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1、实验二细胞结构和大小测量第1页，共26页，编辑于2022年，星期五一、目的与要求一、目的与要求 1、掌握光学显微镜下的细胞形态与结构特点、了解油镜观察自制标本操作方法 2、了解制片技术的种类与用途 3、初步掌握临时制片的方法与染色方法 4、了解显微测微尺的使用方法 5、学会利用软件处理细胞，求各细胞的 大小和核质比第2页，共26页，编辑于2022年，星期五二、试剂、材料与器材二、试剂、材料与器材1、材料：洋葱，小白菜，新鲜的猪脑、番茄 2、药品：01亚甲基蓝染液，09生理盐水，1碘液3、器材：显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，滴管，擦镜纸，小刀，显微测微尺和电脑等第3页，共26页，编辑于2022年
2、，星期五三、操作与观察（一）制片方法与种类1、玻片分类：临时玻片标本与永久玻片标本2、制片方法的分类：装片法和切片法（二）临时玻片标本制备方法 想一想应该怎么制作？第4页，共26页，编辑于2022年，星期五（三）永久玻片标本制备方法第5页，共26页，编辑于2022年，星期五（四）几种临时装片的制作 1、洋葱鳞茎表皮细胞（染剂1碘液或用0.1%亚甲基蓝液)第6页，共26页，编辑于2022年，星期五思 考1、为什么说洋葱表皮细胞的形态结构特点与功能相适应？2、为什么用0.1%亚甲基蓝液染色？它使细胞结构中哪一部分更能观察清楚？3、如何使用高倍物镜？怎样调节显微镜才能更清楚的观察标本?4、怎样可避免
3、标本中产生的气泡？第7页，共26页，编辑于2022年，星期五2、植物的叶肉细胞和果肉细胞染剂：1碘液 第8页，共26页，编辑于2022年，星期五思 考1）怎样制作植物叶肉细胞和果肉细胞？我们主要可观察到什么细胞器？2）想一想果肉细胞与表皮细胞形态结构有什么不同？其最显著的特征是什么？第9页，共26页，编辑于2022年，星期五3、人的口腔上皮细胞 染剂：01亚甲基蓝染液 第10页，共26页，编辑于2022年，星期五思 考1）怎么制作人的口腔上皮细胞？关键在哪一步？2）比较洋葱表皮细胞和人的口腔上皮细胞结构上有何差别？第11页，共26页，编辑于2022年，星期五4、动物脊髓神经细胞形态结构观察染剂
4、：01亚甲基蓝染液第12页，共26页，编辑于2022年，星期五HE染色方法：（苏木精-伊红染液）1）含义苏木精：碱性染料，使细胞核内的染色质及细胞质内的核糖体染成紫蓝色。伊红：酸性染料，细胞质和胞外基质中的成分染成红色。第13页，共26页，编辑于2022年，星期五第14页，共26页，编辑于2022年，星期五（1）、0.51%的伊红酒精溶液：称取伊红Y 0.51 g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精100毫升溶解。（2）、苏木精染液配方：(配制3000ml，可按比例减少)苏木精 6 g无水乙醇 100ml硫酸铝钾 150 g蒸馏水 200
5、0ml碘酸钠 1.2 g冰醋酸 120ml甘油 900ml 第15页，共26页，编辑于2022年，星期五配制方法：将苏木精溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。（3）、1%盐酸酒精分色液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可 第16页，共26页，编辑于2022年，星期五2）染色的步骤 固定：入100%、95%、85%、70%酒精分别脱水2-5min，再入蒸馏水清洗3min。苏木精染液染色：苏木精染液染色：5-15min5-15min 脱色：蒸馏水漂洗脱色：蒸馏水漂洗2min 分色：分色：1%盐酸酒精分色液分色5min，镜检脱色:流水冲洗2
6、0min，镜检漂洗：蒸馏水漂洗2min染色：1%的伊红酒精液染色3min脱水：70%、85%、95%、100%酒精分别脱水2-5min。第17页，共26页，编辑于2022年，星期五（五）细胞大小的测量1、显微测微尺的用法（1）显微测微尺的组成（2）测量：长度的测量，厚度的测量和对圆形，椭圆形细胞的测量第18页，共26页，编辑于2022年，星期五1）显微测微尺的组成分目镜测微尺和镜台测微尺，两尺配合使用。（1）镜台测微尺 在一个载玻片中央封固的尺，长1毫米(1000m)，被分为100格，每格长度是10微米。第19页，共26页，编辑于2022年，星期五（2）目镜测微尺 是一个放在目镜像平面上的玻璃
7、圆片。圆片中央刻有一条直线，此线被分为若干格，每格代表的长度随不同物镜的放大倍数而异。因此，用前必须测定。第20页，共26页，编辑于2022年，星期五2）使用方法 将镜台测微尺放在显微镜的载物台上夹好，小心转动目镜测微尺和移动镜台测微尺使两尺平行，记录镜台测微尺若干格所对应的目镜测微尺的格数。第21页，共26页，编辑于2022年，星期五2、电脑软件图象处理系统 （各种不同倍数下的）（各种不同倍数下的）启动图像处理系统启动图像处理系统图像采集窗图像采集窗捕捉捕捉静态图像静态图像关闭图像采集窗关闭图像采集窗测量测量校准向导校准向导装入标准图像装入标准图像确定物镜倍数确定物镜倍数校准圆直径（校准圆直
8、径（m）校准校准标定名标定名保存保存最小化最小化第22页，共26页，编辑于2022年，星期五DigilabII-cLogin确定确定选择细胞选择细胞手动拍照手动拍照拍照拍照打开图像处理系统打开图像处理系统点线、点圆、点多边形点线、点圆、点多边形寻找目标细胞寻找目标细胞第23页，共26页，编辑于2022年，星期五实验报告实验报告要求要求:1、计算、计算23个细胞的大小个细胞的大小 2、计算球形细胞的核质比、计算球形细胞的核质比 3、绘人的口腔上皮细胞图并注明基本结构、绘人的口腔上皮细胞图并注明基本结构 值值 日日 安安 排排第24页，共26页，编辑于2022年，星期五第25页，共26页，编辑于2022年，星期五核质比NPVnVc-VnNP0.5NP0.5NP0.5第26页，共26页，编辑于2022年，星期五