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1、实验二培养基的制备与高实验二培养基的制备与高压锅的使用压锅的使用第1页，共10页，编辑于2022年，星期五一、目的与要求一、目的与要求1、掌握一般培养基制备的原则和要求、掌握一般培养基制备的原则和要求2、了解培养基的配制原理，掌握制备培、了解培养基的配制原理，掌握制备培养基的过程养基的过程3、学习高压蒸汽灭菌锅操作技术、学习高压蒸汽灭菌锅操作技术第2页，共10页，编辑于2022年，星期五二、原理二、原理 不同的微生物生长繁殖都需要提供一定的营养条件，在实验室不同的微生物生长繁殖都需要提供一定的营养条件，在实验室中，微生物的营养由培养基来提供。中，微生物的营养由培养基来提供。培养基：是按照微生物
2、生长繁殖所需要的营养物质，用人工方法配培养基：是按照微生物生长繁殖所需要的营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。制而成的营养基质。除营养条件以外，微生物必须在最适酸碱度范围内才表现出最大除营养条件以外，微生物必须在最适酸碱度范围内才表现出最大生命力，因此，应针对不同的微生物将培养基的生命力，因此，应针对不同的微生物将培养基的pH值调节到适当值调节到适当范围。范围。第3页，共10页，编辑于2022年，星期五培养基的分类培养基的分类（1）根据培养基原料来源不同：）根据培养基原料来源不同：天然培养基、合成培天然培养基、合成培养基、半合成培养基养基、半合成培养基（2）根据物理性状分为：）根据物理性状
3、分为：液体培养基、固体培养基、液体培养基、固体培养基、半固体培养基半固体培养基（3）根据培养目的不同：）根据培养目的不同：鉴别培养基、分离培养基、鉴别培养基、分离培养基、选择培养基选择培养基第4页，共10页，编辑于2022年，星期五 三、操作步骤示意图三、操作步骤示意图按培养基按培养基配方称量配方称量加水加加水加热熔化热熔化调节调节pH值值分装分装包装包装灭菌灭菌检查灭菌检查灭菌彻底与否彻底与否第5页，共10页，编辑于2022年，星期五四、培养基的配制四、培养基的配制（1）称量）称量 按培养基配方称量。按培养基配方称量。（2）溶化）溶化 用用烧烧杯杯先先装装少少许许水水,将将培培养养基基倒倒入
4、入烧烧杯杯中中，加加足足水水，然然后后在电炉上加热溶化。在电炉上加热溶化。（3）PH值值 用用PH测测量量仪仪测测定定，并并用用1%氧氧化化钠钠或或5%盐盐酸酸调调节节到到所所需需的的PH值。值。（4）分装）分装 根据不同需要，立即趁热装入试管或培养皿中。根据不同需要，立即趁热装入试管或培养皿中。第6页，共10页，编辑于2022年，星期五注意事项注意事项：（1）不要使培养基沾在管口，如沾上，需用干净的纱布擦干净。）不要使培养基沾在管口，如沾上，需用干净的纱布擦干净。（2）液体培养基液体培养基：分装高度以试管的：分装高度以试管的1/4左右为宜。左右为宜。固体培养基固体培养基：分装试管，其装量为管
5、高的：分装试管，其装量为管高的 1/61/5灭菌后灭菌后制成斜面。分装培养皿，普通培养皿容量以制成斜面。分装培养皿，普通培养皿容量以15ml为宜。为宜。半固体培养基半固体培养基：分装试管一般以试管高度的：分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌为宜，灭菌后，垂直待凝成半固体深层琼脂。后，垂直待凝成半固体深层琼脂。（3）装好培养基的试管都要加上试管塞，这样既可过滤空气，）装好培养基的试管都要加上试管塞，这样既可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发。避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发。（4）包装：试管口部分，用报纸包扎。方式：）包装：试管口部分，用报纸包扎。方式：第7页，共10页，
6、编辑于2022年，星期五五、高压蒸汽灭菌五、高压蒸汽灭菌 高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌锅锅是是一一个个耐耐高高压压又又密密闭闭的的金金属属锅锅。它它是是利利用用在在密密闭闭条条件件下下产产生生高高压压蒸蒸汽汽来来达达到到灭灭菌菌的的效效果果。其其温温度度在在121左左右右，有有强强大大的的杀杀菌菌能能力力。因此它是一种用途广泛，效率高的灭菌工具。因此它是一种用途广泛，效率高的灭菌工具。第8页，共10页，编辑于2022年，星期五具体操作步骤：具体操作步骤：（1）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）。）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）。（2）摆摆入入上上述述包包装装好好的的待待灭灭菌菌的的培培养养
7、基基（注注意意：不不要要摆摆得得太太挤挤，以以免免影影响响蒸蒸汽汽流流通通和和灭菌效果）。灭菌效果）。（3）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）。）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）。（4）打打开开放放气气阀阀，打打开开电电源源，自自开开始始产产生生蒸蒸汽汽后后10分分钟钟（此此时时蒸蒸汽汽锅锅内内的的冷冷空空气气由由排排气气阀阀排排尽尽）关关紧紧放放气气阀阀，让让温温度度随随蒸蒸汽汽压压力力上上升升而而上上升升，当当达达所所需需压压力力时时控控制制热热源源维维持持所所需需时时间间（1530分分钟钟）然然后后停停止止加加热热，让让其其自自然然冷冷却。却。（5）待压
8、力降至）待压力降至0时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。注注意意：压压力力未未降降至至0时时，切切勿勿打打开开锅锅盖盖，否否则则突突然然降降压压，招招致致培培养养基基沸沸腾腾，沾沾湿湿棉棉塞塞，甚甚至冲出管外。至冲出管外。（6）自自锅锅中中取取出出灭灭菌菌好好的的培培养养基基，放放置置稍稍冷冷却却后后摆摆成成斜斜面面，或或倒倒入入灭灭菌菌的的培培养养皿皿（15ml左左右右）中中冷冷却却后后置置入入37恒恒温温箱箱培培养养24小小时时，无无菌菌生生长长，方方可可保保存存备备用。用。第9页，共10页，编辑于2022年，星期五思考作业题思考作业题1、配制培养基应注意哪些问题？、配制培养基应注意哪些问题？2、高压灭菌的关键是什么？、高压灭菌的关键是什么？3、干燥灭菌为何要比湿热高温蒸汽灭菌所需的温度高，、干燥灭菌为何要比湿热高温蒸汽灭菌所需的温度高，时间长？时间长？4、培养皿放置时为什么要倒置？、培养皿放置时为什么要倒置？第10页，共10页，编辑于2022年，星期五