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1、实验实验5 5微生物大小及数量测定微生物大小及数量测定pptppt课件课件Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal University课前提问与目的要求课前提问与目的要求【课前提问课前提问】1.1.显微测微尺测量微生物大小的原理是什么？显微测微尺测量微生物大小的原理是什么？2.2.测定过程中应注意哪些问题？测定过程中应注意哪些问题？【目的要求目的要求】1.1.学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法。学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法。2.2.掌握对不同形态细菌细胞大小测定的分类学基本要
2、求，掌握对不同形态细菌细胞大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细胞大小的感性认识。增强对微生物细胞大小的感性认识。Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal UniversityCentral Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal UniversityCentral Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal UniversityCentral Lab
3、oratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal UniversityCentral Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal UniversityCentral Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal UniversityCentral Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal University【实验
4、报告实验报告】1.1.结果结果1 1）将目镜测微尺校正结果填入表）将目镜测微尺校正结果填入表5-15-1中中表表5-1 5-1 目镜测微尺校正结果目镜测微尺校正结果物镜物镜物镜倍数物镜倍数目镜测微尺格数目镜测微尺格数镜台测微尺格数镜台测微尺格数目镜测微尺每格代表的长度目镜测微尺每格代表的长度/m/m低倍镜低倍镜高倍镜高倍镜油镜油镜目镜放大倍数：目镜放大倍数：Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal University2 2）将各菌测定结果记录填入表）将各菌测定结果记录填入表5-25-2中。中。1 12
5、 23 34 45 56 67 78 89 91010平均值平均值(m)(m)金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌迂回螺旋菌迂回螺旋菌注：球菌用直径（宽度）表示细胞大小，杆菌和螺菌用宽度注：球菌用直径（宽度）表示细胞大小，杆菌和螺菌用宽度长度表示细胞大小。长度表示细胞大小。表表5-2 5-2 金黄色葡萄球菌大小测定记录金黄色葡萄球菌大小测定记录【实验报告实验报告】Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal University3 3）用表）用表5-35-3对各菌测定结果进行计算和表述。对各
6、菌测定结果进行计算和表述。细菌名称细菌名称目镜测微尺目镜测微尺每格代表的每格代表的长度长度/m/m宽宽长长目镜测微尺目镜测微尺平均格数平均格数宽度宽度mm目镜测微尺目镜测微尺平均格数平均格数长度长度mm菌体菌体大小大小金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌迂回螺菌迂回螺菌注：球菌用直径（宽度）表示细胞大小，杆菌和螺菌用宽度注：球菌用直径（宽度）表示细胞大小，杆菌和螺菌用宽度长度表示细胞大小。长度表示细胞大小。【实验报告实验报告】Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal University
7、2.2.思考题思考题 1 1）为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台）为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？测微尺重新对目镜测微尺进行校正？2 2）在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物）在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同？为什么镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同？为什么？【实验报告实验报告】Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal University第二部分第二部分 显微
8、镜直接计数法测定微生物数量显微镜直接计数法测定微生物数量【课前提问课前提问】1.1.血球计数板的基本原理是什么？血球计数板的基本原理是什么？2.2.显微镜直接计数法的优缺点是什么？显微镜直接计数法的优缺点是什么？【目的要求目的要求】1.1.明确显微镜计数的原理；明确显微镜计数的原理；2.2.学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal University【基本原理基本原理】血细胞计数板是一块特制的载玻片，其上由血细胞计数板是一
9、块特制的载玻片，其上由4 4条槽构成条槽构成3 3个平台。个平台。中间较宽的平台又被一段横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有中间较宽的平台又被一段横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分一个方格网，每个方格网共分9 9个大方格，中间的大方格即为计个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成数室。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成2525个中方格，而每个中方格又分成个中方格，而每个中方格又分成1616小方格（图小方格（图5-25-2）；另一种是）；另一种是一个大方格分成一个大方格分成1616个中方格，而每个中方格又分成个中方格
10、，而每个中方格又分成2525个小方格，个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400400个。每一个大方格边长为个。每一个大方格边长为1mm1mm，则每一个大方格的面积为，则每一个大方格的面积为1mm1mm2 2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm0.1mm，所以计，所以计数室的容积为数室的容积为0.1mm0.1mm3 3（1010-4-4mLmL）。）。Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences
11、,Hubei Normal University以以2525个中方格的计数板为例，设个中方格的计数板为例，设5 5个中方格中的总菌数为个中方格中的总菌数为A A，菌液稀释倍数为菌液稀释倍数为B B，则：，则：2510 25104 4BB1mL1mL菌液中的总菌数菌液中的总菌数=图图5-2 5-2 血球计数板侧面及两种类型的计数室血球计数板侧面及两种类型的计数室【基本原理基本原理】Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal University 图图 5-2 5-2 血球计数板血球计数板Central La
12、boratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal University【实验用品实验用品】1.菌种：酵母菌悬液。菌种：酵母菌悬液。2.仪器及其他：普通光学显微镜，血细胞计数板，盖玻片，擦镜仪器及其他：普通光学显微镜，血细胞计数板，盖玻片，擦镜纸，酒精灯，无菌毛细管，三角烧瓶。纸，酒精灯，无菌毛细管，三角烧瓶。【方法步骤方法步骤】1.菌悬液制备菌悬液制备2.检查血球计数板检查血球计数板3.加样品加样品4.显微镜计数显微镜计数5.清洗清洗Central Laboratory of BiologyCollege of Life Scie
13、nces,Hubei Normal University获得本实验成功的关键获得本实验成功的关键1 1）活细胞是透明的，因此在进行显微计数时应适当减低视野）活细胞是透明的，因此在进行显微计数时应适当减低视野亮度，以增大反差。亮度，以增大反差。2 2）进行显微计数时应先在低倍镜下寻找大方格的位置，找到）进行显微计数时应先在低倍镜下寻找大方格的位置，找到计数室后将其移至视野中央，再换高倍镜观察和计数。计数室后将其移至视野中央，再换高倍镜观察和计数。【注意事项注意事项】1 1）使用酒精灯时注意不要被火焰灼伤或烧到衣物。）使用酒精灯时注意不要被火焰灼伤或烧到衣物。2 2）取放过微生物培养物的接种环在放
14、回试验台前应记得再次在）取放过微生物培养物的接种环在放回试验台前应记得再次在火焰上灼烧灭菌，以免造成实验台污染。火焰上灼烧灭菌，以免造成实验台污染。3 3）用接种环在培养基斜面上刮取时动作要轻，不要将琼脂培养）用接种环在培养基斜面上刮取时动作要轻，不要将琼脂培养基一起刮起。基一起刮起。Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal University【实验报告实验报告】1.1.结果：表结果：表5-4 5-4 显微计数结果显微计数结果各中格中菌数各中格中菌数A AB B二室平均值二室平均值菌数菌数/mL/mL
15、1 12 23 34 45 5第一室第一室第二室第二室2.2.思考题思考题1 1）根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪）根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？2 2）某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计）某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1 12 2种可行的检测方法。种可行的检测方法。Central Laboratory of BiologyCollege of Life Sciences,Hubei Normal UniversityCentral laboratory of Biology生物学实验教学中心Thanks for your attention!