《王金发《细胞生物学》课件第2章(PPTminimizer)讲解学习.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《王金发《细胞生物学》课件第2章(PPTminimizer)讲解学习.ppt（36页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、王金发细胞生物学课件第2章(PPTminimizer)OUTLINE2.1 TECHNIQUES OF MICROSCOPY2.1 TECHNIQUES OF MICROSCOPY2.2 TECHNIQUES OF CYTOCHEMISTRY2.2 TECHNIQUES OF CYTOCHEMISTRY2.3 TECHNIQUES OF CELL SORTING2.3 TECHNIQUES OF CELL SORTING2.4 CELL ENGINEERING2.4 CELL ENGINEERING2.5 TECHNIQUES OF ISOLATION2.5 TECHNIQUES OF ISO
2、LATION2.6 METHODS OF MOLECULAR BIOLOGY2.6 METHODS OF MOLECULAR BIOLOGY2普普通通光光学学显显微微镜镜32.1 TECHNIQUES OF MICROSCOPY2.1 TECHNIQUES OF MICROSCOPY2.1.1 The Light Microscope2.1.1 The Light Microscope Resolving power,RResolving power,R 显微镜的数值孔径显微镜的数值孔径 (numeric aperture(numeric aperture，NA)NA)放大率放大率(magni
3、fication,M)(magnification,M)4波波长长与与分分辨辨率率5 2.1.2 2.1.2 光镜标本制备技术光镜标本制备技术 细胞染色技术细胞染色技术 组织固定和切片技术组织固定和切片技术 细胞化学技术细胞化学技术 利用 Feulgen反应可特异性检测细胞中DNA。2.1.3 2.1.3 常用光学显微镜常用光学显微镜 普通双筒显微镜普通双筒显微镜 (binoular microscope)(binoular microscope)荧光显微镜荧光显微镜 (fluorescence microscope)(fluorescence microscope)相差显微镜相差显微镜 (p
4、hase contrast microscope)(phase contrast microscope)6 2.1.3 2.1.3 常用光学显微镜常用光学显微镜倒置显微镜倒置显微镜物镜与照明系统的位置颠倒。物镜与照明系统的位置颠倒。集集光光器器与与载载物物台台之之间间的的工工作作距距离离提提高高,可可以以放放置置培培养养皿皿、培培养养瓶瓶等等容容器器,直直接接对对培培养养的的细细胞胞进进行行照照明明和和观察。观察。7倒倒置置显显微微镜镜8 2.2 2.2 电子显微镜电子显微镜 (Electron microscope)(Electron microscope)1 1932932年年德德国国学学
5、者者Max Max KnollsKnolls和和Ernst Ernst RuskaRuska用用波波长长比比光光短短得得多多的的电电子子作作光光源源,发发明明了了第第一一台台电电子子显显微微镜镜，大大大大提提高高了了显显微微镜镜的的分分辨辨率率，开拓了超微世界。开拓了超微世界。92.2.1 2.2.1 电子显微镜概述电子显微镜概述电子显微镜的基本结构电子显微镜的基本结构 电子显微镜基本结构由三大部分组成:电子光学系统电子光学系统由照明系统、标本室、成像系统、观察窗和记录用的照相机等 组成；真空系统真空系统是保持电镜的真空度；电子学系统电子学系统即供电系统，需要高压稳压。10电子染色电子染色 标
6、本对电子的散射能力取决于其组成标本对电子的散射能力取决于其组成元素的原子序数元素的原子序数,原子序数越高原子序数越高,散射的电散射的电子越多子越多,反差就越大。反差就越大。生物分子是由一些原生物分子是由一些原子序数很低的轻元素子序数很低的轻元素(氢、氧、碳、氮等氢、氧、碳、氮等)组成的组成的,它们散射电子的能力很弱它们散射电子的能力很弱,在电镜在电镜下几乎不存在明暗反差。下几乎不存在明暗反差。为使生物样品加为使生物样品加大反差大反差,就要进行染色就要进行染色,即用重金属增加电即用重金属增加电子散射能力子散射能力,称为称为电子染色电子染色。11电电镜镜样样品品的的制制备备122.2.2 Tran
7、smission 2.2.2 Transmission Electron Microscope Electron Microscope冰冻蚀刻术冰冻蚀刻术(freeze-etching)(freeze-etching)是专门观察样品外表面的投影是专门观察样品外表面的投影复型术。复型术。13冰冰冻冻蚀蚀刻刻技技术术14 2.2.3 Scanning Electron Microscope 原理：原理：目前一般扫描电镜的分辨率约目前一般扫描电镜的分辨率约6060100(6100(610nm)10nm)。2.2.4 Scanning Tunneling2.2.4 Scanning Tunneling
8、 Microscope,STM Microscope,STM基本原理基本原理2.2.4 2.2.4 扫描隧道显微镜扫描隧道显微镜 扫描隧道显微术在生命科学中的应用扫描隧道显微术在生命科学中的应用 DNADNA结构研究；结构研究；胶原、纤维和蛋白质结构研究；胶原、纤维和蛋白质结构研究；细胞膜表面结构的研究。细胞膜表面结构的研究。15扫扫描描隧隧道道显显微微镜镜工工作作原原理理16扫描扫描隧道隧道电镜电镜下的下的DNADNA双双螺旋螺旋17 2.3 TECHNIQUES OF 2.3 TECHNIQUES OF CYTOCHEMISTRY CYTOCHEMISTRY 2.3.1 2.3.1 酶细胞
9、化学技术酶细胞化学技术 酶酶细细胞胞化化学学技技术术就就是是通通过过酶酶的的特特异异细细胞胞化学反应来显示酶在细胞内的定位。化学反应来显示酶在细胞内的定位。2.3.2 2.3.2 免疫细胞化学技术免疫细胞化学技术 免疫荧光技术免疫荧光技术 免疫电镜技术免疫电镜技术182.4 Radioautography2.4 Radioautography 放放射射自自显显影影的的原原理理是是利利用用放放射射性性同同位位素素所所发发射射出出来来的的带带电电离离子子(或或离离子子)作作用用于于感感光光材材料料的的卤卤化化银银晶晶体体,从从而而产产生生潜潜影影。这这种种潜潜影影可可用用显显影影液液显显示示,成成
10、为为可可见见的的“像像”。因因此此,它它是是利利用用卤卤化化银银乳乳胶现象胶现象,检查和测量放射性的一种方法。检查和测量放射性的一种方法。19放放射射自自显显影影术术20 2.5 2.5 分析细胞学技术分析细胞学技术 2.5.1 2.5.1 流式细胞术流式细胞术 (Flow cytometry)(Flow cytometry)流式细胞器流式细胞器 (Flow cytometer,FCM)(Flow cytometer,FCM)21流流式式细细胞胞术术22细细胞胞分分选选23细细胞胞标标记记24染染色色体体分分选选25染染色色体体标标记记262.6 2.6 细胞工程技术细胞工程技术(Cell E
11、ngineering)(Cell Engineering)2.6.1 2.6.1 细胞培养细胞培养 体外细胞培养的条件体外细胞培养的条件 无血清培养无血清培养 环境因素环境因素 无菌环境、合适的温度、一定的渗透无菌环境、合适的温度、一定的渗透 压和气体环境、压和气体环境、O O2 2和和COCO2 2。后者对于维。后者对于维 持细胞培养液的酸碱度十分重要。持细胞培养液的酸碱度十分重要。代谢物和废物排除代谢物和废物排除：27Knockout Mice The technique used to generate knockout mice was developed in the late 1980s by Marlo Capecchi at the University of Utah.实验分三步实验分三步 构建重组体；构建重组体；转基因敲除；转基因敲除；筛选。筛选。28基基因因敲敲除除29基基因因敲敲除除示示意意图图（1 1）30基基因因敲敲除除示示意意图图（2 2）31基基因因敲敲除除原原理理32 Knockout Mice 33未未来来的的生生物物技技术术34用这个要好很多的我们要学习，就得想方法！35此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢