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1、胚胎发育学课件一、切片的制作一、切片的制作1、切片的种类n 取材取材 切片切片、涂片涂片、铺片铺片、压片压片、磨片磨片等；n 切片切片 石蜡切片石蜡切片、冰冻切片、火棉胶切片；n 连续切片、整装片连续切片、整装片 2、切片的制作、切片的制作n取材取材n固定固定n（浸蜡、包埋）（浸蜡、包埋）n切片切片n染色染色n透明透明n封固等 next固定液n单一固定液n复合固定液长处突出，短处抵消 染色液染色方法n常用染色方法常用染色方法Mallorys三色染色铁矾苏木精染色尼氏体染色镀银法 上皮界限、网状纤维、神经细胞全貌（上皮界限、网状纤维、神经细胞全貌（Golgi简易法）、神经细胞（石简易法）、神经细
2、胞（石蜡切片法）蜡切片法）镀金法 运动终板运动终板n特殊组分染色法特殊组分染色法Feulgen反应示DNAPyronine法示RNAPAS法糖元碱性磷酸酶Gomoni法（钴）透明剂n二甲苯（XYL）n甲苯n苯n氯仿n香柏油二、切片观察观察重点一n早期卵裂斑马鱼 蛙胚 未受精卵 合子期胚胎分裂期胚胎 囊胚 （原肠胚 器官形成期）；n原肠化蛙胚 背唇、腹唇、瓶状细胞（早）；原肠腔vs囊胚腔囊胚腔（早中晚）；卵黄栓（晚）；n神经胚蛙胚 神经板、脊索、原肠腔、中胚层；神经管、神经嵴、（体腔）、外胚层；n器官形成鸡胚附：1、3mm蛙胚连续切片；2、鸡胚原条期切片。观察重点二：鸡胚发育过程整装片及切片1、
3、未孵化鸡胚（处于囊胚期）切片2、原条期（孵育16小时）切片 明区，暗区，原条，原结，原窝明区，暗区，原条，原结，原窝3、19小时鸡胚整装片4、孵育1天的鸡胚整装片（四个体节）明区，暗区，前羊膜，神经褶，四对体节，明区，暗区，前羊膜，神经褶，四对体节，脊索，退缩的原条脊索，退缩的原条5、33小时鸡胚整装片 前脑，视泡，中脑，菱脑，心脏，体节，前脑，视泡，中脑，菱脑，心脏，体节，神经管神经管 6、孵育3天鸡胚整装片 端脑，间脑，中脑，后脑，听泡，尿囊，心脏，端脑，间脑，中脑，后脑，听泡，尿囊，心脏，尾，体节尾，体节观察重点三：鸡胚活体标本的形态结构特征 n2 Dpf鸡胚 气室、卵壳膜气室、卵壳膜、
4、胚盘胚盘等等 n78 Dpf鸡胚1、观察、观察四种胎膜四种胎膜(卵黄囊、羊膜、尿囊、绒毛卵黄囊、羊膜、尿囊、绒毛膜膜)，胚胎的外形，胚胎的外形，卵黄囊卵黄囊是否完全包住卵是否完全包住卵黄？黄？尿囊尿囊的大小？的大小？2、羊膜大小。3、眼睛、喙、四肢、指和趾的分化。next三、整装片制作实验材料、仪器及药品实验材料、仪器及药品n受精的鸡蛋(白来航2Dpf）n恒温箱、检卵灯、温度计、湿度计；n染色缸、药匙、镊子、吸管、废液缸、解剖剪、玻璃皿、0.9生理盐水、卡氏固定剂、95酒精、酒精洋红、100酒精、甘油、载玻片、盖玻片等2Dpf鸡胚整装片鸡胚整装片制作流程制作流程 上上 下下 n临时制片临时制片
5、取材取材0.9%的生理盐水冲洗卡氏固定液，卡氏固定液，51095酒精，2酒精洋红酒精洋红，203095酒精，2分钟100酒精，2(*2)100甘油甘油封片n永久制片永久制片1：1的100（酒精：二甲苯）10二甲苯二甲苯10树胶树胶封片 附：1、蛙卵的获得2、鸡的孵化整装片制作结束斑马鱼胚胎早期发育图谱爪蟾的人工受精n人工受精催青 1、激素催青绒毛膜促性腺激素（HCG）；12小时 2、垂体提取液催青n步骤1、区分爪蟾的雌雄雌：大；雄：婚爪垫；2、催青、抱对；3、精子悬浮液制备处死4、取卵与人工受精挤压5、体外受精蛙胚早期卵裂蛙原肠胚蛙神经胚鸡卵的人工孵育 n选蛋 n孵化前消毒0.01%高锰酸钾、
6、水温40，擦拭 n孵化 21天1、温度37.8（36.538.5）2、湿度4070%3、通风4、翻蛋 3040次 vs 35次/天 5、晾蛋6、照蛋 56天 无精蛋、裂纹蛋；11天 死胚蛋；21天死胚蛋、破壳蛋未孵化鸡胚Back3Dpf鸡胚器官原基8Dpf鸡胚胚外结构Back鸡蛋的结构1蛋壳；2 2气室气室；3 3内壳膜内壳膜；4 4外壳膜外壳膜；5 5系带层蛋白系带层蛋白；6 6胚盘胚盘；7卵黄；8 8卵黄膜卵黄膜；9 9浓蛋白浓蛋白；1010稀蛋白稀蛋白；1111脐带脐带；12潘氏核；13卵黄心颈部；14卵周隙；15卵黄心；1616白卵黄层；白卵黄层；1717黄卵黄层黄卵黄层鸡的胚外结构鸡的胚外结构(下次选择另一幅图吧，下次选择另一幅图吧，4张的那张的那组组)谢谢！-此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢