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1、实验一显微镜构造和使用及实验一显微镜构造和使用及组织切片的观察组织切片的观察v一、实验课的目的要求一、实验课的目的要求v通过实验课教学验证、加深理解和巩固课堂讲授所学知识，熟悉动物学的基本操作技术，提高动手能力及观察分析问题的能力，培养科学的、严谨的、实事求是的学风。v二、实验室规则二、实验室规则v(一)学生应按规定时间进入实验室。保持实验室安静，不得进行与实验无关的活动。v(二)实验用的一切工具，在使用前应核对清楚，实验后清洗干净，查点清楚，原样放回。v(三)观察及绘图务求精细准确，独立思考，独立完成。v(四)每次的实验报告应在教师指定时间内完成。v(五)实验结束，于离开实验室前，应清理好自
2、己的实验桌，要轮流打扫实验室，保持整洁。v(六)爱护实验室的一切物品，避免损坏或浪费。损坏物品时，应主动向教师报告。v四、实验操作及观察四、实验操作及观察v必须按实验指导了解显微镜的各部分结构、性能及使用方法。切不可脱离实验指导，擅自扭动各部件，以免损坏仪器。使用显微镜作一般观察主要是学会调光线、调焦点。作显微照相时，还必须调中心(调聚光器中心)。使用高倍镜时，一定要从低倍镜开始。用油镜时要从40X的物镜开始。将要观察的标本某部分移至视野正中央。在高倍镜下只能用细调焦器调焦点，不能用粗调焦器。要开大光阑。v(一)显微镜的基本结构：显微镜的中部有一弯曲的柄，称镜臂，基部为镜座。用右手握紧镜臂，将
3、其自镜箱(或镜柜)中取出，左手托住镜座，保持镜体直立，轻放于桌上，观察各部分构造。镜座上的短柱叫镜柱。镜座与镜柱之间有一倾斜关节(在较新的显微镜无此倾斜关节)，可使显微镜在90角范围内随意倾斜成任何角度。v在镜臂基部有一个方形或圆形的平台，是载物台(或称镜台)。台的中央有一圆孔，可通过光线。两侧有压片夹，用以固定玻片标本。现代的显微镜具镜台X-Y驱动器，用以固定和移动玻片标本。在圆孔的下面，有由一片或数片透镜所组成的聚光器，有集射光线于物体的作用。聚光器附有一组由金属片组成的可变光阑，其侧面伸出一杠杆，可前后移动使光阑开闭。光阑开大则光线较强，适于观察色深的物体；光阑缩小则光线较弱，适于观察透
4、明(或无色)的物体。在聚光器下方有反光镜，可将光线反射至聚光器。此镜一面平，一面凹。凹面具有较强的互光性，多用于光线较暗的情况下；光线较强时用平面镜即可。内光源显微镜的光源位于镜座靠后方，在镜座右侧有光源按钮，此按钮可前后移动，使光阑开闭，用以调节光线的强弱。v在载物台的圆孔上方，有一附于镜柄上端的圆筒称为镜筒，其上下两端附有镜头。两目镜筒之间的距离，可按观察者双目的距离调节。镜筒上端有接目镜(或称目镜)，可从镜筒内抽出。接目镜有低倍和高倍之分。在镜筒下端有可旋转的圆盘叫旋转器，下面附有24个接物镜(或称物镜)以螺旋旋入旋转器内。转动旋转器可换用接物镜。在镜臂上有两组螺旋。大的叫粗调焦器，小的
5、叫细调焦器。粗调焦器升降镜筒较快，用于低倍镜调焦；细调焦器升降镜筒较慢，用于高倍镜调焦：接物镜有低倍和高倍之分。较短的是低倍，一般放大10倍(10X)；较长的是高倍，一般放大40倍(40X)。、油物镜放大100倍(100X)。接目镜也有高低倍之分，较长的是低倍，一般放大10倍。显微镜的总放大倍数是接目镜的放大倍数与接物镜放大倍数的乘积：例如使用5X接目镜与10X接物镜，则总放大倍数是50倍。使用10X接目镜与40X接物镜。则总放大倍数是400倍。v(二)显微镜的使用方法：使镜臂向着自己(现代显微镜使镜臂反向对着自己)，摆好显微镜。转动粗调焦器，把镜筒向上提起。转动旋转器，使低倍接物镜对准载物台
6、的圆孔。二者相距约2cm左右，两眼对着双筒接目镜观察(如为单筒目镜，则两眼睁开用左眼看)。打开可变光阑，用手转动反光镜，使它正对着光源，但不可对直射的阳光：当视野(即从镜内看到的圆形部分)呈现一片均匀的白色时即可。如为内光源显微镜打开光源按钮，向前向后移动按钮，调节光线的强弱至适宜强度，此为调光线。v取一拉丁字母装片放载物台上，使字母正对中央圆孔。用压片夹（或XY驱动器)固定。转动粗调焦器，使镜筒下降至低倍接物镜距装片5mm左右为度。然后自目镜观察，同时转动粗调焦器，提升镜筒，至视野内的字母清晰为止，此为调焦点：再以可变光阑调节光线至适宜强度。一般现代显微镜由粗、细调焦器提高或降低镜台一镜台下
7、聚光器：注意视野内看到的字母，上下左右轻轻移动装片，物像的移动方向如何？思考一下原因。v低倍物镜观察毕可转高倍物镜。首先将要详细看的部分移到视野正中央。提升镜筒，转动旋转盘，换高倍物镜。从侧面观察下降镜筒，使高倍物镜几乎接触玻片1mm左右)为止。再从目镜观察，转动细调焦器，提升镜筒，一般旋转半圈至一圈即可出现像(要小心操作，切勿压破盖玻片或载玻片)。可将光阑开大，上下调节细调焦器，使物象达到最清晰为止。现代显微镜一般在低倍物镜下调好焦点后，可直接转换高倍物镜，注意在高倍物镜下，视野内的字母能看到多大部分?与低倍物镜所见比较一下：使用高倍物镜时，一定先从低倍物镜开始(如上步骤)。准备详细观察的标
8、本部分，要移到视野正中央。在高倍物镜下调焦点只能用细调焦器，不能用粗调焦器。光阑要开大。由低倍物镜转高倍物镜需多练习几次，要初步掌握使用方法。v观察完毕后，必须先把接物镜头转开，然后取出玻片标本。每次实验完毕后，都要把高、低倍接物镜转向前方，不可使接物镜正对着聚光器，然后放回镜箱(或镜柜)内。要注意经常保持显微镜的清洁。如金属部分有灰尘时，一定要用清洁的软布擦干净。如镜头有灰尘时，必须用特备的擦镜纸轻轻地擦去。切勿用手或其他布、纸等擦拭，以免损坏透镜。v油物镜的使用：首先在高倍干物镜(40X)下调准焦点，将要观察的标本某部分移至视野的正中心。然后，转动旋转器移开物镜，在盖片上视野中央的位置加一
9、滴镜头油(具一定折射率的)，再将油物镜移至该处，使前透镜与油滴接触。开大光阑，即可看到物像，上下稍动细调焦器则可看到清晰的物像。用后，将油物镜移至旁边，将最低倍物镜移至玻片标本上方，不宜将高倍物镜(40X)放在此处，以免玷污透镜。然后，用擦镜头纸沾镜头清洗液轻轻擦拭透镜。不宜用二甲苯或相似溶剂擦拭，以免损坏透镜中的胶合剂。v五、示范五、示范v显微镜有许多类型和型号，各有其不同的用途。v(一)实体显微镜或称立体显微镜：v(二)暗视野显微镜：v(三)相差显微镜：v(四)荧光显微镜：v(五)倒置显微镜：v(六)研究用大型的显微镜，v 动物的细胞和组织动物的细胞和组织v一、实验目的一、实验目的v(一一
10、)了解细胞的基本结构及有丝分裂各期的特点。了解细胞的基本结构及有丝分裂各期的特点。v(二二)了解动物的了解动物的4类基本组织的结构和功能。类基本组织的结构和功能。v二、实验内容二、实验内容v(一一)细胞：人口腔上皮细胞；马蛔虫或其他动物细胞的有丝分裂制片。细胞：人口腔上皮细胞；马蛔虫或其他动物细胞的有丝分裂制片。v(二二)上皮组织：复层扁平上皮。上皮组织：复层扁平上皮。v(三三)结缔组织：疏松结缔组织；透明软骨、蛙的血液装片：结缔组织：疏松结缔组织；透明软骨、蛙的血液装片：v(四四)肌肉组织：横纹肌、平滑肌。肌肉组织：横纹肌、平滑肌。v(五五)神经组织：脊髓的前角细胞。神经组织：脊髓的前角细胞
11、。v三、实验材料和用具三、实验材料和用具v人口腔上皮、疏松结缔组织及血液组织人口腔上皮、疏松结缔组织及血液组织(活蛙或蟾蜍活蛙或蟾蜍)、有丝分裂制片、有丝分裂制片、复层扁平上皮、透明软骨、平滑肌及神经组织复层扁平上皮、透明软骨、平滑肌及神经组织4种组织装片，：幻灯机、种组织装片，：幻灯机、载玻片、盖玻片、解剖器、吸管、吸水纸、牙鉴载玻片、盖玻片、解剖器、吸管、吸水纸、牙鉴、0.1的亚甲蓝、的亚甲蓝、07及及09的的NaCl溶液、蒸馏水。溶液、蒸馏水。v四、实验操作及观察四、实验操作及观察v(一)人口腔上皮细胞：用牙签粗的一端，放在自己的口腔内颊轻轻刮几下(注意不要用力过猛，以免损伤颊部)。将刮
12、下的白色粘性物薄而均匀地涂在载玻片上，加一滴09NaCI溶液，然后加盖玻片，在低倍显微镜下观察。口腔上皮细胞，常数个连在一起。由于口腔上皮细胞薄而透明，因此光线需要暗些。找到口腔上皮细胞后将其放在视野中心，再转高倍镜观察。口腔上皮细胞呈扁平多边形。试辨认细胞核、细胞质、细胞膜。若观察不清楚时，可在盖片一侧加一滴01的亚甲蓝，另一侧放一小块吸水纸，如此可使染液流人盖片下面，将细胞染成浅蓝色。核染色较深。注意染液不可过多，以防碍观察。v(二)疏松结缔组织：取活蛙或蟾蜍经麻醉或处死后。剪开腹部皮肤。用镊子从皮肤与肌肉层之间取下一小片结缔组织。放在干净的载玻片上，加一滴07NaCl溶液。用解剖针将其展
13、薄，加数滴1亚甲基蓝。两分钟后用0.7NaCl溶液冲去多余染液。加盖玻片在镜下观察。可见胶原纤维和弹性纤维均不着色。胶原纤维成束，弯曲成波浪状；弹性纤维细而具分枝，不成束，无波浪状弯曲。结缔组织细胞不甚规则，核着色深而清楚，细胞质色浅能辨认出细胞界限。v(三)血液组织：v1解剖蛙或蟾蜍，以吸管从心脏(最好在动脉圆锥处)取出血液，放一小器皿中，加入少许07NaCl溶液稀释。吸此液一滴，制成临时装片，在镜下观察。v2蛙的红细胞呈扁椭圆形。单个红细胞呈极浅的黄色，中央有一较大的椭圆形细胞核。血细胞间的五色液体称为血浆。轻轻地敲击载片，可看到血细胞在血浆中转动，注意观察红细胞的侧面是什么形状。v(四)肌肉组织：v1从保存的蝗虫浸制标本胸部用细镊子取下一小束肌肉，放载玻片上加1-2滴水，用解剖针仔细分离(越细越好)，加盖玻片置于镜下观察。v2蝗虫的肌肉为横纹肌，肌肉组织由长形的肌纤维组成。外面有一层薄膜叫肌膜。细胞中与其长轴平行排列着许多细丝状物，此为肌原纤维。肌原纤维有明暗相间的横纹，为什么?可在高倍镜下详细观察。在细胞膜下面分布有许多椭圆形的细胞核，故横纹肌为多核的合胞体。若观察不够清楚时，可用0.1亚甲基蓝染色。v六、作业：六、作业：v1由低倍物镜转高倍物镜时应特别注意哪几由低倍物镜转高倍物镜时应特别注意哪几点点?v2、绘1-2个人口腔上皮细胞。