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1、第1页/共10页第2页/共10页（三）实验材料和用具（三）实验材料和用具 实验材料：实验材料：黄瓜无菌苗黄瓜无菌苗实验药品实验药品：MS、1mg/ml NAA、1mg/ml 6-BA、1mol/L HCl、1mol/L NaOH、蒸馏、蒸馏水、灯用酒精、水、灯用酒精、70酒精、无菌水酒精、无菌水。灭菌培养基：灭菌培养基：MS1（MS+1.0mg/LBA+0.5mg/L NAA）第3页/共10页实验用具：实验用具：天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角瓶、天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。试纸、电炉、高压灭菌锅。无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、解剖刀、镊子
2、、剪刀、酒精灯、酒精棉无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。第4页/共10页（四）实验步骤（四）实验步骤 1.配制以下培养基各配制以下培养基各100ml：MS2：MS+2.0mg/LBA+0.1mg/L NAAMS3：MS+2.0mg/LBA+0.5mg/L NAAMS4：MS+2.0mg/LBA+2.0mg/L NAA取取200ml烧杯烧杯3只，标记，各加入只，标记，各加入4g MS培养基和培养基和100ml蒸馏水，加热直至完蒸馏水，加热直至完全溶解。全溶解。各加入各加入
3、1mg/ml 6-BA 200l，并不断搅拌。，并不断搅拌。分别加入分别加入 1mg/ml NAA 10、50、200l，并不断搅拌。，并不断搅拌。用用1mol/L HCl或或NaOH调节调节pH至至5.86.0。第5页/共10页2.分装。将分装。将3种培养基分别分装到种培养基分别分装到4个三角瓶中，个三角瓶中，做好标记。做好标记。3.灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121、0.1MPa条条件下灭菌件下灭菌1520min。操作按仪器操作步骤进。操作按仪器操作步骤进行。灭菌后待压力下降到行。灭菌后待压力下降到0Pa时取出，凝固后时取出，凝固后待用。待用。第6页/共10页4.接种接
4、种进入无菌室，用进入无菌室，用70乙醇擦洗双手和工作台面，点燃乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒精灯。酒精灯。解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水润湿。润湿。在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。镊子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。剪成剪成510mm小段（根部去掉部分根尖，叶片去叶缘小段（根部去掉部分根尖，叶片去叶缘后剪成后剪成50mm2左右的小片），每平
5、皿接种左右的小片），每平皿接种35段（片）段（片）。每组接种。每组接种8瓶，根、茎段、茎尖、叶各瓶，根、茎段、茎尖、叶各2瓶。瓶。光照培养箱光照培养箱25暗培养。暗培养。第7页/共10页作业作业1.1周周后后观观察察培培养养体体系系有有无无污污染染，计计算算每每一一个个平平皿皿内内染染菌菌外外植植体体数数和和外外植植体体外外的的菌菌落落数数，分分析染菌原因。析染菌原因。2.1周周后后计计算算每每种种外外植植体体的的愈愈伤伤组组织织诱诱导导率率（形形成成愈愈伤伤组组织织的的外外植植体体数数/总总接接种种外外植植体体数数100）。）。第8页/共10页实验报告内容实验报告内容实验名称实验名称实验目的实验目的实验原理实验原理实验材料和用具实验材料和用具实验步骤实验步骤实验结果与分析实验结果与分析第9页/共10页感谢您的观看。第10页/共10页