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1、实验室注意事项实验室注意事项o安静有序，不要大声喧哗安静有序，不要大声喧哗o禁止在实验室喝水吃东西禁止在实验室喝水吃东西o时刻警惕生物污染时刻警惕生物污染o生物污染垃圾放入黄色塑料袋生物污染垃圾放入黄色塑料袋o实验完毕将器材放入指定收集位置实验完毕将器材放入指定收集位置o实验结束将自己的实验台打扫干净实验结束将自己的实验台打扫干净o每组组长安排每组组长安排2人值日人值日o不得迟到早退，实习过程必须穿白大衣不得迟到早退，实习过程必须穿白大衣血液一般检查血液一般检查General Examination Of Blood 北医三院检验科北医三院检验科Department of laboratory
2、 medicine,Peking University Third Hospital Content1.血液标本采集、涂片、染色血液标本采集、涂片、染色2.全血细胞计数（全血细胞计数（CBC）、三分类）、三分类3.显微镜下白细胞分类显微镜下白细胞分类 1.血液标本采集血液标本采集Blood specimen collection熟悉毛细血管与静脉穿刺采血方法熟悉毛细血管与静脉穿刺采血方法掌握真空采血管的种类与正确使用掌握真空采血管的种类与正确使用正确分析检验结果与血液标本采集的关系正确分析检验结果与血液标本采集的关系血标本采集器材血标本采集器材毛细血管采血毛细血管采血一次性采血针一次性采血针一
3、次性微量吸管一次性微量吸管消毒棉签消毒棉签安尔碘皮肤消毒剂安尔碘皮肤消毒剂静脉穿刺采血静脉穿刺采血一次性采血针一次性采血针持针器持针器止血带止血带枕垫枕垫消毒棉签消毒棉签安尔碘皮肤消毒剂安尔碘皮肤消毒剂真空采血管真空采血管真空采血管真空采血管 Vacuum tubeCap colorAdditiveSpecimen typeAnticoagulant functionUtilizationRedNoSerumChemistrySerologyYellowSeparation gelSerumAccelerate coagulationChemistrySerologyLight blurSod
4、ium citratePlasmaCa eliminationCoagulationGreenLithium heparinPlasmaEnhance AT activityChemistryGreySodium fluoridePlasmaGlycolysis inhibitonGlucoseLavenderEDTAWhole bloodIons elimination Ca,MgHematology毛细血管采血毛细血管采血Specimen collection by capillary puncture实质是微动脉、微静脉和毛细血管的混合血，含有细胞间实质是微动脉、微静脉和毛细血管的混合血
5、，含有细胞间质和细胞内液。质和细胞内液。用血量少，适用于婴儿、大面积烧伤、需频繁采血进行检用血量少，适用于婴儿、大面积烧伤、需频繁采血进行检查的病例。查的病例。多选择手指或耳垂部位采血。多选择手指或耳垂部位采血。穿刺必须够深，使血液自行流出或仅轻施压力即可流出。穿刺必须够深，使血液自行流出或仅轻施压力即可流出。微量吸管的容量必须准确，内腔一定要干燥，否则会影响微量吸管的容量必须准确，内腔一定要干燥，否则会影响吸血量和导致溶血。吸血量和导致溶血。静脉穿刺采血静脉穿刺采血Specimen collection by venipuncture静脉采血法适用于用血量较多的检查项目。静脉采血法适用于用血
6、量较多的检查项目。静脉血标本代表性大，各项成分相对稳定，可反映病人整体状态，静脉血标本代表性大，各项成分相对稳定，可反映病人整体状态，可广泛用于各项检查。可广泛用于各项检查。如果发生晕针，立即拔针，平卧休息。如果发生晕针，立即拔针，平卧休息。体表浅静脉几乎都可以作为采血部位，通常采用肘部静脉。体表浅静脉几乎都可以作为采血部位，通常采用肘部静脉。注意受检者采血的体位、情绪、运动状态、使用某些药物等因素。注意受检者采血的体位、情绪、运动状态、使用某些药物等因素。真空采血过程无血液外溢和污染，运送方便。封闭状态，无需容真空采血过程无血液外溢和污染，运送方便。封闭状态，无需容器间转移，减少溶血，避免环
7、境暴露的影响。器间转移，减少溶血，避免环境暴露的影响。2.全血细胞计数（全血细胞计数（CBC）了解血液分析仪的各项参数、参考值、操作方法与了解血液分析仪的各项参数、参考值、操作方法与结果分析结果分析。熟悉血细胞计数板的使用方法。熟悉血细胞计数板的使用方法。掌握血涂片的制备和瑞特掌握血涂片的制备和瑞特-吉姆萨染色。吉姆萨染色。掌握显微镜法外周血分类计数的方法、各种掌握显微镜法外周血分类计数的方法、各种WBC的正常形态。的正常形态。血液分析仪血液分析仪Hematology Analyer两大功能两大功能细胞计数功能细胞计数功能细胞分类功能细胞分类功能原理原理电阻抗法电阻抗法光散射法光散射法Sysm
8、ex KX-21：三分群：三分群Beckman Coulter STKS：五分类五分类电阻抗原理电阻抗原理Principle of electrical impedanceCoulter principle 根据血细胞相对非导电的性质，悬浮在电根据血细胞相对非导电的性质，悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒，在通过计数小解质溶液中的血细胞颗粒，在通过计数小孔时可引起电阻的变化为基础，对血细胞孔时可引起电阻的变化为基础，对血细胞进行计数和体积测定。进行计数和体积测定。电阻抗原理计数电阻抗原理计数Principle of electrical impedance将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置入不导电将
9、等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置入不导电的容器中，将小孔管（的容器中，将小孔管（transducer）插进细胞）插进细胞悬液中。悬液中。小孔管内充满电解质溶液，并有一个内电极，小孔管内充满电解质溶液，并有一个内电极，小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。接通电源后，位于小孔两侧的电极产生稳定的接通电源后，位于小孔两侧的电极产生稳定的电流。电流。当细胞通过小孔时，瞬间引起了电压变化而出当细胞通过小孔时，瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号。现一个脉冲信号。脉冲大小反映细胞体积大小，脉冲数量代表细脉冲大小反映细胞体积大小，脉冲数量代表细胞数量。胞数量。Sysmex
10、KX-21电阻抗原理分类电阻抗原理分类（三分群）不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显差异，根据不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显差异，根据这些脉冲大小，可对白细胞进行分群。这些脉冲大小，可对白细胞进行分群。小细胞区：主要是淋巴细胞小细胞区：主要是淋巴细胞单个核细胞区单个核细胞区(也也 称作中间细胞称作中间细胞):主要包括单核细胞、嗜酸性粒主要包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞细胞、嗜碱性粒细胞大细胞区：主要是中性粒细胞大细胞区：主要是中性粒细胞容量、电导、光散射检测原理（容量、电导、光散射检测原理（VCS）Volume conductivity light scan
11、tterVolume：应用电阻抗原理测量细胞体积：应用电阻抗原理测量细胞体积Conductivity：根据细胞壁能产生高频电流：根据细胞壁能产生高频电流的性能，采用高频电磁探针，测量细胞内部的性能，采用高频电磁探针，测量细胞内部结构，即以细胞核和细胞质的比例、细胞内结构，即以细胞核和细胞质的比例、细胞内颗粒的大小和密度，来辨别体积相同，但性颗粒的大小和密度，来辨别体积相同，但性质不同的两个细胞群体。质不同的两个细胞群体。Light scatter:来自激光的单色光直接扫描进来自激光的单色光直接扫描进入计数敏感区的每一个细胞，根据细胞产生入计数敏感区的每一个细胞，根据细胞产生的不同角度的散射光的
12、不同角度的散射光(1070)，可提供细胞，可提供细胞形态、核结构等光散射信息，并能鉴别细胞形态、核结构等光散射信息，并能鉴别细胞颗粒的构型和质量（粗颗粒的光散射比细颗颗粒的构型和质量（粗颗粒的光散射比细颗粒更强）；光散射可区别粒细胞的类型。粒更强）；光散射可区别粒细胞的类型。Beckman Coulter STKS血涂片制备血涂片制备Preparing blood smearWright-Giemsa solution ingredients酸性染料伊红（钠盐）和碱性染料美蓝（氯盐）伊红钠盐有色部分为阴离子，可与带正电荷的物质结合。氯化美蓝有色部分为阳离子，可与带负电荷的物质结合。二者溶解在甲
13、醇中形成可溶性的伊红化美蓝溶液，既可以固定细胞又利于细胞蛋白质选择性地吸附其中有色离子而着色。氯化美蓝放置久后可氧化为天青，对细胞核染色加强，添上更多色彩，染色效果更好。Wright-Giemsa staining principle血红蛋白、嗜酸性颗粒均为碱性物质，故与酸性染料伊红结合而染成红色。细胞核的核蛋白与原、幼细胞的胞质为酸性物质，故与碱性染料美蓝和天青相结合，染成深蓝色或深紫红色。中性颗粒与美蓝和伊红同时结合而染为淡紫红色。瑞氏染粉是由伊红化美蓝组成，对胞质及中性颗粒的着色性极佳，面姬姆萨染粉由天青、伊红组成，对细胞核着色较好，结构显示更清晰。蛋白质所带电荷随溶液的 pH而定。故为
14、使血片每次染色效果好且趋于一致，需配制的缓冲液。Wright-Giemsa staining procedure滴加瑞-姬复合染液数滴于血涂片上（以盖住血膜为度），静置约半min，目的在于用染液的甲醇成分固定血细胞。加相当于染液2倍量的缓冲液充分混匀。染色约l0min，用水冲去染液，干燥后镜检。白细胞分类计数White blood cell differential count,DC先用低倍镜选好薄厚适宜、先用低倍镜选好薄厚适宜、染色良好、细胞分布均匀染色良好、细胞分布均匀处，再用油浸镜观察。处，再用油浸镜观察。通常计数通常计数100个白细胞。个白细胞。按图所示方向移动血涂片，按图所示方向移动
15、血涂片，将所遇到的各类白细胞分将所遇到的各类白细胞分别记录，直到计数别记录，直到计数100个白个白细胞为止。细胞为止。计算每类白细胞的数目，计算每类白细胞的数目，即其百分数值。即其百分数值。Neutrophils(band)15%Neutrophils(segmented)5070%Eosinophils 0.55%Basophils 0-1%Lymphocytes 20-40%Monocytes 38%血细胞形态学识别规律原则：核浆兼顾，以核为主次序：胞体、胞浆、胞核、核仁红细胞形态红细胞大小不均红细胞大小不均(anisocytosis)红细胞结构异常红细胞结构异常Howell-Jolly
16、body,Cabot ring球形红细胞球形红细胞 椭圆形红细胞椭圆形红细胞 口形红细胞口形红细胞 棘形红细胞棘形红细胞靶形红细胞靶形红细胞 泪滴形红细胞泪滴形红细胞 镰形红细胞镰形红细胞锯齿形红细胞锯齿形红细胞 棘形红细胞棘形红细胞红细胞缗钱状形成红细胞缗钱状形成Neutrophilsp胞体胞体1015m p 胞浆量多，淡红色，含许胞浆量多，淡红色，含许多淡紫红色小颗粒多淡紫红色小颗粒p胞核胞核l band 凹陷的程度超过核凹陷的程度超过核直径的一半，核最窄径大直径的一半，核最窄径大于最宽径的于最宽径的1/3，核弯曲成，核弯曲成带形、带形、S形、形、U形、形、W形等。形等。核染色质粗糙，浓集
17、成小核染色质粗糙，浓集成小块状，染色不均匀。块状，染色不均匀。lSegmented 通常分通常分25叶，叶，彼此间有较细的核丝或较彼此间有较细的核丝或较粗的核桥，核最窄径小于粗的核桥，核最窄径小于最宽径的最宽径的1/3。核染色质。核染色质 粗糙。粗糙。LymphocyteoLarge lymphocytel胞体胞体1218m，圆形。，圆形。胞浆天蓝色，透明，可胞浆天蓝色，透明，可有少数较大的嗜苯胺蓝有少数较大的嗜苯胺蓝颗粒。胞核类圆形，核颗粒。胞核类圆形，核染色质固缩成一团，染染色质固缩成一团，染成紫红色，着色比小淋成紫红色，着色比小淋巴细胞为淡。有时刻隐巴细胞为淡。有时刻隐约可见核仁痕迹。约
18、可见核仁痕迹。oSmall lymphocyte l胞体胞体510m，圆形或，圆形或椭圆形。胞浆甚少，几椭圆形。胞浆甚少，几近无浆，或在核凹陷侧近无浆，或在核凹陷侧可见少量蓝色胞浆，颗可见少量蓝色胞浆，颗粒可有可无，常因胞浆粒可有可无，常因胞浆过少而看不到颗粒。胞过少而看不到颗粒。胞核占细胞的极大部分，核占细胞的极大部分，圆形或豆形，核染色质圆形或豆形，核染色质凝缩，染成紫红色，无凝缩，染成紫红色，无核仁。核仁。Monocyteso胞体圆形或不规则形，胞体圆形或不规则形，1220mo胞浆较多，淡灰蓝色，可胞浆较多，淡灰蓝色，可见灰尘洋细微红色或红紫见灰尘洋细微红色或红紫色颗粒（嗜苯胺蓝颗粒）色
19、颗粒（嗜苯胺蓝颗粒）o胞核呈肾形、马蹄形或分胞核呈肾形、马蹄形或分叶状等，有的扭曲折叠，叶状等，有的扭曲折叠，偶见圆形核的。染色质呈偶见圆形核的。染色质呈疏松网状，染紫红色。疏松网状，染紫红色。o无核仁，偶见核仁遗迹。无核仁，偶见核仁遗迹。Eosinophilsp胞体胞体1018m p 充满等大圆形桔红色颗粒充满等大圆形桔红色颗粒p胞核胞核l band 呈弯曲杆状、马蹄呈弯曲杆状、马蹄形，核最窄径大于最宽径形，核最窄径大于最宽径的的1/3，核染色质粗糙。，核染色质粗糙。lSegmented 多为多为2叶，呈叶，呈双逗点状，也有双逗点状，也有35叶。叶。叶间有核丝或较粗的核桥，叶间有核丝或较粗的
20、核桥，核最窄径小于最宽径的核最窄径小于最宽径的1/3。核染色质。核染色质 粗糙。粗糙。Basophilsp胞体胞体1014m ，类圆形，类圆形 p胞浆淡蓝色，常被颗粒所胞浆淡蓝色，常被颗粒所掩盖，颗粒大小不等，形掩盖，颗粒大小不等，形态不规则，染成紫褐色、态不规则，染成紫褐色、蓝很色或暗红色，不透明。蓝很色或暗红色，不透明。颗粒染色深浅与分布不一颗粒染色深浅与分布不一致，有时颗粒可遮盖核。致，有时颗粒可遮盖核。p胞核胞核l band 弯曲成肾形，核染弯曲成肾形，核染色质粗糙固缩。色质粗糙固缩。lSegmented 分叶状，但形分叶状，但形态不如中性和嗜酸性粒细态不如中性和嗜酸性粒细胞的核叶清楚。胞的核叶清楚。白细胞形态异常中性粒细胞退行形变中性粒细胞退行形变中性粒细胞中毒颗粒中性粒细胞中毒颗粒异型淋巴细胞空泡型空泡型不规则型不规则型幼稚型幼稚型实验报告书写实验报告书写实验题目：白细胞分类计数和形态学检查实验题目：白细胞分类计数和形态学检查 实验目的实验目的 实验原理实验原理 实验器材实验器材 实验步骤实验步骤 实验结果实验结果 实验讨论实验讨论