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1、实验课注意事项：不迟到，不早退，做好课前预习工作 穿好白大褂 使用煤气时注意安全 试剂用后及时归位保持严肃认真的实验态度 及时记录实验结果，按时完成实验报告第1页/共49页实验报告格式：1 1、实验目的2 2、实验原理3 3、实验操作4 4、实验结果（真实、客观）5 5、讨论（实验报告的核心）6 6、意见与建议（可选择）第2页/共49页实验一 医化实验基本操作玻璃仪器的洗涤吸量管的使用 注意：右手食指按住吸量管口溶液的混匀 指弹混匀、搅拌混匀、倒转混匀、旋涡混合器混匀等第3页/共49页实验二 电离平衡与缓冲溶液q实验目的 1、掌握同离子效应的原理 2、学习通过韩-哈方程式配制缓冲溶液 3、观察
2、稀释对缓冲溶液pH值的影响 4、学习吸量管及pH计的使用 第4页/共49页 1、同离子效应q实验原理HAc HHAc H+Ac+Ac-NaAc NaNaAc Na+AcAc-例：同离子效应使得HAc的电离度降低，溶液的pH升高第5页/共49页 酸碱指示剂：红橙黄红淡红黄无色绿蓝8106甲基橙酚酞溴麝香草酚蓝第6页/共49页pH=pKa+lgpH=pKa+lg 盐 酸 韩-哈方程式也可表示为：（盐的摩尔数）（酸的摩尔数）n盐/V溶液n酸/V溶液当酸与盐混合前的浓度相等时：=pKa+lgpKa+lg V盐 V酸pHpH=pKa+lgpKa+lg n盐 n酸pHpH2、缓冲溶液第7页/共49页 缓冲
3、溶液加水稀释时，盐浓度与酸浓度作相同 比例稀释，因此，缓冲溶液的pHpH几乎不因稀释 而改变。缓冲溶液的缓冲能力有一定限度，超过该限度 缓冲溶液的pH也会发生较大改变第8页/共49页q实验操作1、同离子效应（1）各1支+NH3.H2O 2ml+1滴酚酞 1滴NH4Cl 1滴H2O摇匀观察结果1ml=15滴（2）各1支+醋酸 2ml+1滴甲基橙 1滴NaAc 1滴H2O摇匀观察结果第9页/共49页2、缓冲溶液（1）测完pH值后2管保留用吸量管进行操作大试管3支第10页/共49页另取2支小试管，以上面试管2里的缓冲液进行实验溴麝香草酚 蓝各1滴（2）第11页/共49页（3）另取3支小试管，以上面试
4、管2里的缓冲液进行实验溴麝香草酚蓝各2滴，混匀NaOH 3滴，摇匀，观察结果继续滴加，记录变色时所加NaOH滴数HCl 3滴，摇匀，观察结果继续滴加，记录变色时所加HCl滴数第12页/共49页2号管缓冲液测好pH后切勿立即倒去吸量管的使用pH计的使用 注意事项：第13页/共49页1、看清刻度，选择适当容量的吸量管2、左手洗耳球，右手吸量管；食指按住管 口，稳住液面3、拿吸量管的时候，刻度面向自己4、读刻度时，眼睛与刻度线同一水平，以 下凹面为准5、吸取另外一种试剂时，要润洗q 吸量管的使用第14页/共49页实验三 功能基反应q实验目的1、掌握几功能基的主要化学性质2、了解乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇
5、互变异构现象第15页/共49页1、双键与卤素的加成反应q实验原理C=C +Br2 -CH-CH-BrBr 红棕色的溴褪色，可用于鉴定有机物中 是否存在不饱和键第16页/共49页2、酚性羟基的反应（1）苯酚的弱酸性（2）酚性羟基与FeCl3的显色反应苯酚FeCl3紫色络合物 可用于鉴别酚和醇第17页/共49页3、醛基的反应 O|R-C-H +2Cu（OH）2 O|R-C-OH +Cu2O +2H2O砖红色沉淀（班氏试剂）酮无此反应，故可用于鉴别醛和酮第18页/共49页第19页/共49页4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象 使三氯化铁溶液呈紫红色反应具有烯醇式结构 与苯肼反应生成苯腙，颜色？使红
6、棕色溴的四氯化碳溶液褪色具有双键结构 O O|CH3-C-CH2-C-O-C2H5第20页/共49页说明乙酰乙酸乙酯是酮式和烯醇式两种异构体的混合物，两者之间相互转变，处于动态平衡。O O|CH3-C-CH2-C-O-C2H5 OH O|CH3-C=CH-C-O-C2H5室温时 酮型（93%）烯醇型（7%）凡两种或两种以上的异构体能互相转变，并以 动态平衡存在的现象互变异构现象第21页/共49页5、尿素的化学性质OH-紫红色物质缩二脲反应：缩二脲 +CuSO4（少量）第22页/共49页1、烯基的反应q实验操作+硬脂酸10滴+油酸10滴+植物油10滴逐滴加入5%Br2的CCl4溶液，不断振荡试管
7、，记录结果 不是溴水第23页/共49页2、酚性羟基的反应（1）+液体苯酚2滴 水5滴，摇匀+10%NaOH 2 滴 摇匀，观察（2）+0.5%苯酚溶液10滴+0.5%水杨酸溶液10滴+苯甲醇10滴各加入1%FeCl31滴，观察结果第24页/共49页3、醛基反应（大试管6支）试剂（滴）1 2 3 4 5 640%乙醛液 5 10%NaOH 5 丙酮液 4 1%葡萄糖 4 1%果糖 4 1%蔗糖 4 42mol/L盐酸 10班氏试剂 10 10 10 10 10 1-5管于沸水中加热3分钟，观察结果；6号管加蒸馏水10滴，于沸水中加热10分钟，不时振荡，再加10%NaOH10滴，班氏试剂10滴混匀
8、，于沸水中再加热3分钟，与5号管比较，记录结果第25页/共49页4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象（1）+10%乙酰乙酸 乙酯2滴+2，4-二硝基苯肼10 滴，振荡，观察结 果，写出反应式（2）+10%乙酰乙酸 乙酯10滴+1%FeCl31滴，观察结果再加溴水1滴，观察变化，并加以解释第26页/共49页5、尿素的化学性质+尿素1匙小火加热，待尿素熔化红色石蕊试纸放置管口，观察变化继续加热待管内物质凝固后冷却试管，加水2ml玻棒搅动促溶，吸取上层溶液于另一试管中再加入10%NaOH、1%CuSO4各1滴，观察变化第27页/共49页q注意事项1、注意区分以下试剂：液体苯酚5%苯酚溶液 5%Br
9、2的CCl4溶液溴水2、液体苯酚预先加热，盛放其的试管也要预热3、缩二脲反应中试管冷却后再加水，并用玻棒 轻轻搅动 4、挥发性试剂全部摆放在边台上，用后及时归位 第28页/共49页实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定实验目的：1、掌握组织中的核酸的提取与鉴定2、掌握离心机的使用3、熟悉加样器的使用第29页/共49页实验原理 1、提取原理：a:DNA和RNA大部分与Pro结合成核蛋白。b:核蛋白可被三氯醋酸沉淀下来。c:10%NaCl溶液从沉淀中提取核酸，生成核酸 的钠盐d:乙醇把核酸钠沉淀下来 第30页/共49页 核苷（B-R）磷酸（P）2、鉴定原理核酸核苷酸 基碱（B）戊糖（R）核酸的基本组成
10、单位嘌呤（A G）嘧啶核糖（C U）脱氧核糖（C T）第31页/共49页a:磷酸+钼酸铵 磷钼酸 钼蓝b:嘌呤+AgNO3 絮状嘌呤银c:核糖 糠醛 绿色化合物d:脱氧核糖 -羟基-酮基戊醛 蓝色化合物氨基萘酚磺酸H+3，5-二羟基甲苯H+二苯铵第32页/共49页操作步骤1、提取步骤制备肝组织匀浆：脱臼处死或断头处死 剖腹取全部肝组织 生理盐水冲洗血污，吸干净 三氯醋酸2ml 分散匀浆机匀浆第33页/共49页分离提取于全部匀浆内加入生理盐水2ml，玻棒混匀静置3min，3000rpm 3min,弃上清沉淀加入10%NaCl 2ml，沸水浴3min,玻棒搅拌取出冷却，3000rpm 3min取上
11、清，逐滴95%酒精2管，混匀静置5min，3000rpm 5min弃上清，得白色核酸钠第34页/共49页核酸的水解：短试管内加入5%H2SO4 玻棒搅匀 沸水浴中10min第35页/共49页成分的鉴定沸水浴35min，观察结果，静置15min,观察结果嘌呤的鉴定嘌呤的鉴定第36页/共49页磷酸的鉴定磷酸的鉴定放置3min，沸水浴35min，观察颜色差异第37页/共49页核糖的鉴定核糖的鉴定沸水浴510min，观察颜色差异第38页/共49页脱氧核糖的鉴定脱氧核糖的鉴定沸水浴510min，观察颜色差异第39页/共49页注意事项注意事项1、做鉴定部分时尽量用大试管，所有标 号朝试管上方2、玻璃棒搅拌
12、要轻柔3、胶头滴管使用要注意顺序，避免污染第40页/共49页 移液枪的使用1、看清最大刻度，选择适当容量的移液枪（最大刻度和读数的关系）2、先调好刻度3、打至第一档吸入试剂4、打出试剂时要按至第二档5、使用加样器时要慢、稳，不要有气泡出 现第41页/共49页离心机的使用 台秤平衡 对称插入 定时定速第42页/共49页实验四 蛋白质呈色反应、沉淀反应及等电点的测定实验目的：1、掌握双缩脲法、茚三酮法、Folin法定性检查蛋白质的方法 2、验证几种蛋白质沉淀反应的现象及酸碱性环境的影响 3、了解蛋白质等电点测定 第43页/共49页一、蛋白质的呈色反应实验原理：双缩脲反应：含有CONH 、CSNH、
13、CH2NH等基团的化合物在浓碱液中与硫酸铜生成紫红色复合物。茚三酮反应：含有自由氨基的化合物与茚三酮共热，生成紫色化合物。Folin法：酚性羟基在碱性环境中，与酚试剂生成钼蓝钼蓝第44页/共49页操作步骤（1）+1：10鸡蛋白2滴1%CuSO4 1滴 +10%NaOH 5 滴 混匀，观察颜色（2）+1：10鸡蛋白4滴+蒸馏水10滴+0.1%茚三酮乙醇8滴，混匀，观察颜色 蒸馏水6滴+10%NaOH3 滴，酚试剂1滴，混匀，观察颜色+1：10鸡蛋白2滴+0.25%白明胶 0.25%酚溶液 0.25%酪氨酸第45页/共49页二、蛋白质的沉淀反应 实验原理：实验原理：1、盐析：破坏水化膜，中和电荷、
14、盐析：破坏水化膜，中和电荷常用中性盐：（常用中性盐：（NH4）2SO4、Na2SO4、NaCl2、重金属盐类沉淀：、重金属盐类沉淀：条件：条件：PH PI，蛋白质带蛋白质带负电荷负电荷 重金属离子：重金属离子：Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ag+3、生物碱试剂沉淀：、生物碱试剂沉淀：条件：条件：PH PI，蛋白质带蛋白质带正电荷正电荷 生物碱试剂：钨酸、苦味酸、鞣酸生物碱试剂：钨酸、苦味酸、鞣酸操作见讲义操作见讲义第46页/共49页三 蛋白质等电点的测定在某一PH下，蛋白质带正电荷和负电荷数相等，容易彼此结合形成沉淀，此PH值称为等电点。操作见讲义第47页/共49页注意事项1、酪氨酸和酪蛋白，酚溶液和酚试剂勿混淆2、等电点测定时用大试管3、先做第二个盐析实验第48页/共49页感谢您的观看！第49页/共49页