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1、 原核生物 真核生物原料:模板:酶:其他因子:NTP (ATP UTP CTP GTP)DNA RNA-聚合酶 RNA-聚合酶 I II III 转录因子原核生物的基因由于没有外显子和内含子，转录产生的信使RNA不需要剪切、拼接等加工过程。而真核生物有内含子、外显子，因此转录产生的RNA需要加工修饰！？转录：模板:第1页/共24页原核生物RNA-聚合酶真核生物RNA-聚合酶酶：第2页/共24页原核生物每一转录区段可视为一个转录单位，称为操纵子(operon)。操纵子包括若干个结构基因及其上游(upstream)的调控序列。第3页/共24页原核生物上游调控序列:中的启动子是RNA聚合酶结合模板D
2、NA的部位，也是控制转录的关键部位。转录起始区：A-T配对比较多，A-T多是有利于解链的-10区的“一致性序列”为TATAAT-35区最大一致性序列是TTGACA（启动子）第4页/共24页真核生物转录起始前的上游区段调控序列：不同物种、不同细胞或不同的基因，转录起始点上游可以有不同的DNA序列，但这些序列都可统称为顺式作用元件(cis-acting element)。顺式作用元件包括启动子、启动子上游元件(upstream promoter elements)等近端调控元件和增强子(enhancer)等远隔序列。起始点上游多数有共同的TATA序列，称为Hognest盒或TATA盒(TATA b
3、ox)。通常认为这就是启动子的核心序列。TATA盒虽然没有原核的-10区、-35区那么典型，没有原核那样的相对较高较精确的丰度、区段；除TATA盒；还有一些叫“盒”或不叫的调控序列。启动子上游元件是位于TATA盒上游的DNA序列，多在转录起始点约-40-100nt的位置，比较常见的是GC盒和CAAT盒。第5页/共24页第6页/共24页转录起始:原核生物：RNA聚合酶和DNA的特殊序列启动子(promoter)结合后，就能启动RNA合成。RNA聚合酶全酶(2)与模板结合，形成闭合转录复合体。DNA双链局部解开，形成开放转录复合体。在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形成转录起始复合物。真核生
4、物：转录起始需要启动子、RNA聚合酶和转录因子的参与。少数几个反式作用因子的搭配启动特定基因的转录真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子，形成转录起始复合物。真核生物RNA聚合酶-DNA-RNA复合物 第7页/共24页转录延长：原核生物转录过程中有羽毛状现象：启动子清除，亚基脱落，RNApol聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA模板前移，在核心酶作用下NTP不断聚合，RNA链不断延长。原核生物在同一DNA模板上，有多个转录同时在进行，转录尚未完成，翻译已在进行。真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。第8页/共24
5、页转录终止：RNA聚合酶在DNA模板上停顿下来不再前进，转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来。原核生物的转录终止分类：依赖因子的转录终止非依赖因子的转录终止因子：识别富含C的RNA链 ATPase活性 解螺旋酶（helicase）活性因子第9页/共24页真核生物的转录终止：在超出千百个核苷酸后停顿，转录后修饰有多聚腺苷酸（poly A）尾巴结构加进去。在读码框架下游常有一组公共序列AATAAA 及 GTGTGT序列，这些序列称为转录终止修饰点。第10页/共24页原核生物真核生物转录对比：第11页/共24页翻译：mRNA是蛋白质生物合成的直接模板:遗传学将编码一个多肽的遗传单位称为顺反子(ci
6、stron)。原核细胞中数个结构基因常串联为一个转录单位，转录生成的mRNA可编码几种功能相关的蛋白质，为多顺反子(polycistron)。真核mRNA只编码一种蛋白质，为单顺反子(single cistron)许多真核生物基因转录后有一个对mRNA外显子加工的过程,使mRNA序列中出现移码、错义、无义突变，导致同一前体mRNA翻译出序列、功能不同的蛋白质。这种基因表达的调节方式称为mRNA编辑（mRNA editing）。第12页/共24页核蛋白体是蛋白质生物合成的场所:核蛋白体是细胞质和线粒体中无膜包裹的颗粒状细胞器，具蛋白质合成功能。核蛋白体包括 rRNA(核糖体RNA)和蛋白质，直径
7、为 20-25nm,真核细胞的核蛋白体比原核细胞的大。第13页/共24页蛋白质生物合成需要酶类、蛋白质因子:第14页/共24页第15页/共24页氨基酸的活化：氨基酸与特异的tRNA结合形成氨基酰-tRNA的过程称为氨基酸的活化，氨基酸活化形成氨基酰-tRNA。原核、真核生物-都有两种Met-tRNA：原核生物起始氨基酰-tRNA:fMet-tRNAfMet tRNAfMet与甲硫氨酸结合后，甲硫氨酸很快被甲酰化为N-甲酰甲硫氨酸，于是形成于是形成N-甲酰甲硫氨酰甲酰甲硫氨酰-tRNA(fMet-tRNAfMet)。真核生物起始氨基酰-tRNA:Met-tRNAiMettRNAiMet与甲硫氨酸
8、结合与甲硫氨酸结合后形成后形成Met-tRNAiMet。参与肽链延长的甲硫氨酰-tRNA：Met-tRNAMet第16页/共24页肽链合成起始:原核生物:起始tRNA是fMet-tRNA(fMet上角标）30s小亚基首先与mRNA模板相结合再与fMet-tRNA(fMet上角标）结合最后与50s大亚基结合真核生物:起始tRNA是 Met-tRNA(Met上角标）40s小亚基首先与Met-tRNA(Met上角标）相结合再与模板mRNA结合最后与60s大亚基结合生成起始复合物第17页/共24页原核生物位于AUG上游8-13个核苷酸处的一个短片段（4-6个核苷酸）叫做SD序列。这段序列正好与tRNA
9、 30S小亚基中的16s rRNA3端一部分序列互补，因此SD序列也叫做核糖体结合序列。其中有三种IF参加起始复合物的形成。真核生物mRNA中的帽子结构和帽子结合蛋白复合物结合。至少有十种eIF参与起始复合物的形成。真核生物翻译起始第18页/共24页原核生物肽链合成的延长：1.进位进位:氨基酰氨基酰-tRNA按照按照mRNA模板的指令进入并结合到核蛋白体模板的指令进入并结合到核蛋白体A位位2.成肽成肽:转肽酶转肽酶催化，核蛋白体催化，核蛋白体P位上起始氨基酰位上起始氨基酰-tRNA转移到转移到A位，位，与与A位上氨基位上氨基酰酰-tRNA的的-氨基结合形成肽键氨基结合形成肽键3.转位转位转位酶
10、转位酶催化，核蛋白体向催化，核蛋白体向3-端移动一个密码子的距离，使端移动一个密码子的距离，使mRNA上下一个上下一个密码子进入核蛋白体密码子进入核蛋白体A位、而占据位、而占据A位的肽酰位的肽酰-tRNA移入移入P位位 延长因子延长因子:EF-Tu EF-Ts EF-G真核延长过程与原核基本相似但有不同的反应体系和延长因子：eEF-1 eEF-1 eEF-2 真核细胞核蛋白体没有E位，转位时卸载的tRNA直接从P位脱落第19页/共24页肽链合成终止：核蛋白体A位出现mRNA的终止密码子后，多肽链合成停止，肽链从肽酰-tRNA中释出，mRNA、核蛋白体大、小亚基等分离。原核生物终止阶段需要释放因
11、子RF-1、RF-2和 RF-3参与释放因子功能：I 识别终止密码子 II诱导转肽酶转变为酯酶活性IIIRF-3有GTP酶活性，能介导RF-1、RF-2与核蛋白体的相互作用真核生物翻译终止过程与原核生物相似，但只有1个释放因子eRF，可识别所有终止密码子，完成原核生物各类RF的功能。第20页/共24页第21页/共24页蛋白质翻译后修饰：真核生物中新生(未成熟)分泌蛋白的N端有可被细胞转运系统识别的特征性、保守的氨基酸序列(约13-36AA,含疏水AA较多),称信号肽.原核表达是边转录边表达的，没有区域间隔。信号肽大多是疏水性的，溶解性较差，所以在原核中的表达会有些困难。另外原核生物本身的基因中是不存在什么信号肽片段的，信号肽序列中的密码子对原核生物来说可能是稀有密码子。第22页/共24页第23页/共24页感谢您的观看！第24页/共24页