《生物分离技术综合实验2010[1][1].11--_....ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生物分离技术综合实验2010[1][1].11--_....ppt（29页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、生物分离技术综合实验201011.11-_.Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备三、三、仪器仪器高速干粉粉碎机、恒温水浴锅、烧杯试管若干、中高速干粉粉碎机、恒温水浴锅、烧杯试管若干、中低速离心机、过滤装置低速离心机、过滤装置（漏斗和滤纸），（漏斗和滤纸），250ml磨磨口椎形瓶口椎形瓶6个个/每组；每组；10ml容量瓶容量瓶4个个/组。组。四、试剂四、试剂配配40%（80ml/组）、组）、70%（450 ml/
2、组）的乙醇，组）的乙醇，10硝酸铝溶液硝酸铝溶液50ml/组，组，5亚硝酸钠亚硝酸钠50 ml/组组,质量分数质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠200 ml/组。组。实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备五、操作五、操作1、不同、不同浸提剂浓度浸提剂浓度对黄酮提取率的影响对黄酮提取率的影响1.1取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6组（组（2.5克每组），用克每组），用8倍体积（指倍体积（指料液比料液比v/m为为8：1）即）即20ml的的40%、70%，95%的乙醇浸提的乙醇浸提（温度（温度70，时间，时间1.5h），浸提时每隔），浸提时每隔15 min用手用手轻摇轻摇2min。浸提所得
3、粗液进行离心（浸提所得粗液进行离心（4500r/min20min），得浸提上清液。），得浸提上清液。1.2 精密吸取上清液精密吸取上清液1.0 mL，分别置于，分别置于10 mL容量瓶中，加质容量瓶中，加质量分数量分数5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL，放置，放置6 min后，加质量分数后，加质量分数10硝硝酸铝酸铝0.4 mL，放置，放置6 min，再加质量分数，再加质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在，在510nm波长下测得其波长下测得其吸光度值，得出最优的浸提剂浓度。吸光度值，得出最优的浸提剂浓度。（按三个水平，每个水平
4、做两组操作，即每个单因素条件得六（按三个水平，每个水平做两组操作，即每个单因素条件得六个数据。）个数据。）实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备2、不同、不同浸提时间浸提时间对黄酮提取率的影响对黄酮提取率的影响2.1 取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6组（组（2.5克每组），用按克每组），用按8：1（指（指料液比料液比v/m）的）的70%乙醇浸提（温度乙醇浸提（温度70），浸提时间分别为），浸提时间分别为90min、120min，150min，浸提时每隔，浸提时每隔15分钟用手分钟用手轻摇轻摇2min。浸提所得粗液进行离心（浸提所得粗液进行离心（4500r/min20min），得
5、浸提上清液。），得浸提上清液。2.2 精密吸取上清液精密吸取上清液1.0 mL，分别置于，分别置于10 mL容量瓶中，加质容量瓶中，加质量分数量分数5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL，放置，放置6 min后，加质量分数后，加质量分数10硝酸铝硝酸铝0.4 mL，放置，放置6 min，再加质量分数，再加质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在，在510nm波长下波长下测得其吸光度值，得出最优的浸提时间。测得其吸光度值，得出最优的浸提时间。（按三个水平，每个水平做两组操作每个水平做两组操作，（按三个水平，每个水平做两组操作每个水平做
6、两组操作，即每个单因素条件做六个数据。）即每个单因素条件做六个数据。）实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备3、不同、不同料液比料液比对黄酮提取率的影响对黄酮提取率的影响3.1 取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6组（组（2.5克每组），用按克每组），用按6：1，8：1，10：1（指料液比（指料液比v/m，即，即ml/克）的克）的70%乙醇浸提（温度乙醇浸提（温度70，时间，时间1.5h），浸提时每隔），浸提时每隔15分钟用手轻摇分钟用手轻摇2min。浸提所。浸提所得粗液进行离心（得粗液进行离心（4500r/min20min），得浸提上清液。），得浸提上清液。3.2 精密吸取上清液
7、精密吸取上清液1.0 mL，分别置于，分别置于10 mL容量瓶中，加质容量瓶中，加质量分数量分数5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL，放置，放置6 min后，加质量分数后，加质量分数10硝硝酸铝酸铝0.4 mL，放置，放置6 min，再加质量分数，再加质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在，在510nm波长下测得其波长下测得其吸光度值，按吸光度值，按V*A值的大小比较得出最优的料液比。值的大小比较得出最优的料液比。选做部分：选做部分：若出现从若出现从6：18：110：1的（的（V*A）持续平稳）持续平稳增加，则可以继续加大料液比（
8、可以为增加，则可以继续加大料液比（可以为12：1，14：1,）,直到找到拐点位置的最佳料液比。直到找到拐点位置的最佳料液比。实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备六、实验注意事项六、实验注意事项1 1、将本实验中所有的乙醇提取的浸提液集中起来（一定要、将本实验中所有的乙醇提取的浸提液集中起来（一定要记下这些浸提液所对应的原料质量记下这些浸提液所对应的原料质量M M），量取其），量取其总体积总体积V V，将提取液分出将提取液分出50ml50ml，将这，将这50ml50ml和其余色素液分置于两个烧和其余色素液分置于两个烧杯中，然后将两个烧杯在杯中，然后将两个烧杯在44左右的低温下并用保鲜膜封
9、闭左右的低温下并用保鲜膜封闭保存保存（按现在的温度，放在台子上避光保存即可），（按现在的温度，放在台子上避光保存即可），以供以供后面纯化实验使用。后面纯化实验使用。2 2、在色素提取过程中，每隔一段时间要进行轻摇，摇晃时、在色素提取过程中，每隔一段时间要进行轻摇，摇晃时幅度要小，以免使提取原料粘在壁上，造成原料损失。幅度要小，以免使提取原料粘在壁上，造成原料损失。3 3、在做不同料液比对色素提取影响实验时，比较结果优劣、在做不同料液比对色素提取影响实验时，比较结果优劣要用要用V*A,V*A,即：体积即：体积*吸光度值。吸光度值。实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备六、实验注意事项六、实
10、验注意事项4 4、离心前一定要认真平衡好，两管质量平衡误差应在、离心前一定要认真平衡好，两管质量平衡误差应在0.10.1克以内。同时，在离心过程中，一定要有专人看护克以内。同时，在离心过程中，一定要有专人看护以免发生事故。以免发生事故。5 5、实验当中的提取液一定要全部从磨口锥形瓶和离心、实验当中的提取液一定要全部从磨口锥形瓶和离心管中倒出，在将离心好的色素倒出时，一定要小心，管中倒出，在将离心好的色素倒出时，一定要小心，不要将底部的沉降物倒出来。不要将底部的沉降物倒出来。6 6、色素提取过程中一定要在锥形瓶上加上塞子，若乙、色素提取过程中一定要在锥形瓶上加上塞子，若乙醇蒸发较快时醇蒸发较快时
11、（如：（如：80%80%以上的高浓度乙醇提取时），以上的高浓度乙醇提取时），可以考虑在磨口锥形瓶上加一蛇形管，但低浓度乙醇可以考虑在磨口锥形瓶上加一蛇形管，但低浓度乙醇提取时没有必要加蛇形管。提取时没有必要加蛇形管。实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备7、上样液的制备、上样液的制备（该步骤亦可以在实验二中完成）（该步骤亦可以在实验二中完成）将实验一中所得的将实验一中所得的所有浸提液所有浸提液用烧杯放在用烧杯放在100水浴中水浴中浓浓缩到缩到20ml，将所得浓缩液置于，将所得浓缩液置于50ml（或更大的）分液漏斗中，（或更大的）分液漏斗中，按等量体积加入石油醚后塞上塞子并充分摇匀，弃石油
12、醚层，按等量体积加入石油醚后塞上塞子并充分摇匀，弃石油醚层，得下层黄酮液，放在得下层黄酮液，放在90水浴中浓缩，浓缩至水浴中浓缩，浓缩至10ml（具体操（具体操作时，可先用大烧杯进行浓缩，待溶液约作时，可先用大烧杯进行浓缩，待溶液约50ml左右时，改用左右时，改用50ml小烧杯进行浓缩，这样便于进行定量），小烧杯进行浓缩，这样便于进行定量），备用。备用。实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备8、测量吸光度时，一定要设空白对照（即把除、测量吸光度时，一定要设空白对照（即把除1ml样样液以外的其余液以外的其余9ml亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、蒸馏亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、蒸馏水水+1ml乙
13、醇乙醇）9、由于各提取液浓度较大，在测量吸光度前，一定要、由于各提取液浓度较大，在测量吸光度前，一定要将待测液取出将待测液取出1mL，稀释到，稀释到10mL后，再按前面后，再按前面A值测值测定方法进行测定。定方法进行测定。实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备附录附录1 1、实验前面准备（同学们不需要做）：、实验前面准备（同学们不需要做）：（1 1）、原料的制备）、原料的制备用高速干粉粉碎机将银杏叶粉碎，过用高速干粉粉碎机将银杏叶粉碎，过4040目以上，目以上，40-6040-60目，目，60-60-7070目，目，70-8070-80目，目，80-9080-90目，目，90-10090
14、-100目，目，100100目以上，筛后备用。目以上，筛后备用。（2 2）、标准曲线的绘制：）、标准曲线的绘制：精密称取芦丁对照品精密称取芦丁对照品200 mg200 mg，用体积分数，用体积分数(下同下同)70)70乙醇溶解，乙醇溶解，定容至定容至100 mL100 mL容量瓶中摇匀。精密移取容量瓶中摇匀。精密移取10 mL10 mL芦丁乙醇液于芦丁乙醇液于25 25 mLmL容量瓶中，用蒸馏水定容，得到容量瓶中，用蒸馏水定容，得到0.8 mg0.8 mgmLmL标准溶液。精密标准溶液。精密吸取标准溶液吸取标准溶液0.00.0、0.20.2、0.40.4、0.60.6、0.80.8、1.0
15、mL1.0 mL，分别置于，分别置于10 mL10 mL容量瓶中，加质量分数容量瓶中，加质量分数5 5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL0.4 mL，放置，放置6 min6 min后，加质量分数后，加质量分数1010硝酸铝硝酸铝0.4 mL0.4 mL，放置，放置6 min6 min，再加质量分，再加质量分数数4.34.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min15 min，进行测量，在，进行测量，在510nm510nm处有最大吸收波长。以测定结果得芦丁处有最大吸收波长。以测定结果得芦丁浓度与吸光度的标准曲线：浓度与吸光度的标准曲线：Y=0
16、.1035Ad-0.0016(YY=0.1035Ad-0.0016(Y：芦丁浓度，：芦丁浓度，mgmgmlml；A A：吸光值：吸光值)，R=0.9999R=0.9999。实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化一、目的一、目的学习掌握柱层析法分离纯化目的物质（植物色素）的方法学习掌握柱层析法分离纯化目的物质（植物色素）的方法和操作。和操作。二、原理二、原理柱层析是比较理想的分离黄酮类色素的方法柱层析是比较理想的分离黄酮类色素的方法,其原理是通其原理是通过基质分子与黄酮类化合物分子上的过基质分子与黄酮类化合物分子上的酚羟基形成氢键缔合酚羟基形成氢键缔合物而产生作用物而产生作用,其作
17、用力强弱取决于黄酮类化合物分子上其作用力强弱取决于黄酮类化合物分子上羟基的数目与位置羟基的数目与位置以及以及洗脱剂与黄酮类化合物和基质之间洗脱剂与黄酮类化合物和基质之间形成氢键缔合能力的大小形成氢键缔合能力的大小。常用不同比例的水和醇混合溶。常用不同比例的水和醇混合溶剂作为洗脱剂，能成功分离各种类型的黄酮。剂作为洗脱剂，能成功分离各种类型的黄酮。实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化三、器材与试剂三、器材与试剂1、实验仪器实验仪器 层析柱、试管、烧杯、量筒、烘箱。层析柱、试管、烧杯、量筒、烘箱。2、实验试剂实验试剂 石油醚、石油醚、40%乙醇乙醇200ml/组、组、70%乙醇乙醇
18、300ml/组、组、95%乙醇乙醇200ml/组、基质。组、基质。3、实验材料、实验材料 银杏叶提取液银杏叶提取液实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化四、操作四、操作1、上样液的制备、上样液的制备（该步骤亦可以在实验一中完成）（该步骤亦可以在实验一中完成）将实验一中所得的所有浸提液将实验一中所得的所有浸提液用烧杯放在用烧杯放在100水浴中水浴中浓缩浓缩到到20ml，将所得浓缩液置于，将所得浓缩液置于50ml（或更大的）分液漏斗中，（或更大的）分液漏斗中，按等量体积加入石油醚后塞上塞子并充分摇匀，弃石油醚按等量体积加入石油醚后塞上塞子并充分摇匀，弃石油醚层，得下层黄酮液，放在层，
19、得下层黄酮液，放在90水浴中浓缩，浓缩至水浴中浓缩，浓缩至10ml（具体操作时，可先用大烧杯进行浓缩，待溶液约（具体操作时，可先用大烧杯进行浓缩，待溶液约50ml左左右时，改用右时，改用50ml小烧杯进行浓缩，这样便于进行定量），小烧杯进行浓缩，这样便于进行定量），备用。备用。2、基质的的预处理：、基质的的预处理：称取所需的大孔吸附树脂称取所需的大孔吸附树脂(湿重湿重)，以，以95乙醇浸泡乙醇浸泡24 h，充分溶胀后用乙醇湿法装柱，充分溶胀后用乙醇湿法装柱，实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化3 装柱：装柱：将酒精浸泡好的基质约将酒精浸泡好的基质约40ml（指混匀状态下取样），
20、通过漏斗缓慢倒入柱（指混匀状态下取样），通过漏斗缓慢倒入柱中中（柱中已经装好（柱中已经装好10ml95%乙醇），乙醇），边加边用木夹子轻敲柱子，同时用竹边加边用木夹子轻敲柱子，同时用竹签轻轻压实。流速应控制在签轻轻压实。流速应控制在20滴滴/min，待装至，待装至20cm柱高，再加与柱壁完全柱高，再加与柱壁完全吻合的滤纸片，接着加入吻合的滤纸片，接着加入1.0 cm高海沙（或石英砂高海沙（或石英砂）。（注意，在整个装）。（注意，在整个装柱过程中，树脂应浸泡在溶液中，否则会出现断痕，气泡等。柱过程中，树脂应浸泡在溶液中，否则会出现断痕，气泡等。若柱子无砂若柱子无砂芯，要在装柱前加一小团（大拇指指
21、甲大小的）棉花封住柱子，以防基质芯，要在装柱前加一小团（大拇指指甲大小的）棉花封住柱子，以防基质漏出。漏出。）4、平衡：、平衡：用用95%乙醇洗柱，不时检查流出的乙醇液，待流出的乙醇液与去离子水以乙醇洗柱，不时检查流出的乙醇液，待流出的乙醇液与去离子水以1：3的体积比混合，振摇不显白色浑浊时结束洗柱（已洗好，不必做），的体积比混合，振摇不显白色浑浊时结束洗柱（已洗好，不必做），用纯化水将柱中树脂洗至无醇味后备用用纯化水将柱中树脂洗至无醇味后备用。（注意，所有醇洗液需回收到大。（注意，所有醇洗液需回收到大的烧杯里，水洗液不必回收）的烧杯里，水洗液不必回收）5、上样与吸附：、上样与吸附：取浓缩液取
22、浓缩液10ml上柱，吸附上柱，吸附20min（流速（流速20滴滴/min），等样品液完全流入基），等样品液完全流入基质中后，用质中后，用3倍柱体积（约倍柱体积（约150ml）去离子水洗脱。）去离子水洗脱。实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化6、洗脱（解吸附）：、洗脱（解吸附）：6.1 依次用依次用40%200ml（流速约流速约30滴滴/min）、）、70%300ml（流（流速约速约20滴滴/min）、）、95%200ml（流速约（流速约40滴滴/min）乙醇分别）乙醇分别进行洗脱，将试管放在试管架上按序接收洗脱液，每管收集进行洗脱，将试管放在试管架上按序接收洗脱液，每管收集 8
23、ml左右洗脱液左右洗脱液6.2 从第一管起，每接收从第一管起，每接收3管，则精密吸取第管，则精密吸取第1、4、7、10等管中的洗脱液等管中的洗脱液1.0 mL，置于，置于10 mL容量瓶中，加质量分数容量瓶中，加质量分数5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL，放置，放置6 min后，加质量分数后，加质量分数10硝酸铝硝酸铝0.4 mL，放置，放置6 min，再加质量分数，再加质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL，加，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在，在510nm波长下测得其波长下测得其吸光度值；吸光度值；实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化6、洗脱（
24、解吸附）：、洗脱（解吸附）：6.3 确定黄酮所在的主要流分后，将吸光度值在确定黄酮所在的主要流分后，将吸光度值在0.1以上（含以上（含0.1）的所有管中的洗脱液集中起来，测出其）的所有管中的洗脱液集中起来，测出其总体积总体积V纯化纯化（接（接着，可直接测定纯化液的着，可直接测定纯化液的A值）值），预留预留50ml纯化液，纯化液，用保鲜膜封闭用保鲜膜封闭后放在后放在4中低温保存，并中低温保存，并将其余的纯化液将其余的纯化液置于置于90水浴水浴中浓缩至中浓缩至10ml，用保鲜膜封闭后放在，用保鲜膜封闭后放在4中低温避光保存，中低温避光保存，备用。备用。实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分
25、离纯化五、实验注意事项五、实验注意事项1 1、装柱前在柱子底部加一小棉花球。、装柱前在柱子底部加一小棉花球。2 2、装柱时，边加树脂边用木质棒（或橡胶棒）轻、装柱时，边加树脂边用木质棒（或橡胶棒）轻敲柱子，使基质缓缓下沉敲柱子，使基质缓缓下沉 。3 3、装柱要求连续、均匀、无纹格、无气泡，表面、装柱要求连续、均匀、无纹格、无气泡，表面平整，整个层析过程中液面一定不得低于树脂表面。平整，整个层析过程中液面一定不得低于树脂表面。4 4、要注意及时开启和关闭旋纽，即在上一种液体、要注意及时开启和关闭旋纽，即在上一种液体刚好没入基质时，才开始加入下一种液体，刚好没入基质时，才开始加入下一种液体，且一定
26、且一定要用玻棒引流要用玻棒引流。实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化五、实验注意事项五、实验注意事项5 5、要注意控制流速，不宜过快。、要注意控制流速，不宜过快。6 6、在加入好样品后（在洗壁前）就要接收洗、在加入好样品后（在洗壁前）就要接收洗脱液。脱液。7 7、柱子预处理时的流出液用三角瓶或烧杯接、柱子预处理时的流出液用三角瓶或烧杯接收，而上样后的色素洗脱液则用试管接收。收，而上样后的色素洗脱液则用试管接收。8 8、所预留的纯化液、所预留的纯化液50ml50ml和和10ml10ml，必须是在所，必须是在所有洗脱下来的有洗脱下来的A A值大于值大于0.10.1的纯化液混匀后才能
27、的纯化液混匀后才能取液。取液。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定一、目的一、目的 用化学方法鉴定上面所纯化的提取液中有黄酮存在，用化学方法鉴定上面所纯化的提取液中有黄酮存在，同时测定黄酮的含量和最后的得率。同时测定黄酮的含量和最后的得率。二、原理二、原理黄酮化合物分子结构中具有黄酮化合物分子结构中具有C5、C6位的酚羟基或邻二位的酚羟基或邻二酚羟基可与酚羟基可与金属盐试剂铝盐金属盐试剂铝盐生成有色络合物，黄酮络生成有色络合物，黄酮络合物在合物在510nm处有较大的吸收峰，可由分光光度法测处有较大的吸收峰，可由分光光度法测出黄酮含量。根据黄酮的一些特性，利用黄酮与一
28、些出黄酮含量。根据黄酮的一些特性，利用黄酮与一些试剂发生特殊的发色反应来检测黄酮。试剂发生特殊的发色反应来检测黄酮。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定三、实验器材三、实验器材1、实验仪器：、实验仪器：分光光度计，烘箱，电子天平，分光光度计，烘箱，电子天平，10ml 容量容量瓶瓶1支支/组，组，100m容量瓶容量瓶1支支/组，移液管若干。组，移液管若干。2、实验试剂：、实验试剂：80%的氢氧化钠（质量分数）溶液，的氢氧化钠（质量分数）溶液，10%的的FeCl3，10%的的FeCl2溶液，溶液，2%NaBH4溶液，甲醇。溶液，甲醇。3、实验材料：、实验材料：实验二中所
29、得的洗脱液的浓缩液（总体积实验二中所得的洗脱液的浓缩液（总体积为为10ml）。）。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定四、实验步骤四、实验步骤（一）物质初步鉴定操作（样液是实验二中纯化液浓缩（一）物质初步鉴定操作（样液是实验二中纯化液浓缩而来的而来的10ml）：）：1、在所纯化的提取液在所纯化的提取液2ml中加入中加入10%的氢氧化钠（的氢氧化钠（质量质量分数）溶液分数）溶液2ml，若色素液马上由黄色变为深黄色；则认，若色素液马上由黄色变为深黄色；则认定黄酮化合物的存在。定黄酮化合物的存在。2、在所纯化的提取液两份，各为在所纯化的提取液两份，各为2ml，分别加入，分
30、别加入10%的的FeCl3，Fe Cl2；若发现两种离子都使色素溶液变为蓝绿；若发现两种离子都使色素溶液变为蓝绿色，则可认定黄酮化合物的存在。色，则可认定黄酮化合物的存在。3、硼酸氢钠反应：取黄酮纯化液硼酸氢钠反应：取黄酮纯化液2ml，再加等量的，再加等量的2%NaBH4的甲醇溶液的甲醇溶液1min后加浓盐酸后加浓盐酸（买来即用，不（买来即用，不需调配）需调配）数滴，若有紫色或紫红色出现，则说明此黄酮数滴，若有紫色或紫红色出现，则说明此黄酮纯化液中有二氢黄酮存在。纯化液中有二氢黄酮存在。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定（二）目的物质得率的确定：（二）目的物质得率
31、的确定：1、标准曲线及方程和最佳吸收波长用实验一的结果。标准曲线及方程和最佳吸收波长用实验一的结果。2、从实验二所得的预留在冰箱中的从实验二所得的预留在冰箱中的10ml纯化液纯化液中精密吸中精密吸取取1ml，（注意，若储存液有沉降现象，则可进行（注意，若储存液有沉降现象，则可进行40 加热，待其加热，待其澄清后再进行光度测定，澄清后再进行光度测定，但若是连续实验，就不必在冰箱中保但若是连续实验，就不必在冰箱中保存而是在实验二中直接测定其存而是在实验二中直接测定其A A值）值），放置于放置于10 mL容量容量瓶中，冰箱中取出放置一定时间，使之达到室温后，按前瓶中，冰箱中取出放置一定时间，使之达到
32、室温后，按前面方法，在面方法，在510nm波长下测得其吸光度值波长下测得其吸光度值A。此步骤亦可在实验二中直接测定。此步骤亦可在实验二中直接测定。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定（二）目的物质得率的确定：（二）目的物质得率的确定：将将A样品代入标准曲线方程样品代入标准曲线方程Y=KA+b(Y：黄酮浓度，：黄酮浓度，gL；A：吸光值，：吸光值，用各组自己测得的方程用各组自己测得的方程)，可以得到待测样品的黄酮浓度，可以得到待测样品的黄酮浓度，C纯化纯化（单（单位为位为mg/ml）。）。C纯化纯化=Y*10*n（由于测定浓度过程中，待测液由（由于测定浓度过程中，待测
33、液由1ml定容到定容到10ml，n为实为实验过程中待测液的稀释倍数）验过程中待测液的稀释倍数）黄酮得率黄酮得率%=测得的黄酮含量（测得的黄酮含量（mg）/原料总质量原料总质量100%=（C纯化纯化 V纯化）纯化）mg（M1000）mg100%M代表代表V所对应的原料的总质量。将书本公式中的所对应的原料的总质量。将书本公式中的“V提取液提取液/200”去去掉掉，因为实验二中，因为实验二中10ml浓缩液对应的是所有提取液。浓缩液对应的是所有提取液。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定（三）目的物质的纯度测定：（三）目的物质的纯度测定：取实验一中所得的取实验一中所得的提取
34、液提取液50ml，放置在已经烘干，并，放置在已经烘干，并已经称好质量为已经称好质量为m1的小烧杯中，放在真空干燥箱中干的小烧杯中，放在真空干燥箱中干燥，干燥到恒重后，称其重量燥，干燥到恒重后，称其重量m2，得色素浸膏重量为，得色素浸膏重量为（m2 m1），再根据上面第（二）中的公式算出总），再根据上面第（二）中的公式算出总黄酮含量黄酮含量m总总，则其纯度为：，则其纯度为：目的物质的目的物质的纯化前纯化前纯度纯度=C纯化纯化50 100%m2 m1实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定（三）目的物质的纯度测定：（三）目的物质的纯度测定：取实验二中所得的取实验二中所得的纯
35、化液纯化液50ml，放置在已经烘干，并已，放置在已经烘干，并已经称好质量为经称好质量为m3的小烧杯中，放在真空干燥箱中干燥，的小烧杯中，放在真空干燥箱中干燥，干燥到恒重后，称其重量干燥到恒重后，称其重量m4，得色素浸膏重量为（，得色素浸膏重量为（m4 m3），再根据上面第（二）中的公式算出总黄酮含量），再根据上面第（二）中的公式算出总黄酮含量m总总，则其纯度为：，则其纯度为：目的物质的目的物质的纯化后纯化后纯度纯度=C纯化纯化50 100%m4 m3 实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定（三）目的物质的纯度测定（三）目的物质的纯度测定纯化倍数计算：纯化倍数计算：m
36、=目的物质的目的物质的纯化后纯化后纯度纯度 目的物质的目的物质的纯化前纯化前纯度纯度实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定五、实验注意事项五、实验注意事项1 1、在进行、在进行目的物质得率的确定目的物质得率的确定的实验中，一定要注意的实验中，一定要注意实验数据测量的精确性。实验数据测量的精确性。2、在进行在进行目的物质的纯度测定目的物质的纯度测定的实验中，要注意色素的实验中，要注意色素容器（小烧杯）一定要先在高温烘干后称其重量，然容器（小烧杯）一定要先在高温烘干后称其重量，然后把色素倒入其内，在高温下进行烘干。后把色素倒入其内，在高温下进行烘干。实验三、植物色素的定量
37、与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定五、实验注意事项五、实验注意事项3 3、在测定洗脱液的、在测定洗脱液的A A值时，若洗脱液经过稀释到值时，若洗脱液经过稀释到n n倍后倍后再测定时，则须在原来的再测定时，则须在原来的C C纯化纯化数值的基础上在乘以稀数值的基础上在乘以稀释倍数释倍数n n，在去计算相应的得率和纯度。，在去计算相应的得率和纯度。在此情况下，测定液相当于稀释了在此情况下，测定液相当于稀释了两次两次，一次是样，一次是样液本身的稀释，另一次是样液测定时加入的显色剂使液本身的稀释，另一次是样液测定时加入的显色剂使之稀释到之稀释到1010倍。计算时的倍数是两次稀释倍数的乘积。倍。计算时的倍数是两次稀释倍数的乘积。4 4、每天的水浴锅、烘箱、水龙头、门窗等在晚上离开、每天的水浴锅、烘箱、水龙头、门窗等在晚上离开实验室时必须关闭。实验室时必须关闭。后记后记1 1、同学们在实验结束后，一定要将所有用过、同学们在实验结束后，一定要将所有用过的设备洗涤干净后，摆放整齐，并归放到相应的设备洗涤干净后，摆放整齐，并归放到相应的实验室内。并把所用到的所有实验室打扫干的实验室内。并把所用到的所有实验室打扫干净。净。2 2、把领用的东西由组长负责归还给老师。、把领用的东西由组长负责归还给老师。3 3、实验报告在第、实验报告在第1 16 6周周四前交上来。周周四前交上来。