；适用范围非极性至中等极性的各类分子型化合物；流动相中甲醇等有机溶剂浓度增大，被测组分保留时间缩短。必做 HPLC 仪常用检测器有哪些？指出各种检测器的适用范围和适用注意点。答：常用检测器有：紫外、二极管阵列、荧光、蒸发光散射、电化学、质谱等。紫外检测器通用
11、型检测器，适合具有紫外吸收的各种物质的检测。二极管阵列检测器具有光谱、色谱和三维图谱，可以进行定性和定量分析，以及色谱峰纯度检查。荧光检测器专属检测器，适合具有荧光或潜在荧光物质的检测，灵敏度高。蒸发光散射检测器适合于无紫外吸收物质的检测，要求流动相必须是挥发性的，不能含有非挥发性的缓冲盐。必做 电化学检测器适合于具有氧化还原性质的物质，要求流动相必须有一定的电导率，一般为盐类、有机溶剂和水的混合物。质谱检测器具有定性定量功能和高的灵敏度。8 什么是手性药物？为什么要研究手性药物？必做 常用手性色谱方法有哪些？答：分子结构中含有不对称碳原子（即手性中心）的药物称为手性药物。因手性药物两对映体在
12、体内的生物活性有差异，包括药效学差异（竞争拮抗等）和药动学差异（吸收、分布、代谢、排泄）。为正确评价两对映体的作用和进行对映体药物的质量控制，所以要研究手性药物。常用手性 HPLC 法有：手性衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法。必做 9 毛细管电泳有哪几种分离模式？毛细管电泳分离模式有 毛细管区带电泳，胶束电动色谱，毛细管凝胶色谱，毛细管等电聚焦，毛细管等速电泳，移动界面毛细管电色谱 。必做 10 常用联用技术有哪些？常用联用技术有 LC-MS，GC-MS，GC-GC，HPLC-HPLC，GC-HPLC，免疫分析-HPLC 等 必做 二、名词解释 第 X 章 题目 要求 1 TDM 答
13、：治疗药物监测，为英文“therapeutic drug monitoring”的缩写。必做 2 一相代谢答：指药物在体内发生的氧化反应、还原反应、水解反应。必做 二相代谢答：指药物在体内的结合反应，包括：葡萄糖醛酸结合、硫酸酯化、甲基化、乙酰基化、氨基酸缀合、谷胱甘肽缀合等。必做 生物转化答：主要指体内代谢反应。必做 CYP1A2 答：细胞色素 P450 1 族 A 亚族第 2 个酶基因。必做 3 血清答：全血经离心后的上清液。必做 血浆答：全血加抗凝剂（肝素等），经离心后的上清液。必做 4 RSD 答：相对标准偏差，即精密度的一种表示方法。必做 检测限答：表示药物的最低可测度，不必定量，通
14、常以 S/N=23 倍时被测药物的绝对量表示。必做 定量限答：表示药物可定量测定的最低量，须符合一定精密度和准确度要求，常以标准曲线最低浓度点来确定，或以 S/N=510 确定。必做 提取回收率答：指药物加入到生物样本中经前处理后测得的量与理论加入量的比值。必做 5 荧光光谱答：以发射波长为横坐标，荧光强度为纵坐标所作的图。必做 激发光谱答：以激发波长为横坐标，荧光强度为纵坐标所作的图 必做 6 酶免疫分析答：酶免疫分析是在放射免疫分析基础上发展起来的一种免疫分析方法，以酶代替同位素来标 记药物，酶与底物、辅酶等反应后引起吸收光谱变化而被检测。必做 7 反相 HPLC 答：即流动相极性大于固定
15、相极性的 HPLC。必做 ODS 答：即十八烷基硅烷键合硅胶，为常用反相 HPLC 的固定相。必做 三、填充题 第 X 章 题目 要求 1 体内药物分析的特点 干扰杂质多，样品量少浓度低，不能再度获得完全相同的样品，B 要有一定的仪器设备、工作量大 等。必做 影响血药浓度的因素有 机体因素（生理因素、遗传因素、病理因素）、药物因素（剂型、手性药物相互作用）、环境因素（药酶诱导剂、抑制剂、大气污染、饮食）等。必做 2 药物在体内发生的物理变化和化学变化分别是指 和 。必做 3 常用生物样品有 血样（血浆、血清、全血），尿样，唾液 等 必做 常用去蛋白的方法有 蛋白质沉淀法（加蛋白质沉淀剂，如：三
16、氯乙酸，高氯酸，Zn2+，Cu2+，硫酸铵，氯化钠，甲醇，乙腈，丙酮等）和组织酶消化法（加蛋白水解酶如：胃蛋白酶，胰蛋白酶，枯草菌溶素等）必做 生物样品中药物与代谢物的提取方法有 液-液提取和液-固提取 等 必做 影响液-液提取的因素有 水相 pH 值、提取溶剂和离子强度 等。必做 4 分析方法认证的主要指标 线性范围、准确度、精密度、专属性、灵敏度、稳定性 等 必做 体内药物分析方法包括 光谱法（比色、紫外、荧光），色谱法（HPLC、GC、GC-MS、LC-MS），免疫分析法（放射免疫、酶免疫、荧光免疫）等。必做 5 紫外光谱法消除干扰的方法有 差示光谱法、导数光谱法、双波长法 等 必做 6
17、 在放射免疫分析中，结合物与游离标记物的分离方法有 沉淀法、吸附法、固相法、差速迁移法、双抗体法 必做 7 气相色谱法中常用的检测器有 氢焰离子化检测器、氮磷检测器、电子捕获检测器、MS 等 必做 液相色谱中常用检测器有 紫外检测器（可变波长、二极管阵列）、荧光检测器、电化学检测器、蒸发光散射检测器、MS 等。必做 反相 HPLC 法常用流动相有 甲醇-水，乙腈-水，四氢呋喃-水 必做 8 手性 HPLC 法常用测定方法有 手性试剂衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法。必做 9 在毛细管电泳中，驱动荷电物质前进的两个重要作用力是 电泳流 和 电渗流。必做 四、单选题 第 X 章 题目 要
18、求 1 尿中异烟肼及乙酰异烟肼的比色测定是利用（B ）专属反应（KCN氯胺 T 反应）A 异烟肼 B 乙酰异烟肼 C 异烟肼及乙酰异烟肼 D 异烟腙 E 异烟酸 必做 药理作用强度与下列哪一项最相关（C ）A 血液浓度 B 摄入量 C 血液中游离药物的浓度 D 与蛋白结合药物的浓度 E 血药总浓度 必做 2 引起药物氧化代谢的主要酶是（D ）A 氧化酶 B 硫酸酯酶 C 脱氢酶 D 细胞色素 P450 E 葡醛酸转移酶 必做 属于药物二相代谢酶的是（E ）A 氧化酶 B 酯酶 C 脱氢酶 D 细胞色素 P450 E 葡醛酸转移酶 必做 3 欲提取尿中某一碱性药物，其 pKa 为 7.8，要使
19、99.9%的药物能被有机溶剂提取，尿样 pH 应调节到（D ）A.5.8 B.9.8 C.4.8以下 D.10.8 或 10.8 以上 E.7.8-9.8 必做 4 表示生物样品测定方法准确度的是（E ）A 检测限 B 定量限 C 精密度 D 线性范围 E 回收率 必做 表示生物介质中药物最低可测度的是（A ）A 检测限 B 定量限 C 线性范围 D 最低检测浓度 E 可信限 必做 方法的专属性也称选择性，在体内药物分析中主要考察（E ）A 相关物质 B 内标物 C 共存杂质 D 降解物 E 内源性物质 必做 表示样品中含有其他共存物质时该法能定量测定被测物的能力的是（D ）A 方法的精密度
20、B 方法的准确性 C 方法的相关性 D 方法的选择性 E 方法的线性范围 必做 5 以发射波长对荧光强度所作的图称为（E ）A 激发光谱 B照射光谱 C 紫外发射光谱 D 吸收光谱 E 荧光光谱（发射光谱）必做 6 放射免疫法与荧光免疫法的区别在于（D ）A 抗体不同 B 亲和力不同 C 标准抗原不同 D 标记物不同 E 原理不同 必做 7 高效液相中流动相极性大于固定相的称为（A）A.RP-HPLC B.HPTLC C.NP-HPLC D.LLPC E.HPCE 必做 一般键合相色谱的使用pH 范围为（E ）A 39 B 29 C 27 D 38 E 28 必做 高效液相中流动相极性大于固定
21、相的称为（A ）A.RP-HPLC B.HPTLC C.NP-HPLC D.LLPC E.HPCE 必做 五、多选题 第 X 章 题目 要求 1 体内药物分析的任务包括（ABCD ）.A 分析方法的研究 B 血药浓度监测 C 药动学研究 D 体内内源性物质测定 E 新药质量标准研究 必做 2 药物二相代谢物缀合物（结合物）的水解方法有（ACD ）A 酸水解 B 碱水解 C 溶剂解 D 酶水解 E 离子对法 必做 测定血浆蛋白结合率的常用方法（AB ）A、平衡透析法 B、超滤法 C、酶法 D、衍生化法 E、反相色谱法 必做 药物在体内的一相代谢包括（AC ）A 氧化反应 B甲基化反应 C 水解反
22、应 D 缀合反应 E与大分子结合反应 必做 3 影响液-液提取的因素有(ABC )A 水相 pH B 提取溶剂 C 离子强度 D 流速 E 装样量 必做 影响液-固提取的主要因素有(CDE )A 水相 pH B 提取溶剂 C 固定相 D 洗脱液流速 E 样品装载量 必做 4 体内药物分析方法的专属性主要考察（BDE ）A 辅料 B 共服药 C 有关物质 D 内源性杂质 E 代谢物 必做 5 紫外分光光度法中消除干扰的方法有（ABE ）A 差示分光光度法 B 导数光谱法 C 二极管阵列法 D 化学发光法 E 双波长法 必做 6 RIA 中分离结合与游离标记物的方法有（ACDE ）A 双抗体法 B
23、 LC/MS法 C 吸附法 D 固相法 E 沉淀法 必做 抗血清的鉴定指标（BCD ）A 吸光强度 B 特异性 C 活度 D 滴度 E 放射性强度 必做 免疫分析中基本试剂包括（ADE ）A 特异性抗体 B 分离试剂 C 免疫原 D 标准抗原 E 标记抗原 必做 7 气相色谱中常用流动相为（CDE ）A 甲醇-水 B 乙腈-水 C 氦气 D 氮气 E 氢气 必做 在 HPLC 法中常用来调节流动相 pH 的酸碱是（ABDE ）A 枸橼酸 B 稀醋酸 C 稀硫酸 D 三乙胺 E 磷酸盐 必做 10 气-质联用仪中接口的作用是（BC ）A 连接作用 B 使压力匹配 C 组分浓缩 D 检测器作用 E 电离作用 必做