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1、实验五 叶绿体色素的提取、分离及理化性质的鉴定 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望叶绿素是一种双羧酸的酯，可与碱发生皂化作用，产生的盐能溶于水，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。叶绿素与胡萝卜素都有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光镜检查和用分光光度计精确测定。叶绿素在光照下可产生暗红色的荧光；叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光破坏，特别是叶绿素与蛋白分离后光破坏更快；叶绿素中的镁可被H+取代，称为褐色的去镁叶绿素；加入铜盐后则成为铜代叶绿素，
2、铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作子午的浸制标本。三、器材与试剂三、器材与试剂 仪器：带盖培养皿、台天平、研钵、量筒、烧杯、漏斗、软木塞、新华滤纸、毛细滴管、剪刀、分液漏斗、移液管、分光计。实验试剂：丙酮、甲酯、醋酸铜、盐酸、氢氧化钾、石英砂、碳酸钙、无水硫酸钠、四氯化碳、乙醚。材料：菠菜叶片一、叶绿体色素的提取与分离 1、称取新鲜叶片2 g，放入研钵总加入丙酮5 ml，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，再加丙酮10 ml，以漏斗过滤，滤液即为色素提取液，放于暗处备用 2、把展层用的驴子中间搞一个圆洞，把新华滤纸剪成20 cm的长条卷成圆柱，一端多次滴上色素提取液，插入圆形滤纸中间
3、孔中，上面与圆形滤纸齐平 3、在培养皿中加入展层用的四氯化碳，把上部做成的滤纸下的含色素圆柱下端浸入展层液，盖上培养皿上盖，开始展层。等展层液扩散到培养皿边缘时，取出滤纸，观察同心圆色素带，做好记录。二、叶绿体色素的理化性质 1、叶绿体的荧光现象：取上述色素提取液少许于试管中，分别观察反射光和透射光，比较观察到的颜色不同并分析原因。2、光对叶绿素的破坏：取上述色素提取液少许分别加入两个试管中，一支试管放在暗处，一支试管放在强光下照射，2 h后观察颜色变化，分析原因。3、铜代反应：取上述色素提取液加入试管，逐滴加入浓盐酸，直至溶液呈现褐色，此时叶绿素分子已经遭到破坏，称为去镁叶绿素，然后加入醋酸铜结晶少许，慢慢加入溶液，直至出现鲜亮的绿色，此时即形成了铜代叶绿素。4、黄色素与绿色素的分离：取上述色素丙酮提取液10 ml，加入盛有20 ml乙醚的分液漏斗，并沿漏斗边缘加入30 ml蒸馏水，轻轻摇动分液漏斗，静止片刻，溶液分为两层。色素已经全部转入上层乙醚总，弃去丙酮和水，再加入5 ml30%KOH甲醇溶液，用力摇动分液漏斗，静置10分钟，再加入蒸馏水10 ml，摇动后静置分离，得到黄色素层和绿色素层，分别保留，分析实验结果和原因。五、结果与讨论 分析每个实验的结果，注意事项和原因。六、作业 1、记录每个实验的结果。2、为什么提取叶绿体色素要加入少许碳酸钙和石英砂？