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1、莨菪烷类抗胆碱药物的分析第一节第一节 结构与性质结构与性质一、典型药物一、典型药物第一节第一节 结构与性质结构与性质第一节第一节 结构与性质结构与性质二、主要理化性质二、主要理化性质1.水解性水解性 本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。以阿托品为例，水解生成莨菪醇和莨菪以阿托品为例，水解生成莨菪醇和莨菪 酸。酸。第一节第一节 结构与性质结构与性质2.碱性碱性 阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有 叔胺氮原子叔胺氮原子,具有较强的具有较强的碱性碱性,易与酸成盐。如易与酸成盐。如 阿托品的阿托品的pKb1为为4
2、.35。硫酸阿托品硫酸阿托品 氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱第一节第一节 结构与性质结构与性质3.旋光性旋光性 氢溴酸东莨菪碱结构中含有氢溴酸东莨菪碱结构中含有不对称不对称碳原子碳原子，呈左旋体，比旋度为，呈左旋体，比旋度为-24至至-27，而阿，而阿托品结构中虽然也含有不对称碳原子，但因托品结构中虽然也含有不对称碳原子，但因外外消旋化而为消旋体消旋化而为消旋体，无旋光性利用此性质可区，无旋光性利用此性质可区别阿托品与东莨菪碱。别阿托品与东莨菪碱。硫酸阿托品硫酸阿托品 氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱第二节第二节 鉴别试验鉴别试验 一、托烷生物碱类的一、托烷生物碱类的Vital鉴别反应鉴别反应二、与
3、硫酸二、与硫酸-重铬酸钾的反应重铬酸钾的反应三、与生物碱显色剂或沉淀剂的反应三、与生物碱显色剂或沉淀剂的反应四、光谱鉴别法四、光谱鉴别法五、色谱法五、色谱法六、硫酸盐与溴化物的反应六、硫酸盐与溴化物的反应第二节第二节 鉴别试验鉴别试验 一、托烷生物碱类的一、托烷生物碱类的Vital鉴别反应鉴别反应【原理原理】托烷生物碱托烷生物碱水解水解莨菪酸莨菪酸发烟硝发烟硝酸酸 三硝基衍生物三硝基衍生物KOH（C2H5OH）固体固体KOH有色的醌型产物有色的醌型产物深紫色深紫色第二节第二节 鉴别试验鉴别试验【反应过程】【反应过程】第二节第二节 鉴别试验鉴别试验【示例】【示例】ChP氢溴酸山莨菪碱的鉴别氢溴酸
4、山莨菪碱的鉴别 取供试品取供试品10mg，加发烟硝酸，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，滴，置水浴上蒸干，黄色的残渣，放冷，加乙醇黄色的残渣，放冷，加乙醇23滴，加固滴，加固体氢氧化粒，即显体氢氧化粒，即显深紫色深紫色。第二节第二节 鉴别试验鉴别试验 二、与硫酸二、与硫酸-重铬酸钾的反应重铬酸钾的反应【原理】【原理】本类药物水解后，生成的本类药物水解后，生成的莨菪酸莨菪酸，可与，可与硫酸和重铬硫酸和重铬 酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成生成苯甲醛苯甲醛，而逸出，而逸出类似苦杏仁的臭味类似苦杏仁的臭味。其反应式其反应式为：为：苦杏仁的臭味苦杏仁的臭味第二节第二
5、节 鉴别试验鉴别试验 三、与生物碱显色剂或沉淀剂的反应三、与生物碱显色剂或沉淀剂的反应【原理】【原理】生物碱在生物碱在酸性（碱性条件下试剂本身会出酸性（碱性条件下试剂本身会出现沉淀现象）现沉淀现象）水溶液中可与重金属盐类或大分子酸水溶液中可与重金属盐类或大分子酸类等沉淀试剂反应，生产难溶性的盐、复盐、或配类等沉淀试剂反应，生产难溶性的盐、复盐、或配合物沉淀。但不同的沉淀试剂与生物碱反应的灵敏合物沉淀。但不同的沉淀试剂与生物碱反应的灵敏度不同。度不同。【示例】【示例】阿托品阿托品 +氯化汞醇试液氯化汞醇试液 黄色沉淀黄色沉淀 东莨菪碱东莨菪碱+氯化汞醇试液氯化汞醇试液 白色复盐沉淀白色复盐沉淀第
6、二节第二节 鉴别试验鉴别试验 四、光谱鉴别法（四、光谱鉴别法（UV、IR）UV:一般通过比较药物的一般通过比较药物的max、min或或吸收吸收 光谱光谱的一致性来进行鉴别以及的一致性来进行鉴别以及吸光度吸光度或或吸收系数的比吸收系数的比值值来鉴别。来鉴别。IR:鉴别该类药物的原料药。鉴别该类药物的原料药。五、色谱法（五、色谱法（TLC、HPLC、GC）一般用于已知生物碱的鉴别一般用于已知生物碱的鉴别。TCL法最常用，法最常用，但应注意，若用硅胶吸附剂，需在流动相或固定但应注意，若用硅胶吸附剂，需在流动相或固定性中性中加碱加碱，使生物碱游离或中和硅胶表面的弱酸，使生物碱游离或中和硅胶表面的弱酸性
7、，以性，以防止拖尾防止拖尾。第二节第二节 鉴别试验鉴别试验【示例】【示例】Ch.P氢溴酸山莨菪碱注射液氢溴酸山莨菪碱注射液TLC鉴别鉴别 取本品取本品1ml，置水浴上蒸干。取残渣与消旋山莨菪，置水浴上蒸干。取残渣与消旋山莨菪 碱对照品，分别加甲醇制成碱对照品，分别加甲醇制成10mg/ml的溶液。照薄层的溶液。照薄层 色谱法试验，吸取上述两种溶液各色谱法试验，吸取上述两种溶液各10l，分别点于同，分别点于同 一氧化铝（中性，活度一氧化铝（中性，活度-级）薄层板上，以三氯级）薄层板上，以三氯 甲烷甲烷-无水乙醇（无水乙醇（95 5）为展开剂，展开，晾干，喷）为展开剂，展开，晾干，喷 以稀碘化铋钾试
8、液以稀碘化铋钾试液-碘化钾碘试液（碘化钾碘试液（1 1）。供试品溶）。供试品溶 液所显主斑点位置和颜色，应与对照品溶液的主斑点液所显主斑点位置和颜色，应与对照品溶液的主斑点 相同。相同。第二节第二节 鉴别试验鉴别试验 六、硫酸盐与溴化物的反应六、硫酸盐与溴化物的反应【原理】【原理】通过加沉淀试剂如硝酸银等生成溴化银沉淀或通过加沉淀试剂如硝酸银等生成溴化银沉淀或加入氯试剂生成溴溶于三氯甲烷而显色。加入氯试剂生成溴溶于三氯甲烷而显色。【示例】【示例】氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱+硝酸银溶液硝酸银溶液 AgBr (白色沉淀白色沉淀)氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱+氯试液氯试液 Br2 黄色黄色或或棕红
9、色棕红色第三节第三节 特殊杂志与检查特殊杂志与检查一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查 根据其制备工艺，本品在生产和贮藏过程中可能引入的根据其制备工艺，本品在生产和贮藏过程中可能引入的有关物质可通过酸度、其他生物碱和易氧化物检查进行控制有关物质可通过酸度、其他生物碱和易氧化物检查进行控制第三节第三节 特殊杂志与检查特殊杂志与检查一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查 1.酸度酸度 东莨菪碱碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应。东莨菪碱碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应。氢溴酸东莨菪碱为氢溴酸东莨菪碱为强酸弱碱强酸弱碱形成的盐，通过
10、其形成的盐，通过其5%5%水溶水溶 液的液的pHpH值为值为4.04.05.55.5，来控制本品中的酸性杂质。，来控制本品中的酸性杂质。2.易氧化物易氧化物 可能杂质为阿扑东莨菪碱、及其它含有可能杂质为阿扑东莨菪碱、及其它含有不饱不饱和双键和双键的有机物，他们的紫外吸收波长会红的有机物，他们的紫外吸收波长会红移、可使高锰酸钾溶液褪色移、可使高锰酸钾溶液褪色 第三节第三节 特殊杂志与检查特殊杂志与检查一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查3.其他生物碱其他生物碱l.因东莨菪碱在碱性条件下可以水解，生成东莨菪醇和莨菪酸，因东莨菪碱在碱性条件下可以水解，生成东莨菪醇和莨
11、菪酸，前者在水中溶解，后者生成钾盐在水中也能溶解，故可使瞬前者在水中溶解，后者生成钾盐在水中也能溶解，故可使瞬即发生的混浊消失。即发生的混浊消失。第三节第三节 特殊杂志与检查特殊杂志与检查一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查l其他类生物碱还常有其他类生物碱还常有TLC和和HPLC法检查。期杂质限量判断法检查。期杂质限量判断主要有标准品对照法、自身稀释对照法等方法。主要有标准品对照法、自身稀释对照法等方法。【示例】【示例】BP采用采用TLC自身稀释对照法检查氢溴酸东莨菪碱中其自身稀释对照法检查氢溴酸东莨菪碱中其他生物碱和分解产物：取本品他生物碱和分解产物：取本品0
12、.2g，加甲醇溶解并稀释至，加甲醇溶解并稀释至10ml，为供试品溶液；精密量取，为供试品溶液；精密量取1ml，加甲醇稀释至，加甲醇稀释至100ml，为对照液（，为对照液（a）；取对照液（）；取对照液（a）5ml，加甲醇稀释至，加甲醇稀释至10ml，为对照液（，为对照液（b）。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各）。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10ul，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶G薄层板上，以浓氨水薄层板上，以浓氨水-甲醇甲醇-丙酮丙酮-三氯甲烷（三氯甲烷（2：10:30:50）为展开剂，展开，晾干，于）为展开剂，展开，晾干，于105干燥干燥15分钟，冷却后，喷碘化铋钾试液显色。供试品分
13、钟，冷却后，喷碘化铋钾试液显色。供试品溶液除主斑点及起点处的黄色斑点外，其他杂质斑点的颜色溶液除主斑点及起点处的黄色斑点外，其他杂质斑点的颜色与对照液（与对照液（a）的主斑点比较不得更深（）的主斑点比较不得更深（1.0），比对照液），比对照液（b）主斑点颜色更深的杂质斑点数不得多于）主斑点颜色更深的杂质斑点数不得多于1个（个（0.5%）。）。第三节第三节 特殊杂志与检查特殊杂志与检查二、硫酸阿托品中有关物质的检查二、硫酸阿托品中有关物质的检查 硫酸阿托品为硫酸阿托品为消旋体消旋体，无旋光性无旋光性，而莨菪碱为，而莨菪碱为左旋体左旋体，可以利用旋光性对莨菪碱杂质进行检查，可以利用旋光性对莨菪碱杂
14、质进行检查。ChP用用HPLC法检查其中有关物质，通过峰面法检查其中有关物质，通过峰面积的比值及保留时间来控制杂质限度。积的比值及保留时间来控制杂质限度。第四节第四节 含量测定含量测定一、酸性染料比色法一、酸性染料比色法 （一）基本原理 （二）影响因素 （三）应用示例二、非水溶液滴定法二、非水溶液滴定法三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法第四节第四节 含量测定含量测定一、酸性染料比色法一、酸性染料比色法（一）基本原理l该法是利用碱性药物，在一定该法是利用碱性药物，在一定pH条件下，可与某条件下，可与某些酸性染料结合显色，随后用分光光度法测定药物些酸性染料结合显色，随后用分光光度法测定药物含量的
15、方法。含量的方法。l该法样品用量少，灵敏度高该法样品用量少，灵敏度高 l适用于少量供试品、尤其是小剂量药物制剂的定量适用于少量供试品、尤其是小剂量药物制剂的定量分析分析 l具有一定的专属性和准确度具有一定的专属性和准确度 第四节第四节 含量测定含量测定一、酸性染料比色法一、酸性染料比色法HIn、In-不溶于有机相不溶于有机相显色显色第四节第四节 含量测定含量测定一、酸性染料比色法一、酸性染料比色法（二）影响因素1.水相最佳水相最佳pH的选择的选择 l如果水相如果水相pH值值过低过低，酸性染料几乎仍以分子状态，酸性染料几乎仍以分子状态存在，而不能离解成存在，而不能离解成In-；l如果水相如果水相
16、pH值值过高过高，则生物碱几乎全部以游离碱，则生物碱几乎全部以游离碱的形式（即的形式（即B）存在，（）存在，（BH+In）浓度减小，有机）浓度减小，有机溶剂萃取的不是离子对，而是生物碱本身。溶剂萃取的不是离子对，而是生物碱本身。l故应选择一个水相的最适故应选择一个水相的最适pH值。一般根据药物和值。一般根据药物和酸性染料的酸性染料的pK值以及两相中的分配系数而定。值以及两相中的分配系数而定。第四节第四节 含量测定含量测定一、酸性染料比色法一、酸性染料比色法（二）影响因素 2.酸性染料及其浓度酸性染料及其浓度l常用：溴甲酚绿常用：溴甲酚绿(BCG)、溴麝香草酚蓝（、溴麝香草酚蓝（BTB）、）、溴
17、甲酚紫溴甲酚紫（BCP）、溴酚兰）、溴酚兰(BPB)、甲基橙等。、甲基橙等。l中国药典中托烷类药物采用溴甲酚绿作酸性染料。中国药典中托烷类药物采用溴甲酚绿作酸性染料。l酸性染料的浓度对测定结果影响不大酸性染料的浓度对测定结果影响不大，只要有足，只要有足够的量即可。够的量即可。第四节第四节 含量测定含量测定一、酸性染料比色法一、酸性染料比色法（二）影响因素3.有机溶剂的选择有机溶剂的选择l对离子对的萃取效率高、能与离子对形成对离子对的萃取效率高、能与离子对形成氢键、不与或极少与水混溶的试剂。氢键、不与或极少与水混溶的试剂。l常用的有机溶剂有：常用的有机溶剂有：CHCl3、CH2Cl2、苯、甲苯等
18、苯、甲苯等 第四节第四节 含量测定含量测定一、酸性染料比色法一、酸性染料比色法（二）影响因素 4.水分的影响水分的影响 水相有中有过量色酸性染料，酸性染料可引入，有水相有中有过量色酸性染料，酸性染料可引入，有色，影响比色测定；且水分会使有机层浑浊，也影色，影响比色测定；且水分会使有机层浑浊，也影响比色测定。所以应严防水分的混入。响比色测定。所以应严防水分的混入。有机层可加有机层可加入无水硫酸钠等脱水或经干燥滤纸、脱脂棉滤过。入无水硫酸钠等脱水或经干燥滤纸、脱脂棉滤过。5.酸性染料中有色杂质酸性染料中有色杂质 在加入供试品前，将缓冲液与酸性染料的混合液先用在加入供试品前，将缓冲液与酸性染料的混合
19、液先用所选所选 的有机溶剂萃取，弃去有色杂质。的有机溶剂萃取，弃去有色杂质。第四节第四节 含量测定含量测定一、酸性染料比色法一、酸性染料比色法（三）应用示例利用本法可对紫外吸收弱、标示量低的有机利用本法可对紫外吸收弱、标示量低的有机碱性（生物碱）药物制剂的含量或含量均匀碱性（生物碱）药物制剂的含量或含量均匀度进行测量。度进行测量。如：硫酸阿托品片、氢溴酸如：硫酸阿托品片、氢溴酸东莨菪碱片、中药材和中成药中的生物碱成东莨菪碱片、中药材和中成药中的生物碱成分等。分等。第四节第四节 含量测定含量测定一、酸性染料比色法一、酸性染料比色法【示例】【示例】硫酸阿托品片的含量测定精密量取对照品硫酸阿托品片的
20、含量测定精密量取对照品溶液和供试品溶液各溶液和供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入，分别置预先精密加入三氯甲烷三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液液4ml，振摇提取后，静置使分层；分取三氯甲，振摇提取后，静置使分层；分取三氯甲烷液，照紫外烷液，照紫外-可见分光光度法，在可见分光光度法，在420nm波长波长处分别测定吸光度，计算，即得。处分别测定吸光度，计算，即得。第四节第四节 含量测定含量测定二、非水溶液滴定法二、非水溶液滴定法 硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生成硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生成SO42-但在非水介质中，只显示一元酸
21、解离为但在非水介质中，只显示一元酸解离为HSO4-，即只供给个，即只供给个 H+，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。【示例】【示例】硫酸阿托品测定硫酸阿托品测定 直接滴定，反应摩尔比为直接滴定，反应摩尔比为1 1 溶剂：冰醋酸、醋酐溶剂：冰醋酸、醋酐 指示剂：结晶紫指示剂：结晶紫 反应式：反应式：(BH+)2SO42-+HClO4 (BH+)ClO4-+(BH+)HSO4 第四节第四节 含量测定含量测定三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法 离子对色谱Ion-Pair H
22、PLC【应用范围】【应用范围】在反相液相色谱条件下呈离子状态的药在反相液相色谱条件下呈离子状态的药物，如有机碱类、有机酸类等物，如有机碱类、有机酸类等 l 色谱保留常常较弱，从而影响到它们的含量或有色谱保留常常较弱，从而影响到它们的含量或有关物质关物质HPLC测定的专属性和准确度。测定的专属性和准确度。l 调整流动相的调整流动相的pH，抑制它们的解离，以改变色谱，抑制它们的解离，以改变色谱保留行为，但并不都能获得满意的结果。保留行为，但并不都能获得满意的结果。l 采用离子对高效液相色谱法，可以改善它们的色采用离子对高效液相色谱法，可以改善它们的色谱保留行为，并实现准确测定谱保留行为，并实现准确
23、测定。第四节第四节 含量测定含量测定三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法【原理】【原理】将待测组份的反离子加入流动相中，与呈离将待测组份的反离子加入流动相中，与呈离解状态的药物作用，生成可逆的离子对化合物解状态的药物作用，生成可逆的离子对化合物【范围】【范围】测定在反相色谱条件下呈离子状态的药物，测定在反相色谱条件下呈离子状态的药物，如有机碱、有机酸类药物如有机碱、有机酸类药物【离子对试剂的选择】【离子对试剂的选择】分析有机碱，主要采用烷基磺酸盐阴离子对试剂分析有机碱，主要采用烷基磺酸盐阴离子对试剂（如戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠）或其他盐类（如戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠）或其他盐类 分析有机酸，主要采
24、用季铵盐阳离子对试剂（四丁分析有机酸，主要采用季铵盐阳离子对试剂（四丁基氢氧化铵、四丁基溴化铵等）基氢氧化铵、四丁基溴化铵等）第四节第四节 含量测定含量测定三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法【影响离子对形成的条件】【影响离子对形成的条件】l 离子对的种类、性质和浓度离子对的种类、性质和浓度 例：阴离子对试剂的非极性部分越大，形成的例：阴离子对试剂的非极性部分越大，形成的离子对分配离子对分配 系数越大，保留时间越长（十二烷基系数越大，保留时间越长（十二烷基磺酸钠庚烷磺酸钠磺酸钠庚烷磺酸钠 戊烷磺酸钠）戊烷磺酸钠）l流动相的组成、流动相的组成、pH及离子强度及离子强度 流动相一般呈酸性，以利于有
25、机碱药物的离解；流动相一般呈酸性，以利于有机碱药物的离解；水相为具有适宜水相为具有适宜pH的缓冲溶液的缓冲溶液 离子对试剂的浓度大约为：离子对试剂的浓度大约为：3 10 mmol/L 第四节第四节 含量测定含量测定三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法 离子对色谱Ion-Pair HPLC【应用范围】【应用范围】在反相液相色谱条件下呈离子状态的药在反相液相色谱条件下呈离子状态的药物，如有机碱类、有机酸类等物，如有机碱类、有机酸类等 l 色谱保留常常较弱，从而影响到它们的含量或有色谱保留常常较弱，从而影响到它们的含量或有关物质关物质HPLC测定的专属性和准确度。测定的专属性和准确度。l 调整流动相的调整流动相的pH，抑制它们的解离，以改变色谱，抑制它们的解离，以改变色谱保留行为，但并不都能获得满意的结果。保留行为，但并不都能获得满意的结果。l 采用离子对高效液相色谱法，可以改善它们的色采用离子对高效液相色谱法，可以改善它们的色谱保留行为，并实现准确测定谱保留行为，并实现准确测定 此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢