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1、植物组织培养综合实验植物组织培养综合实验满天星组培快繁一满天星组培快繁一-初代培养初代培养实验目的意义实验目的意义 通过满天星等的茎尖培养获通过满天星等的茎尖培养获得完整的幼苗，学会茎尖组培快得完整的幼苗，学会茎尖组培快繁的基本原理和操作技术。繁的基本原理和操作技术。实验原理实验原理 植物组织培养的原理植物组织培养的原理:植物细胞的全能性植物细胞的全能性.茎尖离体快繁技术 植物的茎尖和腋芽在适宜的培养基上，在植物的茎尖和腋芽在适宜的培养基上，在合适的激素条件下，其生长点分化形成大量芽合适的激素条件下，其生长点分化形成大量芽并能形成良好的苗。苗经诱导可长出根而形成并能形成良好的苗。苗经诱导可长出
2、根而形成完整的植株，这就是茎尖组培快繁。此技术已完整的植株，这就是茎尖组培快繁。此技术已广泛用来繁育那些不能形成种子进行繁殖或难广泛用来繁育那些不能形成种子进行繁殖或难以繁育的花卉杂交品种或其它具有重要经济价以繁育的花卉杂交品种或其它具有重要经济价值的植物，由于病毒一般不侵入生长点细胞，值的植物，由于病毒一般不侵入生长点细胞，因此，这种方法也广泛用来脱病毒获取脱毒苗。因此，这种方法也广泛用来脱病毒获取脱毒苗。理论基础理论基础 利用离体培养技术，将来自优良植株的利用离体培养技术，将来自优良植株的茎茎尖、腋芽、叶片、鳞片尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进等器官、组织和细胞进行离体培养。在短期
3、内获得大量行离体培养。在短期内获得大量遗传性一致的遗传性一致的个体的方法（技术）称离体无性繁殖个体的方法（技术）称离体无性繁殖，由于这，由于这种方式得到的植株群体来自一个单株（或一个种方式得到的植株群体来自一个单株（或一个单芽），它们的遗传组成相同，这些株群可称单芽），它们的遗传组成相同，这些株群可称单株无性系单株无性系或单或单芽无性系芽无性系。优越性：优越性：繁殖速率快；育苗工厂化繁殖速率快；育苗工厂化离体快繁的应用离体快繁的应用优良品种优良品种脱毒种苗和无病毒苗；脱毒种苗和无病毒苗；特殊育种材料；特殊育种材料；制种材料；制种材料；突变体；突变体；基因工程植株；基因工程植株；离体保存种质；离
4、体保存种质；濒危植物。濒危植物。组织培养室组织培养室高质量的高科技农业高质量的高科技农业 离体快繁的一般技术离体快繁的一般技术 材料的初代培养材料的初代培养(无菌母株制备无菌母株制备)试管苗的增殖与继代培养（试管苗的增殖与继代培养（不定芽增殖不定芽增殖）试管苗的生根与移栽（试管苗的生根与移栽（完整植株形成完整植株形成）再生植株鉴定再生植株鉴定外植体的选择与消毒外植体的选择与消毒本周实验内容本周实验内容满天星离体快繁满天星离体快繁初代培养初代培养1 培养基的配制培养基的配制2 外植体的采集及灭菌处理外植体的采集及灭菌处理3 接种与无菌操作接种与无菌操作4 培养物观察培养物观察实验过程实验过程整个
5、实验分为三个相互衔接的阶段：整个实验分为三个相互衔接的阶段：1、初代培养、初代培养建立茎尖无菌培养系统建立茎尖无菌培养系统2、继代培养、继代培养茎尖离体快繁茎尖离体快繁3、根的诱导及移栽、根的诱导及移栽形成完整植株形成完整植株初代培养实验材料：实验材料：满天星或非洲菊带茎尖的苗满天星或非洲菊带茎尖的苗75%乙醇溶液和乙醇溶液和0.1%升汞溶液升汞溶液需灭菌物品需灭菌物品：诱导培养基诱导培养基:MS（）（）培养皿、吸水纸、解剖刀、长柄镊子等培养皿、吸水纸、解剖刀、长柄镊子等实验操作实验操作1、培养基的配制及实验器材准备、培养基的配制及实验器材准备培养基：培养基：MS6-6-BA 1.0mg/L+
6、3%蔗糖蔗糖（）实验器材：实验器材：吸水纸，操作盘（饭盒或培养皿）；镊子；吸水纸，操作盘（饭盒或培养皿）；镊子；剪刀；酒精棉球等。剪刀；酒精棉球等。超净工作台准备：超净工作台准备：从从田田间间获获得得的的满满天天星星枝枝条条或或幼幼苗苗，切切取取茎茎顶顶或或带带腋腋芽芽的的茎茎段段，用用水水反反复复冲冲洗洗，切切取取茎茎尖尖（2 2cmcm）cmcm大大小小），接接种种于于诱诱导导培培养养基基上上，置置于于2525的的恒恒温温下下照照光光培养。培养。2 2、植物无菌培养物的获得、植物无菌培养物的获得选材：选材：材料类型、大小，年龄与发育状况等材料类型、大小，年龄与发育状况等修剪：修剪：去除较老
7、和脏的叶片，尽量减小体积，减少污染去除较老和脏的叶片，尽量减小体积，减少污染清洗：清洗：自来水冲洗，自来水冲洗，2洗涤剂浸泡洗涤剂浸泡20分钟，清水冲洗分钟，清水冲洗灭菌：灭菌：75乙醇乙醇30-60s；0.1%升汞升汞8-10分钟分钟;无菌无菌水冲洗水冲洗3-5次次。无菌修剪：无菌修剪：用无菌镊子和剪刀进一步去除多余的叶片，用无菌镊子和剪刀进一步去除多余的叶片，依据需要切割成相应大小的茎段（带依据需要切割成相应大小的茎段（带2-3个叶片）。个叶片）。接种：接种：无菌操作将处理好的材料接种于培养基上，无菌操作将处理好的材料接种于培养基上，2-3个个材料材料/瓶瓶培养：培养：25，光照培养，光照
8、培养观察记录：观察记录：污染，生长状况，分枝污染，生长状况，分枝实实验验室室无无菌菌间间培培养养室室实验结果与分析实验结果与分析培养过程请进行下列观察和记录培养过程请进行下列观察和记录:1 1、污染情况：、污染情况：内生菌污染内生菌污染？外源菌污染外源菌污染？2 2、茎尖诱导情况，分枝状况，诱导率。、茎尖诱导情况，分枝状况，诱导率。3 3、幼苗生长状况：、幼苗生长状况：弱小弱小？健壮健壮？玻璃化玻璃化？褐化褐化？学习与思考学习与思考1 1、切切取取的的用用于于接接种种的的茎茎尖尖大大小小对对诱诱导导率率有有影影响响吗吗？为为什什么么？如如何何根根据据实实际际情情况况进进行外植体的切取？行外植体的切取？2 2、茎尖培养在实际生产中有哪些用途？、茎尖培养在实际生产中有哪些用途？3 3、观察实际结果并分析原因。、观察实际结果并分析原因。